铁皮石斛挥发性成分的提取与抑菌效果研究

发布时间：2020-10-19 21:24

　　 铁皮石斛作为一种天然药食同源的食品,具有优良的保健作用,受到广大人们的关注。国内外有关铁皮石斛的化学成分和功效作用的文献、报道较多,但对铁皮石斛的抑菌作用研究较少。本研究以云南的铁皮石斛干品(铁皮枫斗)为原料,研究了同时蒸馏萃取法和索氏提取法提取铁皮石斛挥发性成分的工艺,对铁皮石斛同时蒸馏萃取法提取的挥发性成分和索氏提取法提取的粗提物进行了GC-MS成分分析,并进行了抑菌试验,旨在探讨和分析铁皮石斛挥发性成分的抑菌效果,为铁皮石斛的开发利用提供科学的依据和技术支撑。主要研究结果如下:1.铁皮石斛挥发性成分提取工艺研究选取同时蒸馏萃取法提取的铁皮石斛挥发性成分,以索氏提取法提取的铁皮石斛粗提物作为对照试验。两者均以水浴温度、料液比、提取时间为条件,进行单因素及L_9(3~4)正交试验。试验结果表明,同时蒸馏萃取法提取铁皮石斛挥发性成分优化工艺条件为水浴温度50℃,料液比1:25g/mL,提取时间3.5h,铁皮石斛挥发性成分的提取率达到1.63%。各因素的影响顺序为:提取时间料液比水浴温度。索氏提取法提取铁皮石斛粗提物的优化工艺条件为水浴温度45℃,料液比1:45 g/mL,提取时间4h,提取铁皮石斛粗提物的提取率达到3.98%。各因素的影响顺序为:提取时间水浴温度料液比。2.铁皮石斛挥发性成分的GC-MS分析对同时蒸馏萃取法提取铁皮石斛挥发性成分和索氏提取法提取铁皮石斛粗提物进行GC-MS成分分析与鉴定。试验结果表明,在同时蒸馏萃取法提取的铁皮石斛挥发性成分中共鉴定出51个化合物,其主要成分包括:植物甾醇(21.79%)、2,6-二叔丁基对甲酚(10.13%)、豆甾醇(8.57%)、天然维生素E(8.38%)、丁香酚(6.46%)、生育酚乙酸酯(5.26%)、菜油甾醇(4.89%)、反-2-己烯醛(2.98%)、芳樟醇(1.95%)、松油醇(1.92%)、苯酚(0.32%)。索氏提取法中铁皮石斛粗提物鉴定出44个化合物。其主要成分为:邻苯二甲酸二丁酯(53.01%)、植物甾醇(20.20%)、2,6-二叔丁基对甲酚(13.09%)、甘菊蓝(2.41%)、丁香酚(1.21%)。分析了两种提取方法得到的铁皮石斛提取物的主要成分种类及其相对含量。3.铁皮石斛挥发性成分的抑菌效果及抑菌成分分析选取革兰氏阳性菌:金黄色葡萄球菌,革兰氏阴性菌:大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和阪崎肠杆菌四种致病菌作为本试验的供试菌。采用滤纸片法,根据抑菌圈直径大小分别得出两种方法提取的铁皮石斛挥发性成分及粗提物对四种菌的抑制效果。试验结果表明,同时蒸馏萃取法提取的铁皮石斛挥发性成分和索氏提取法提取的铁皮石斛粗提物对四种供试菌的抑制作用大小顺序均为:金黄色葡萄球菌?阪崎肠杆菌?大肠埃希氏菌?鼠伤寒沙门氏菌。采用倍比稀释法测定两种方法提取的铁皮石斛挥发性成分及粗提物对供试菌的最低抑菌浓度,结果表明,两种提取方法提取的铁皮石斛挥发性成分及粗提物对大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为10mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5 mg/mL。金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度最低。同时蒸馏萃取法中铁皮石斛挥发性成分的抑菌作用强于索氏提取法中铁皮石斛粗提物的抑菌作用。铁皮石斛挥发性成分及粗提物均对革兰氏阳性菌的抑制作用更强。由试验结果可知,铁皮石斛挥发性成分中的主要抑菌物质有:植物甾醇类、丁香酚、2,6二叔丁基对甲酚(BHT)、松油醇、芳樟醇、反-2-己烯醛、苯酚等。
【学位单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.2;R285.5
【部分图文】：

称其质量，并按照下列公式计算样品提取率。每个试验设三个平行。铁皮石斛挥发性成分提取率（%）=[提取物质量(g)/样品质量(g)]×100图2-1 同时蒸馏萃取法装置示意图Figure 2-1 The picture of Simultaneous Distillation-Extraction device1.3.2.1同时蒸馏萃取法的单因素试验设计（1）水浴温度对铁皮石斛挥发性成分提取率影响的研究 准确称取 5g 铁皮石斛样品，用蒸馏水浸泡样品 3h 后, 加入同时蒸馏萃取法装置中, 按料液比为 1:40 添加乙醚溶剂(g/mL),在水浴温度 45℃、50℃、55℃、60℃、65℃的条件下，恒温加热回流提取 2h，提取结束后得到铁皮石斛挥发性成分，计算其提取率。设三个平行取平均提取

图 2-2 索氏提取器装置示意图 2-2 The picture of Soxhlet Extraction dev试验设计斛粗提物提取率影响的研究 准确，按料液比为 1:40 添加石油醚溶55℃的条件下，恒温提取 2h，提取个平行取平均提取率得到铁皮石斛提取率的影响。斛粗提物提取率影响的研究 准确称，按料液比 1:20、1:30、1:40、1:5条件下，恒温提取 2h，提取结束后取平均提取率得到铁皮石斛粗提物影响。石斛粗提物提取率影响的研究 准

（Sterile water） I 10mg/mL 土霉素（10mg/m对照和阳性对照：无菌水、10mg/mL 土霉素对金黄色葡萄球菌的ative control and positive control: Result of bacteriostatic experimentconcentration of 10mg/mL oxytetracycline on Staphylococcus aureu法提取的铁皮石斛提取物抑菌作用的定性试验结果同时蒸馏萃取法提取的铁皮石斛挥发性成分和索氏提取 40、20、10、5、2.5、1.25mg/mL 的浓度下对四种供试希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌的抑菌圈直径大小石斛提取物的抑菌作用强弱。
【参考文献】

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本文编号：2847745