7—去甲基银杏双黄酮对体外培养的人皮脂腺细胞胰岛素样生长因子1诱导皮脂生成的抑制作用

发布时间：2020-10-09 22:04

　　背景:痤疮是一种常见的发生于毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤疾病。它的致病因素有很多,包括雄激素水平增高,皮脂分泌的增多,微生物感染和炎症反应等。其中,皮脂分泌的增多是痤疮发病的一个重要因素。皮脂由皮脂腺分泌,是维持皮肤功能的重要因素。在青春期,雄激素和胰岛素样生长因子-1(Insulin like growth factor,IGF-1)等促进了皮脂的生成。过量的皮脂改变了毛囊周边微环境进而易引起痤疮的形成。治疗痤疮的方法有口服抗生素、维甲酸等,外用药物如抗生素、阿达帕林、过氧化苯甲酰等以及光动力治疗等物理疗法。目前越来越多的中药被用于痤疮的治疗,连翘、蒲公英、金银花、薏苡仁、白芷、大黄、紫花地丁等,其中黄酮类如山柰酚和槲皮素是目前最受关注的中药活性提取物。Lim Young-Hee等检测到山柰酚浓度依赖性地抑制痤疮丙酸杆菌的生长。此外,在体外实验中,山奈酚和槲皮素与克林霉素或红霉素的联合使用对痤疮丙酸杆菌有协同抑制作用,而且黄酮类与抗生素的联合使用对抗生素耐药的痤疮丙酸杆菌也有抑制作用。7-去甲基银杏双黄酮(Bilobetin)是银杏叶的天然成分之一,在大鼠实验中,可以降血脂、降低肝脏和肌肉中脂质代谢产物的沉积,但是其对皮脂生成是否有抑制作用却未见文献报道。本实验体外培养人皮脂腺细胞,利用IGF-1诱导制作脂质生成模型以进一步探讨bilobetin对脂质生成的影响及其作用机制。目的: 探讨bilobetin对IGF-1诱导的体外培养的人皮脂腺细胞皮脂生成的影响和作用机制。方法: 1.MTT法检测不同浓度的bilobetin对人皮脂腺细胞活性的影响。2.H~3-TdR掺入法检测不同浓度的bilobetin对人皮脂腺细胞生长的影响。3.油红O染色实验检测bilobetin对IGF-1诱导的脂质生成细胞模型中脂质生成的影响。4.薄层色谱分析法进行bilobetin对IGF-1诱导生成的脂质的分离、鉴定和定量。5.荧光素酶报告实验检测bilobetin对IGF-1诱导的人皮脂腺细胞中角鲨烯合酶活性的影响。6.Western blot方法检测bilobetin对IGF-1诱导的人皮脂腺细胞中脂质生成相关调节因子SREBP1/2、SCD、FDFT1及细胞信号分子IGF-1、IGF-1-R、ERK等表达水平的变化。结果: 1.不同浓度的(1μM、2μM、4μM)的bilobetin对体外培养的人皮脂腺细胞都没有细胞毒性。2.IGF-1促进人皮脂腺细胞的生长,但bilobetin预处理显著抑制IGF-1诱导的人皮脂腺细胞的生长。3.IGF-1显著促进人皮脂腺细胞的脂质生成,但bilobetin预处理浓度依赖性的抑制IGF-1诱导的人皮脂腺细胞脂质生成。4.Bilobetin显著抑制IGF-1促进的人皮脂腺细胞脂质生成,包括角鲨烯、蜡酯、甘油三酯和胆固醇,特别是显著抑制角鲨烯和蜡酯的生成。5.Bilobetin显著抑制IGF-1对角鲨烯合酶启动子的活性的促进作用。6.Bilobetin显著下调脂质生成相关转录因子SREBP1/2及脂质生成相关的酶SCD和FDFT1的表达。7.IGF-1激活皮脂腺细胞后,IGF-1受体和AKT的磷酸化水平显著提高。用bilobetin预处理不影响IGF-1诱导的IGF-1-R的磷酸化,而AKT的磷酸化被bilobetin显著抑制。相反,IGF-1诱导的ERK1/2磷酸化不受bilobetin的抑制。结论: 1.Bilobetin显著抑制IGF-1对体外培养的人皮脂腺细胞脂质生成,包括角鲨烯、蜡酯、甘油三酯和胆固醇,其中显著抑制角鲨烯和蜡酯的生成。2.Bilobetin可能是通过抑制角鲨烯合酶启动子的活性,下调脂质生成转录因子和脂质生成相关的酶如SREBP1/2、SCD和FDFT1的表达来抑制IGF-1诱导的体外培养人皮脂腺细胞脂质生成。3.Bilobetin通过AKT磷酸化信号通路抑制了IGF-1诱导的人皮脂腺细胞脂质生成。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

