补肺消积颗粒对气阴两虚证肺癌裸鼠消炎抑瘤作用及机制研究

发布时间：2020-10-09 21:51

　　 目的:补肺消积颗粒是荣远明教授根据多年临床经验治疗肺癌的基本方,治疗肺癌效果良好。本研究通过建立肺癌气阴两虚证模型,经补肺消积颗粒干预后,检测炎症相关指标及瘤体大小,评价补肺消积颗粒的消炎和抑瘤作用。并通过检测NLRP3炎症小体的表达,研究补肺消积颗粒消炎抑瘤的作用机制,从而为中医药防治肺癌提供理论和实验依据。方法:实验一:选取5-6周龄BALB/cA-nu雌鼠(体重18-22g)30只,随机分为空白对照组,气阴两虚对照组(模型组),阳性对照组(MCC950溶液),低中高三种浓度中药组,共6组,每组5只。除空白对照组外,其余5组裸鼠根据相关文献用温热中药灌胃加“刨花烟熏”建立气阴两虚模型,再将非小细胞系肺癌细胞A549接种到裸鼠右后臀部,待成瘤后定期灌服生理盐水、阳性药稀释液及补肺消积颗粒稀释液,观察并记录裸鼠一般生活状况,肿瘤体积,抑瘤率、自主活动。实验末即治疗后第28天,统一以眼底静脉取血并颈椎脱臼处死,取血清行ELISA法检测IL-1β、IL-18、丙二醛(MDA),剥离皮下肿瘤结节用于免疫组化检测NLRP3,用Western Blot法检测MDA、IL-1β、IL-18、NLRP3。实验二:选取5-6周龄BALB/cA-nu雌鼠(体重18-22g)15只,随机分为空白对照组,气阴两虚对照组,脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)+气阴两虚对照组(简称LA组,LPS联合ATP具有促进炎症的作用)共3组,每组5只。除空白对照组仅接种肺癌A549细胞,其余2组裸鼠进行肺癌气阴两虚证造模,待成瘤后定期灌服生理盐水和(LPS+ATP)稀释液。其余方法同实验一。结果:实验一:对比观察气阴两虚组和空白组裸鼠的生存状况,记录裸鼠的自主活动、肿瘤体积、抑瘤率,结果显示该裸鼠模型的症状与肺癌气阴两虚证的病症模型相吻合;同时利用实验室检测结果显示,ELISA和Western Blot结果均显示气阴两虚组中MDA含量显著高于空白组(P0.05),而IL-1β、IL-18(作为IL-1的活性成员)这两个指标实验中的含量均高于空白组,且多数结果具有统计学有意义(P0.05)。通过与气阴两虚组(模型组)比较,发现高浓度中药组裸鼠一般情况有所好转,活动能力增强,瘤体增大不显著。同时免疫组化也提示高浓度中药组更能有效降低NLRP3阳性指数,血清和蛋白结果均显示高浓度中药组与模型组相比在抑制MDA、IL-1β和IL-18等气阴两虚评价因子及NLRP3炎症小体方面有较好的作用(P0.05)。实验二:与气阴两虚组比较,LA组裸鼠的站立次数和活动步数均有所下降;同时LA组血清和蛋白中IL-1β和IL-18的表达均高于气阴两虚组(P0.05),血清中MDA含量也有显著上升(P0.05),免疫组化结果也提示LA组中NLRP3阳性表达指数高于气阴两虚组(P0.05),而蛋白表达虽有升高,但差异不明显(P0.05)。结论:1、补肺消积颗粒能有效改善肺癌气阴两虚证裸鼠的一般生活状态和肿瘤生长情况,降低气阴两虚评价因子MDA、IL-1β、IL-18以及NLRP3炎症小体的表达。2、NLRP3炎症小体与肺癌气阴两虚证密切相关,NLRP3炎症小体在一定程度上能够促进肺癌气阴两虚证的进展。3、具有益气养阴功效的验方补肺消积颗粒可能通过下调肺癌气阴两虚证裸鼠中NLRP3炎症小体的表达,进而起到消炎抑瘤的作用。
【学位单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

小鼠肿瘤组织

注：C：空白对照组；Q：气阴两虚对照组（模型组）；Y：阳性对照组；L：低浓度中药组；M：中浓度中药组；H：高浓度中药组图 4 NLRP3 免疫组化（×200）图 5 各组 NLRP3 免疫组化阳性指数比较注：C：空白对照组；Q：气阴两虚对照组（模型组）；Y：阳性对照组；L：低浓度中药组；M：中浓度中药组；H：高浓度中药组3.5 各组裸鼠血清 ELISA 法检测 MDA、IL-1β、IL-18 的结果0.001.002.003.00C Q Y L M H免疫组化阳性指数*****

计算肿瘤体积，V(cm3)= ab2/2(a 为瘤体最长径，b 为最短径)。实验末即治疗后第 28 天，统一以眼底静脉取血并颈椎脱臼处死，剥离皮下肿瘤结节称瘤重。肿瘤组织见图 9，图 10；统计分析见表 4。结果：肿瘤体积方面，LA 组比气阴两虚组虽有增大，但差异不明显（P＞0.05）；瘤重方面，LA 组与气阴两虚组比较，瘤重虽有增重，但不明显（P＞0.05）。表 4 各实验组瘤体和瘤重变化情况(x±s)组别 肿瘤体积（cm3） 瘤重（g）空白对照组 1305.36±156.30 1420.08±101.99气阴两虚对照组 1676.79±227.43 1665.80±189.25LA 对照组 1862.27±316.85 1880.11±315.79注：与空白对照组比较，aP＜0.05；与气两虚对照组比较，bP＜0.05；

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