逍生散颗粒剂对干眼小鼠模型角结膜组织TLR4及NF-κB影响的实验研究

发布时间：2020-10-26 19:26

　　 目的:1.逍生散颗粒剂对小鼠干眼模型角结膜组织TLR4、NF-κκB的抑制作用。2.探讨逍生散颗粒剂通过免疫炎性抑制达到治疗干眼的目的。方法:将健康6周龄C57BL/6雌性小鼠120只,体重20g-25g之间,随机分6组,即正常组、模型组、阴性对照组、低、中、高剂量组,每组20只。除正常组外,其余组别小鼠通过后肢根部皮下注射氢溴酸东莨菪碱联合吹风诱导建立实验性干眼模型。各组分别于治疗7d、14d、21d测定其泪液分泌量(schirmer test,SIT)、泪膜破裂时间(break up time,BUT)及角膜染色情况(fluorescein staining,FL),并在每次检测后分批处死小鼠,取角结膜组织,进行HE染色、免疫组化及 Western blotting。结果:在治疗剂量上,逍生散颗粒剂治疗C57BL/6小鼠7d、14d、21d后中、高剂量组SIT、BUT、FL检测值与模型组比差异均有统计学意义(p0.05),中、高剂量组间比差异无统计学意义(p0.05),且二者与低剂量组比差异有统计学意义(p0.05),阴性对照组与模型组差异无统计学意义(p0.05)。逍生散颗粒低剂量组治疗7d、14d后与模型组比SIT无统计学差异(p0.05),治疗7d、14d及21d与模型组比BUT、FL有统计学差异(p0.05)。说明逍生散颗粒中、高剂量组治疗干眼效果明显,低剂量组治疗效果不明显,阴性对照组治疗无效。在治疗时间上,正常组、模型组、阴性对照组在治疗7d、14d、21d后SIT、BUT及FL检测值差异均无统计学意义(p0.05),逍生散颗粒剂中、高剂量组治疗7d、14d、21d后各时间之间SIT、BUT及FL检测数值差异均有统计学意义(p0.05)。逍生散颗粒低剂量组治疗7d、14d之间SIT无统计学差异(p0.05),治疗7d、14d、21d之间BUT无统计学差异(p0.05),FL值差异有统计学意义(p0.05)。表明随着用药时间的延长逍生散颗粒中、高剂量组的治疗作用愈加明显,21d效果最佳,而低剂量SIT及BUT在时间上的差别不明显。HE染色显示逍生散颗粒剂中剂量组角结膜组织随着时间的推移上皮细胞修复性增生,且排列逐渐紧密规则,直至21d角结膜组织逐渐恢复最佳。角结膜组织TLR4及NF-κB免疫组化染色显示模型组与阴性对照组角结膜上皮细胞呈棕色强阳性表达,治疗7d有阳性表达,14d阳性表达减少,21d基本无异常阳性表达(p0.05)。Western blotting结果显示角结膜组织TLR4及NF-κB蛋白量表达在治疗7d、14d、21d后差异有统计学意义(p0.05),且随着用药时间的延长蛋白表达量逐渐减少,21d蛋白表达量最低。结论:1.采用东莨菪碱联合吹风诱导C57BL/6小鼠建立干眼模型成功率高,且具有与人类相似的病理过程。2.TRL4及NF-κB在小鼠干眼模型中被激活,且加速了小鼠干眼的发病。逍生散颗粒剂治疗能够有效抑制TRL4及NF-κB的活性,以中、高剂量组治疗21d的效果最优。3.逍生散颗粒剂通过抑制TRL4及NF-κB的活性,降低了免疫炎症因子的释放,进一步稳定泪膜,达到治疗干眼的目的。
【学位单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R-332;R285.5
【部分图文】：

意义〇７＝０．００４，产０．０００，内尸０．０００，?ｐ＜０．０１），其中中、高剂量组与低剂量间??治疗差异均有统计学意义（ｐ＜０．０５），且中、高剂量组间治疗差异均无统计学意义??（ｐ＞０．０５）。说明在泪液分泌上中、高剂量组治疗效果最佳。见图１。??表２治疗不同时间点各组ＳＩＴ值比较（Ｉ±Ｓ，ｎ＝８）（单位：ｍｍ）??ｍ＼?７ｄ?１４ｄ?２ｌｄ?ＦＩ?Ｐ?值??正常组?３．８５±０＿２２?３．９２±０．１７?３．８７±０．３３?０．１９８?０．８２２??模型组?１＿７１±０＿０９?１．７１±０．０８?１＿７１±０．０９?０．００２?０．９９８??阴性对照组?１．７＾０．０７＃?１．７〇±〇．〇８＃?１．７０±０．０９＃?０．０４４?０．９５７??低剂量组?１．７４±０．１９＃?１．８２±０．０８＃?１．９２±０．１０Ａ?３．６３６?０．０４４??中剂量组?２．００±０．１２ａ?２．４２±０．１７ａ?２．９３±０．２８ａ?４３．１７４?０．０００??高剂量组?１．９８±０．１２ａ＊?２．４８±０．２６ａ＊?２．８８±０．４９ａ＊?１４．９５７?０．０００??注：模型组在造模后即刻、造模后７ｄ、造模后１４ｄ、造模后２１ｄ均无统计学差异（ｐ＞０．０５）。??＃：与模型组比

??０．０５）。说明在泪膜破裂时间上，中、高剂量组治疗效果明显。见图２。??表４治疗不同时间点各组的ＢＵＴ值比较（ｉｔＳ，ｎ＝８）（单位：ｓ）??￣＾３｝?７ｄ?１４ｄ?２１ｄ?７Ｗ?Ｐ?值??正常组?１０．８２±１．１５?１０．９±１．０３?１０．８８±０．９０?０．０１４?０．９８６??模型组?３．８１±０．４０?３．７９±０．３９?３．７６±０＿４０?０．０２５?０．９７５??阴性对照组?３．８０±０．３５＃?３．７７±０．３６＃?３．７９±０．３６＃?０．０２２?０．９７８??低剂量组?４．０３±０．２１Ａ?４．２９±０．３８ａ?４．３７±０．４２ａ?２．１０５?０．１４７??中剂量组?４．４４±０．３９ａ?４．９６±０．５３ａ?５．７９±０．５５ａ?１５．０１３?０．０００??高剂量组?４．３９±０．３９ａ＊?４．９３±０．４１ａ＊?５．６６±０．３９ａ＊?２０．６２３?０．０００??注：模型组在造模后即刻、造模后７ｄ、造模后１４ｄ、造模后２１ｄ均无统计学差异（ｐ＞０．０５）。??＃：与模型组比

２?ＨＥ染色结果??２．１结膜组织??从图４可以看出，正常组结膜柱状上皮细胞形态规则，排列整齐紧密，核呈??椭圆染色，散在分布正常数量的杯状细胞，模型组与阴性对照组上皮细胞排列紊??乱，部分核固缩，杯状细胞数量反应性增多，固有层可见淋巴细胞浸润。２１天??中剂量组结膜上皮细胞形态规则，排列比较整齐，杯状细胞数量正常，基本无淋??巴细胞浸润。见图４。??３７??
【参考文献】

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本文编号：2857423