冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞雌激素及抗氧化功能的影响

发布时间：2020-10-16 03:29

【摘要】：冬凌草甲素是从唇形科植物冬凌草中分离的天然有机化合物,具有有较强的抗肿瘤、抗菌及抗突变作用,主要作为临床药物治疗各种癌症,且有显著疗效。近年来,冬凌草甲素的药用价值引起广泛关注,但目前没有冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞的毒性报道,因此,本实验首先建立卵巢颗粒细胞体外培养体系,在培养体系中添加不同浓度冬凌草甲素培养卵巢颗粒细胞,通过分析卵巢颗粒细胞内脂质过氧化产物含量、抗氧化剂及抗氧化能力、激素分泌的情况,探讨冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞抗氧化功能的影响。(1)实验一大鼠卵巢颗粒细胞体外培养体系建立取25-29日龄大鼠处死,无菌条件收取卵巢颗粒细胞,加入细胞培养板置于培养箱培养,显微镜观察卵巢颗粒细胞形态,HE染色和免疫组化鉴定颗粒细胞。结果卵巢颗粒细胞形态完好,细胞纯度在90%以上。实验结果表明建立的卵巢颗粒细胞体外培养体系可用于后期实验研究。(2)实验二冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞活力及分泌雌激素的影响收集卵巢颗粒细胞体外培养,同时在培养体系中添加不同浓度(0、7.5、10.0、12.5、15.0μg/m L)冬凌草甲素24h,CCK8检测细胞活力,试剂盒分析雌激素含量。结果随着冬凌草甲素给药浓度的增加,卵巢颗粒细胞增殖率降低,雌二醇分泌量逐渐减少,孕酮含量显著下降。结果表明冬凌草甲素抑制卵巢颗粒细胞增殖及雌激素分泌。(3)实验三冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞抗氧化能力的影响卵巢颗粒细胞体外培养体系中添加trolox及冬凌草甲素培养24h,TBA法和DNTB法分别检测卵巢颗粒细胞内MDA、GSH含量,ELISA检测抗氧化物酶活力,DCFH-DA探针和Hoechst 33342染色法检测ROS含量。结果随着冬凌草甲素给药浓度的增加,卵巢颗粒细胞内MDA含量增加,GSH含量降低,抗氧化酶(SOD、GSH-Px和CAT)活力下降,ROS含量增加;trolox干预组卵巢颗粒细胞内MDA含量明显减少,抗氧化物GSH含量、SOD、GSH-Px、CAT酶活力显著增加。结果表明冬凌草甲素抑制卵巢颗粒细胞抗氧化功能,trolox能缓解冬凌草甲素对卵巢颗粒细胞的氧化损伤。
【学位授予单位】：北京农学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285
【图文】：

不同培养时间原代卵巢颗粒细胞形态观察（100×）

不同培养时间卵巢颗粒细胞生长曲线图

敝脸鱿炙劳觥Ｍ?2 不同培养时间卵巢颗粒细胞生长曲线图3.2 卵巢颗粒细胞鉴定采用 HE 法对卵巢颗粒细胞进行染色，结果见图 3。在显微镜下可见贴壁的卵巢颗粒细胞形态完好，大小均一，轮廓清晰，呈多边形或梭型，细胞核染成深蓝色，呈卵圆形或不规则形，位于细胞中央，细胞浆染成淡红色并含有许多颗粒。
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本文编号：2842690