川芎嗪对LPS诱导AKI小鼠肾内皮细胞糖层损伤的保护作用及其机制的研究

发布时间：2020-10-20 22:25

　　 [目的]急性肾损伤(AKI)是临床综合征中常见且复杂的疾病,肾功能的丧失主要是由于肾小球滤过迅速下降所致。肾小球滤毛细血管壁在阻止分子量较大的溶质从血管中渗出起重要作用,作为其组份之一内皮细胞被糖萼覆盖,糖萼是由蛋白多糖和可溶性生物大分子组成的一种带负电荷的类似渔网样结构,是肾小球壁高选择性通过的重要组份,HS作为糖萼的重要构成成分之一,其破坏或者降解将涉及毛细血管等微循环内皮细胞的形态和功能损伤。川芎嗪作为一种天然化合物,是从川芎中提取的活性生物碱,具有对抗体内炎症、抗癌、抗氧化、抗凋亡等药理作用。我们研究目的就是探讨脂多糖诱导AKI的机制,用川芎嗪预先处理后,通过肾脏组织病理学观察,尿蛋白、Scr、BUN、组织和细胞MDA、ROS、SOD等氧化指标检测及肾脏和内皮细胞HS荧光检测,研究TMP对LPS诱导AKI的作用机制,评价TMP对LPS诱导AKI预防和治疗的效果,为AKI的临床诊疗提供新的理论依据。[方法]体内实验:把成年健康的雄性C57BL/6小黑鼠随机分成5组:正常组(control组)、模型组(LPS 组 10mg/kg)、治疗组(LPS+TMP 组,50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg),正常组与模型组给予生理盐水灌胃1周,治疗组分别给予TMP(50mg/kg、100mg/kg、200 mg/kg)灌胃1周,第7天灌胃1h以后腹腔注射LPS,24 h后留血清和肾保存备用。HE明确小鼠肾脏病理变化及病理学评分,用EB染色法测量肾毛细血管的渗透性,用相应试剂盒检测BUN、Scr及组织中SOD、MDA、ROS,免疫荧光检测肾组织中HS的含量。体外实验:把HUVEC分成 5 组为正常、模型(LPS,1 μg/mL)、治疗(TMP+LPS,100μM/ml,200μM/ml,300 μM/ml),用相应试剂盒检测细胞中SOD、MDA,免疫荧光检测细胞中ROS的含量,MMP的表达变化及细胞膜表面HS的含量。[结果]与正常组相比,模型组小鼠肾组织损伤明显严重,肾组织外渗的伊文思蓝量、BUN、Scr浓度明显上升,而治疗组中,尤其是中高剂量治疗组,有效减轻肾损伤程度,能显著降低肾组织外渗的伊文思蓝量、BUN、Scr浓度明显降低。同时,川芎嗪通过减少体内应激反应及保护线粒体膜电位等抑制LPS所导致的糖萼脱落或降解,最终达到保护内皮糖萼完整性的目的,保护了肾小球微血管内皮的完整性,进而缓解了 LPS诱导的AKI。[结论]川芎嗪通过保护线粒体膜电位,进而减少体内氧化应激反应等途径,进而抑制LPS所导致的内皮糖萼中主要成分HS的脱落或降解,最终达到保护内皮糖萼完整性的目的,从而保护肾小球滤过屏障功能的完整性,有助于减轻脂多糖诱导的急性肾损伤,表明川芎嗪保护内皮糖萼的完整性和有助于减轻LPS诱导的急性肾损伤,保护肾小球屏障的完整性可能是治疗LPS诱导的AKI的潜在候选药物。
【学位单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