培养的,脂质,皮脂腺,蜡酯

去甲基银杏双黄酮对体外培养的人皮脂腺细胞增、4μM 浓度的 bilobetin 处理的人皮脂腺细胞增（P＜0.01）（图 4.1）。银杏双黄酮对体外培养的人皮脂腺细作用的胸苷摄取实验表明 IGF-1 会促进皮脂腺细会显著抑制 IGF-1 诱导的细胞生长（图 4.2A）色实验显示 IGF-1 会促进皮脂腺细胞的脂质生成制 IGF-1 诱导的脂质生成（图 4.2B）。析法对脂质进一步分离、鉴定和定量显示 bilo皮脂腺细胞的脂质生成，包括角鲨烯和蜡酯，b

培养的,脂质,角鲨烯,蜡酯

4.2 7-去甲基银杏双黄酮对体外培养的人皮脂腺细胞的长和脂质成的抑(4.2A) Bilobetin 对体外培养的皮脂腺细胞生长的影响。SV-sebocytes 在没有 FBS 的培中孵育 1 天，然后在 1 μCi 的[3H]标记的胸苷中用 IGF-1 和 bilobetin 孵育 2 天。在闪烁后数据用和对照组的相对百分比表示。统计学资料用均值±标准差来表示，*P＜0.0ilobetin 显示出抑制 IGF-1 促进细胞生长的作用。(4.2B) 细胞用 bilobetin 和 IGF-1 按图度孵育 1 天。用 Oil Red O staining 法检测中性脂质。(4.2C) 用 TLC 法检测 bilobetinGF-1 促进的脂质生成的影响。Bilobetin 显著抑制角鲨烯和蜡酯的产生。(4.2D)对角鲨烯启动子活性的影响。细胞用 1 MOI 角鲨烯合酶-luc 报告腺病毒转染，然后用 IGF-1ilobetin 处理 1 天。裂解细胞并检测荧光素酶活性。重复 3 次实验，统计学数据用提高倍标准差来表示，*P<0.01。

脂质,调节因子,磷酸化,脂肪生成

作用机制免疫印迹实验研究 Bilobetin 对几种脂肪生成调节因子的表达。与我们致，IGF-1 处理可以导致脂肪生成转录因子的增加，SREBP-1 和 SRE如脂质生成酶角鲨烯合酶（FDFT1）和 SCD 的增加。bilobetin 预处理可制 IGF-1 诱导的脂质生成调节因子的增加（图 4.3A）。免疫印迹实验检测了 bilobetin 对细胞内信号传导的影响。当 IGF-1 激活细胞，IGF-1 受体和 AKT 的磷酸化水平显着提高。用 bilobetin 预处理F-1 诱导的 IGF-1-R 的磷酸化，而 AKT 的磷酸化被 bilobetin 显著抑制IGF-1 诱导的 ERK1/2 磷酸化不受 bilobetin 的抑制（图 4.3B）。这些结bilobetin 的作用机制主要是与其对 AKT 信号传导的抑制能力有关。

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