补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制研究

发布时间：2020-10-27 03:38

　　 目的:通过观察补骨脂素对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,及对TGF-β1和Smad4蛋白表达的影响,来阐明补骨脂素调节骨代谢和防治骨质疏松症的可能作用机制。材料与方法:采用大鼠股骨全骨髓贴壁法分离、提取大鼠骨髓间充质干细胞。传代培养3次后将细胞分为空白对照组、条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱导组。空白对照组:10%FBS的DMEM培养液培养;条件诱导组:成骨诱导液培养;补骨脂素组:含15umol/L补骨脂素的培养液进行培养;补骨脂素联合条件诱导组:用含15umol/L补骨脂素的成骨诱导液培养。在此期间,时刻观察细胞生长状态,每3d换液一次,12d后进行各项指标的检测。Elisa法检测各组细胞上清液中ALP的表达水平;RT-PCR法检测趋化因子CXCL12的表达;Western Blot法检测COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4蛋白的表达。结果:1.Elisa法显示:与空白对照组相比,条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱导组的培养液中ALP水平均显著升高(p0.05),与条件诱导组相比,补骨脂素联合条件诱导组ALP水平显著升高(p0.05)。2.RT-PCR法显示:与空白对照组相比,条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱导组细胞CXCL12 mRNA水平均显著升高(p0.05),与条件诱导组相比,补骨脂素联合条件诱导组CXCL12 mRNA水平显著升高(p0.05)。3.Western Blot法:与空白对照组相比,条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱导组细胞COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4水平均显著升高(p0.05),与条件诱导组相比,补骨脂素联合条件诱导组COL I、Cbfɑ1、TGF-β1、Smad4水平显著升高(p0.05)。结论:1.补骨脂素能促进大鼠骨髓间充质干细胞ALP、CXCL12、COL I、Cbfɑ1的表达,诱导其向成骨细胞分化。2.补骨脂素防治骨质疏松的机制可能是通过影响TGF-β1/Smad4信号途径,从而协同成骨诱导液促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化。
【学位单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

见表 1。MSCs 中 ALP 蛋白表达（—X ±S）ALP（ug/L）116.21±9.0152.17±15.7*143.69±17.2*条件诱导组 180.39±11.6*#对照组；#p<0.05vs 条件培养组测趋化因子 CXCL12 的表达照组相比，条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱 水平均显著升高（p<0.05），与条件诱导组相比，补骨脂素联NA 水平显著升高（p<0.05）。见表 2，图 1。

补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制研究1.42±0.11*1.29±0.08*条件诱导组 1.65±0.12*#对照组；#p<0.05vs 条件培养组ot 法检测 COL I、Cbfɑ 1、TGF-β1、Smad4 蛋白的表达COL I 蛋白的表达照组相比，条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件升高（p<0.05），与条件诱导组相比，补骨脂素联合条显著升高（p<0.05）。见图 2。

图 3 各组 BMSCs 中 Cbfɑ 1 蛋白表达水平空白对照组 2：条件诱导组 3：补骨脂素组 4：补骨脂素联*p<0.05 vs 空白对照组；#p<0.05vs 条件培养组 TGF-β1 蛋白的表达照组相比，条件诱导组、补骨脂素组与补骨脂素联合条件诱表达水平均显著升高（p<0.05），与条件诱导组相比，补骨1 蛋白表达水平显著升高（p<0.05）。见图 4。
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本文编号：2857978