将ＰＢＳ覆于组织上，３?ｍｉｎ／次，弃去ＰＢＳ，重复三次，将稀释好的ＤＡＰＩ均匀滴于载玻片的组织上，孵育８分钟，注意避光。??轻甩掉０八？１，将？８５覆于组织上，３?１１１丨１１／次，弃去？８５，重复三次，然后封片，于奥林巴斯荧光光学显微镜下观察并拍摄。??细胞活力测定??ＴＴ法测定ＨＵＶＥＣ的存活数量，将密度为４Ｘ?ｌ〇５／ｍｌ的ＨＵＶＥＣ加入３７°Ｃ的培养箱中繁育，然后在加入不同浓度（５〇ｎＭ、１００＿、２０〇ｎＭ４００?ｍＭ）的ＴＭＰ存在及空白孔（等体积生理盐水）孵育２４小时，２４２〇ｎｌ的ＭＴＴ（５?ｍｇ／ｍｌ），继续孵育４?ｈ。弃去培养基，然后添加１５０?ｕｌ?Ｄ震荡器上轻轻摇晃１０?ｎｉｉｎ，使孔内的晶体溶化完全。用酶标仪检测各果以百分比表示，未行任何处理组的活细胞数量为１００％。如图１浓度达到４００?ｐＭ时，将会出现细胞毒性。??

Ｂｕｎ和Ｓｃｒ均会上升［６］。在使用ＬＰＳ?（脂多糖）注入小鼠体内１２ｈ后建??立的ＡＫＩ模型中，我们检测血尿素氮和血肌酐的浓度变化情况。我们的实验结果??表明（图２）?：?ＬＰＳ组Ｂｕｎ和Ｓｃｒ的浓度与正常组相比明显增加，对于治疗组，尤??其是中、高剂量治疗Ｂｕｎ和Ｓｃｒ的含量明显低于模型组，同时也高于正常组，这??提示我们应用ＬＰＳ成功诱导ＡＫ丨模型，同时也表明ＴＭＰ能减轻ＬＰＳ诱导的ＡＫＩ。??６０，?＃?２．５，??ｔｉｉｉｌｉｉｌｉｉｉｉ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＳ?５０?１００?２００?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＳ?５０?１００?２００??ＬＰＳ＋ＴＭＰ（ｍｇ／ｋｇ）?ＬＰＳ＋ＴＭＰ（ｍｇ／ｋｇ）??图２?ＴＭＰ对ＬＰＳ诱导的ＡＫＩ模型中ＢＵＮ及Ｓｃｒ的含量变化影响。（＃代表ＬＰＳ组与Ｃｏｎｔｒｏｌ??组对比，／５＜０．０丨；＊＊代表１＾５＋丁１＾（１０〇１１＾／＾）组与１＾３组对比，／５＜０．０丨；＊＊＊代表１＾５＋丁１＾??（２００?ｍｇ／ｋｇ）组与?ＬＰＳ?组对比，尸?＜?０．０１）??Ｆｉｇｕｒｅ?２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＴＭＰ?ｏｎ?ＢＵＮ?ａｎｄ?Ｓｃｒ?ｃｏｎｔｅｎｔｓ?ｉｎ?ＡＫＩ?Ｍｍｏｄｅｌ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＬＰＳ．?（＃?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ??ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＬＰＳ?ａｎｄ?Ｃｏｎｔｒｏｌ，?Ｐ?＜?０．０１；?＊＊?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＬＰＳ＋ＴＭＰ?（１００??ｍｇ／ｋｇ）?ａｎｄ?ＬＰＳ

?滨州医学院硕士学位论文???２．川芎嗪能够缓解ＬＰＳ诱导的肾脏病理变化??在光镜下观察可见（图３），与正常组相比，模型组肾脏组织病理损害明显，??如肾小球萎缩，里面结构不清晰，肾小球囊腔扩张、肾小管上皮细胞坏死、脱落、??空泡形成，间质水肿等改变，病理评分明显升高。而治疗组肾小球萎缩，肾小球??囊腔扩张不明显或减轻，肾小管上皮细胞坏死、空泡形成减少，间质水肿减轻，??病理评分明显低于模型组，而高于正常组。??
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本文编号：2849237