姜黄素调控NKD2-Wnt-CXCR4通路抑制结肠癌细胞的侵润转移

发布时间：2020-10-25 22:11

　　 目的:目前研究发现姜黄素可以有效抑制体内外肿瘤细胞生长,同时具有抑制肿瘤细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用。然而,其具体作用机制尚未明确。本研究旨在探讨姜黄素对人结肠癌SW620细胞株的影响,以更好地了解其机制。方法:本实验通过MTS检测姜黄素对结肠癌SW620细胞活性的影响;通过Western blotting、Real-time qPCR检测姜黄素对体外结肠癌SW620细胞内相关Wnt信号通路基因(NKD2、Axin、β-catenin和TCF4)、EMT表型特定标记基因(E-cadherin和Vimentin)以及趋化因子CXCR4的蛋白和mRNA表达情况;通过Western blotting分别检测转染NKD2 siRNA和Wnt信号通路活化剂,观察Wnt通路和EMT的表达情况;运用以上方法检测转染NKD2 siRNA或CXCR4表达质粒,再通过姜黄素处理,观察结肠癌细胞内NKD2和CXCR4的表达情况。结果:姜黄素能明显抑制结肠癌SW620细胞的增殖活性。姜黄素能显著下调β-catenin、TCF4、Vimentin 以及 CXCR4 的表达,上调 NKD2、Axin 和 E-cadherin的表达,且呈剂量依赖性。转染NKD2 siRNA和Wnt信号通路活化剂,能激活Wnt信号通路。转染NKD2 siRNA或CXCR4表达质粒,能明显上调姜黄素处理后细胞内β-catenin、TCF4、Vimentin以及CXCR4的表达,同时能下调NKD2和E-cadherin的表达水平。结论:姜黄素通过诱导NKD2基因的表达,能明显抑制结肠癌细胞内Wnt信号通路和EMT,从而抑制趋化因子CXCR4基因表达,具有抑制肿瘤细胞侵袭转移的潜能。
【学位单位】：浙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
一、实验研究
    （一） 实验材料
        1. 实验细胞株
        2. 实验药品和器材
    （二） 实验方法
        1. 姜黄素溶液的配制
        2. 细胞复苏
        3. 细胞培养和转染
        4. 检测姜黄素对细胞生长的抑制率（MTS法）
        5. Western blot检测蛋白变化情况
        6. Real-time qPCR检测mRNA变化情况
    （三） 统计分析
二、结果
    1. 姜黄素对结肠癌细胞SW620的增殖活性影响
    2. 不同浓度姜黄素对Wnt信号通路和EMT相关基因表达的影响
    3. 不同浓度姜黄素对NKD2和CXCR4基因表达的影响
    4. 转染NKD2 siRNA或Wnt信号通路活化剂,观察Wnt信号通路相关基因表达的影响
    5. 通过转染NKD2 siRNA,观察姜黄素对Wnt信号通路相关基因表达的影响
    6. 通过转染NKD2 siRNA,观察姜黄素对CXCR4基因表达的影响
    7. 转染CXCR4表达质粒,观察姜黄素对EMT及CXCR4表达水平的影响
三、分析与讨论
四、结论
参考文献
附图
致谢
文献综述
    参考文献

【参考文献】

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本文编号：2856031