枸杞多糖对过氧化氢致血管内皮细胞损伤保护作用的研究

发布时间：2020-09-28 11:02

　　 目的本研究的主要目的是探讨枸杞多糖(LBP)对氧化应激致大鼠主动脉血管内皮细胞(RAEC)损伤的抗凋亡及抗氧化的保护作用,为进一步开发LBP的药用价值提供实验及理论依据。方法培养RAEC,采用CCK-8法筛选建立H2O2缺氧模型和给药LBP浓度。然后将RAEC随机分为5组:正常对照组、H2O2组、H2O2+LBP110μg/ml(low-LBPs treated,LT)组、H2O2+LBP220μg/ml(medium-LBPs treated,MT)组、H2O2+LBP440μg/ml(high-LBPs treated,HT)组;采用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力,丙二醛(MDA)水平,一氧化氮(NO)水平;Western-blot法检测细胞Bcl-2及Bax的表达及其两者的比值;倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化。使用PI3K/Akt通路的特异性抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin,W)对培养细胞进行干预,将细胞分为7组:正常对照组、H2O2组、H2O2+LBP440μg/ml组、H2O2+LBP440μg/ml+W组、W组、H2O2+W组、LBP440μg/ml组,采用Western-blot法检测各组细胞Bcl-2及Bax的表达及其两者的比值。结果1、LBP可以增加SOD活力与NO生成,同时降低MDA含量:与正常对照组比较,H2O2、LT、MT、HT组SOD活力及NO含量明显降低,MDA含量升高(P0.05);与H2O2组比较,LT、MT、HT组SOD活力及NO含量均升高(P0.05),MDA含量均降低(P0.05)。2、LBP可以上调Bcl-2表达并下调Bax表达:与正常对照组比较,H2O2、LT、MT、HT组Bcl-2表达量降低(P0.05),Bax表达量升高(P0.05);与H2O2组比较,LT、MT、HT组的Bcl-2表达量升高(P0.05),MT、HT组Bax的表达量下降(P0.05)。3、形态学表达:倒置显微镜观察,正常对照组细胞呈梭形,大小一致,边缘光滑清楚,核清晰,细胞核大小一致,呈圆形或椭圆形,核染色质均匀,细胞相互嵌合,呈铺路石状排列,仅见个别死细胞;H2O2组细胞皱缩,间隙变大,出现灶性细胞死亡;HT组细胞可逐渐重新贴壁,与正常细胞状态基本一致。4、渥曼青霉素可逆转Bcl-2及Bax的表达:给予渥曼青霉素干预后,与正常对照组比较,H2O2、H2O2+W组Bcl-2表达量下降,Bax表达量升高(P0.05);与H2O2组比较,H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W、LBP组Bcl-2表达量上升,H2O2+LBP、W、LBP组Bax表达下降,而H2O2+W组Bax表达量升高(P0.05);与H2O2+LBP组比较,H2O2+W组Bcl-2表达量下降,H2O2+W、LBP组Bax表达量上升(P0.05);与H2O2+LBP+W组相比,H2O2+W组Bcl-2表达量下降,LBP组Bcl-2升高,H2O2+W组Bax表达量升高(P0.05);与W组比较,H2O2+W组Bcl-2表达量下降,LBP组Bcl-2表达量上升,H2O2+W组Bax的表达量上升(P0.05);与H2O2+W组比较,LBP组Bcl-2表达量上升,Bax表达量下降(P0.05)。与正常对照组比较,H2O2、W、H2O2+W和LBP组Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);与H2O2组比较,H2O2+LBP、H2O2+LBP+W、W和LBP组Bcl-2/Bax比值上升(P0.05);与H2O2+LBP组比较,H2O2+LBP+W、W和H2O2+W组Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);与H2O2+LBP+W组相比,H2O2+W组Bcl-2/Bax比值下降,而LBP组Bcl-2/Bax比值上升(P0.05);与W组比较,H2O2+W组Bcl-2/Bax比值下降(P0.05);与H2O2+W组比较,LBP组Bcl-2/Bax比值上升(P0.05)。结论枸杞多糖可能通过抗氧化和抗凋亡作用发挥对过氧化氢致主动脉血管内皮细胞损伤的保护作用,且枸杞多糖可能通过PI3K/AKT通路发挥其抗凋亡的保护作用。
【学位单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

注：A：正常对照组，B：H2O2组，C：LBP 干预组图 1 大鼠主动脉内皮细胞形态学改变（200×）5.各组细胞培养液中 SOD 的活力及 MDA、NO 的含量与正常对照组比较，H2O2组 SOD 活力与 NO 含量明显下降，MDA 明显上升（P＜0.05）；与 H2O2组比较，MT、HT 组 SOD 活力升高，LT、MT、HT 组 NO 含量上升，LT、MT、HT 组 MDA 含量下降（P＜0.05），结果见表 4。表 4 不同剂量 LPB 对 H2O2诱导细胞的 SOD 活力、NO 及 MDA 的含量（x s）组别 重复次数 SOD 活力 MDA 含量 NO 含量正常对照组 3 15.891±2.320 3.664±0.264 4.876±0.171H2O2311.260±0.928*8.796±0.493*2.534±0.167*LT 312.403±1.194*7.090±0.394*#3.114±0.169*#MT 313.18±1.414*#5.266±0.284*#3.850±0.309*#HT 3 13.96±1.476#4.338±0.202*#4.272±0.370*#

大学硕士学位论文 5 不同剂量 LPB 对 H2O2诱导细胞的 Bcl-2、Bax 及 Bcl-2/Bax 表达（别 重复次数 Bcl-2 Bax trol 5 1.552±0.076 0.601±0.260 2O25 0.952±0.071*1.748±0.689*0T 5 1.155±0.034*#1.628±0.431*0T 5 1.200±0.050*#0.817±0.161#1.T 5 1.284±0.037*#0.700±0.287#2ol 组相比，*P<0.05；与 H2O2组相比，#P<0.05。

Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax表达

【参考文献】

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本文编号：2828709