基于核磁共振代谢组学的大黄素对HepG2细胞抗癌活性研究
发布时间：2020-10-24 11:12
肝癌是全世界最常见的癌症之一,发病率较高,常用手术或癌症特效药进行治疗,费用较高,并且会产生副作用。而中药中的某些成分具有抗癌活性,提取工艺简单且毒性较低,可以筛选出来作为有效抗肝癌的药物。大黄素是从中药何首乌中提取的一种有效药物,临床研究中发现大黄素具有良好的抗癌活性。然而,大黄素介导的抑制HepG2细胞生长和细胞毒性的分子机制尚未完全阐明。本论文选用HepG2细胞作为受体细胞,研究大黄素的抗肿瘤作用机制。首先运用MTT方法研究大黄素对HepG2细胞的增殖情况,我们发现大黄素可以抑制HepG2细胞的增殖,而且有明显地时间、剂量效应。之后我们根据不同时间点的IC5o值,将细胞分为空白对照组,低剂量、中剂量和高剂量给药组,最终选择对细胞样品的1HNMR数据进行正交信号矫正-偏最小二乘法分析(OSC-PLS-DA),并对胞内小分子代谢物进行相对定量分析。结果表明大黄素给药后许多内源代谢物含量显著改变。利用qRT-PCR方法分析与糖酵解相关基因的变化,我们发现大黄素可明显下调糖酵解相关的HKⅡ,PKM2和LDHA的基因水平。同时我们用流式细胞术分析胞内氧化物ROS的含量及细胞周期与凋亡情况,发现大黄素可增加胞内ROS含量、扰乱细胞周期并诱导细胞凋亡。综合相关网络分析我们认为大黄素可以通过影响HepG2细胞能量代谢、氨基酸代谢变化以及影响氧化应激系统来诱导细胞凋亡。
【学位单位】：南京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 大黄素抗肿瘤作用及相关机制研究
1.1.1 诱导细胞凋亡
1.1.2 影响细胞周期
1.1.3 抑制肿瘤细胞迁移
1.1.4 抑制各种酶的活性
1.1.5 抑制与肿瘤相关的血管生成
1.1.6 与其他抗肿瘤药物的协同作用
1.2 代谢组学研究进展
1.2.1 代谢组学简介
1.2.2 代谢组学分析技术
1.2.3 代谢组学数据分析方法
1.2.4 细胞代谢组学研究进展
2 基于核磁共振代谢组学的大黄素对HepG2细胞抗癌活性研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 实验溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏、传代及冻存
2.2.2 MTT法检测细胞活力
2.2.3 核磁测试样品处理
1H NMR测试'> 2.2.4 1H NMR测试
1H NMR数据预处理'> 2.2.5 1H NMR数据预处理
2.2.6 代谢物指认
2.2.7 代谢组学数据统计分析
2.2.8 代谢物相关网络分析
2.2.9 荧光定量PCR实验
2.2.10 胞内ROS检测
2.2.11 流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况
2.3 实验结果
2.3.1 大黄素对HepG2细胞活力的抑制作用
2.3.2 代谢物指认
2.3.3 一维氢谱的多元统计学分析
2.3.4 大黄素对HepG2细胞中糖酵解基因的调控作用
2.3.5 流式细胞术对HepG2细胞的门控策略分析
2.3.6 大黄素引起HepG2细胞内ROS含量的变化
2.3.7 大黄素对HepG2细胞周期及细胞凋亡的影响
2.4 结果讨论
2.4.1 能量代谢
2.4.2 氨基酸代谢
2.4.3 氧化应激
2.5 本章小结
2.6 总结与展望
致谢
参考文献
【参考文献】
本文编号：2854387
【学位单位】：南京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
1.1 大黄素抗肿瘤作用及相关机制研究
1.1.1 诱导细胞凋亡
1.1.2 影响细胞周期
1.1.3 抑制肿瘤细胞迁移
1.1.4 抑制各种酶的活性
1.1.5 抑制与肿瘤相关的血管生成
1.1.6 与其他抗肿瘤药物的协同作用
1.2 代谢组学研究进展
1.2.1 代谢组学简介
1.2.2 代谢组学分析技术
1.2.3 代谢组学数据分析方法
1.2.4 细胞代谢组学研究进展
2 基于核磁共振代谢组学的大黄素对HepG2细胞抗癌活性研究
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 实验溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏、传代及冻存
2.2.2 MTT法检测细胞活力
2.2.3 核磁测试样品处理
1H NMR测试'> 2.2.4 1H NMR测试
1H NMR数据预处理'> 2.2.5 1H NMR数据预处理
2.2.6 代谢物指认
2.2.7 代谢组学数据统计分析
2.2.8 代谢物相关网络分析
2.2.9 荧光定量PCR实验
2.2.10 胞内ROS检测
2.2.11 流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况
2.3 实验结果
2.3.1 大黄素对HepG2细胞活力的抑制作用
2.3.2 代谢物指认
2.3.3 一维氢谱的多元统计学分析
2.3.4 大黄素对HepG2细胞中糖酵解基因的调控作用
2.3.5 流式细胞术对HepG2细胞的门控策略分析
2.3.6 大黄素引起HepG2细胞内ROS含量的变化
2.3.7 大黄素对HepG2细胞周期及细胞凋亡的影响
2.4 结果讨论
2.4.1 能量代谢
2.4.2 氨基酸代谢
2.4.3 氧化应激
2.5 本章小结
2.6 总结与展望
致谢
参考文献
【参考文献】
相关期刊论文 前4条
1 陈英玉;李静;胡建达;郑静;郑志宏;祝亮方;陈鑫基;林振兴;;大黄素对HL-60/ADR耐药细胞多药耐药逆转作用的研究[J];中国实验血液学杂志;2013年06期
2 ;Effects of emodin on gene expression profile in small cell lung cancer NCI-H446 cells[J];Chinese Medical Journal;2007年19期
3 王心华,吴淑英,甄永苏;大黄素对血管生成的抑制作用(英文)[J];药学学报;2004年04期
4 蒋红卫,夏结来;偏最小二乘回归及其应用[J];第四军医大学学报;2003年03期
本文编号：2854387
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