雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞激活作用的体内外研究

发布时间：2020-11-02 09:07

　　 本研究首先提取雪灵芝粗多糖(arenaria kansuensis crude polysaccharide,AKCP),通过体外实验检测AKCP对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用,再通过检测不同剂量AKCP对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫指标的影响进行验证。从体内外研究水平证实了AKCP具有免疫促进作用。在体外研究中,以不同浓度AKCP作用于体外培养的免疫细胞48 h,采用中性红吞噬实验及NO释放实验检测巨噬细胞功能,MTT法检测脾淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测脾淋巴细胞CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群,ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2及IFN-γ的水平。结果显示:在体外,AKCP各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和NO释放量、脾淋巴细胞刺激指数及培养上清中IFN-γ水平、NK细胞杀伤活性均高于空白对照组(P0.05);AKCP中浓度组脾淋巴细胞CD3~+、CD4~+亚群及培养上清中IL-2水平也明显升高(P0.05)。在体内研究中,将小鼠随机分为5组:空白对照组、环磷酰胺(CTX)模型组、AKCP高、中、低剂量组。除空白对照组外其他4组采用腹腔注射CTX建立小鼠免疫低下模型。各组分别给予蒸馏水、不同剂量AKCP灌胃,10 d后处死小鼠,检测体重增率、胸腺指数、脾脏指数、脾淋巴细胞增殖活性和CD3~+/CD4~+/CD8~+亚群、NK细胞杀伤活性、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、血清中IL-2和IFN-γ水平。结果显示:在体内,CTX组除NK细胞杀伤活性外的上述各项指标均较对照组明显降低(P0.05),不同剂量AKCP作用可减轻CTX所致的各项指标下降,其中AKCP高、中剂量组体重增率、胸腺指数、脾淋巴细胞CD3~+及CD3~+CD8~+亚群、巨噬细胞吞噬率与吞噬指数均较CTX模型组明显升高(P0.05),AKCP低剂量组脾脏指数、脾淋巴细胞增殖指数、以及IL-2和IFN-γ水平显著高于CTX模型组(P0.05)。以上研究结果表明,AKCP对小鼠免疫细胞的增殖与功能具有体外激活作用;对CTX所致的免疫抑制小鼠,从淋巴器官重量、淋巴细胞增殖、Th1细胞因子分泌乃至单核巨噬细胞的功能,都具有保护和促进作用。
【学位单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语表
第1章 引言
第2章 雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用
    2.1 材料与仪器
    2.2 方法
        2.2.1 雪灵芝粗多糖（AKCP）制备
        2.2.2 中性红吞噬实验法及NO释放实验法检测小鼠腹腔巨噬细胞功能
        2.2.3 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备
        2.2.4 MTT法检测小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性
        2.2.5 MTT法检测NK细胞杀伤活性
        2.2.6 流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞亚群
        2.2.7 ELISA双抗体夹心法检测IL-2 和IFN-γ水平
        2.2.8 统计学方法
    2.3 结果
        2.3.1 AKCP对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬中性红及释放NO功能的影响
        2.3.2 AKCP对小鼠脾淋巴细胞体外增殖活性的影响
        2.3.3 AKCP对小鼠NK细胞体外杀伤活性的影响
        2.3.4 AKCP对体外培养小鼠脾淋巴细胞亚群的影响
        2.3.5 AKCP对小鼠脾淋巴细胞体外分泌IL-2 和IFN-γ水平的影响
    2.4 小结
第3章 雪灵芝粗多糖对环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影响
    3.1 材料与仪器
    3.2 方法
        3.2.1 雪灵芝粗多糖（AKCP）制备
        3.2.2 动物及分组
        3.2.3 体重增率、脾脏及胸腺指数测定
        3.2.4 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备
        3.2.5 小鼠脾淋巴细胞增殖活性检测
        3.2.6 NK细胞杀伤活性检测
        3.2.7 小鼠脾淋巴细胞亚群检测
        3.2.8 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能检测
        3.2.9 小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平检测
        3.2.10 统计学方法
    3.3 结果
        3.3.1 AKCP对免疫抑制小鼠体重增率、胸腺及脾脏指数的影响
        3.3.2 AKCP对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖活性及NK细胞杀伤活性的影响
        3.3.3 AKCP对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞亚群的影响
        3.3.4 AKCP对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
        3.3.5 AKCP对免疫抑制小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平的影响
    3.4 小结
第4章 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
作者简介

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本文编号：2866840