二氢姜黄素体外处理BRL-3A细胞对细胞凋亡通路的影响

发布时间：2020-11-09 17:56

　　 目的研究二氢姜黄素(DHC)对棕榈酸(PA)诱导的大鼠肝BRL-3A细胞线粒体凋亡通路的影响。方法建立PA诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)细胞模型,将细胞分为对照组(正常培养基)、模型组(0.25 m M PA处理)和DHC处理组(16、32和64μM DHC处理),检测细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,检测细胞线粒体膜电位、凋亡相关蛋白酶Caspase-3和Caspase-9活性,采用Western blotting法检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果模型组细胞上清LDH、Caspase-3和Caspase-9活性分别为(100.1±4.2)%、(1.0±0.2)%和(1.0±0.1)%,均显著高于对照组[分别为(65.2±3.5)%、(0.3±0.1)%和(0.5±0.1)%,P0.05],而线粒体膜电位为(0.5±0.1)%,显著低于对照组[(0.7±0.1)%,P0.05]; 32μM DHC处理组LDH、Caspase-3和Caspase-9活性分别为(84.4±2.4)%、(0.8±0.1)%和(0.7±0.1)%,均显著低于模型组(P0.05),而线粒体膜电位为[(0.6±0.1)%,显著高于模型组(P0.05);与对照组比,模型组细胞凋亡率显著增加,而经DHC处理组,细胞凋亡率比模型组显著降低;模型组Bcl-2蛋白相对表达量为(1.0±0.1),显著低于对照组[(2.2±0.5),P0.05],而Bax蛋白相对表达量为(1.1±0.1),显著高于对照组[(0.8±0.1),P0.05]; 32μM DHC处理组和64μM DHC处理组Bcl-2蛋白相对表达量分别为(1.3±0.1)和(1.9±0.2),均显著高于模型组(P0.05),而Bax蛋白相对表达量分别为(0.7±0.1)和(0.6±0.1),均显著低于模型组(P0.05)。结论 DHC可能通过抑制线粒体介导的凋亡通路,缓解由PA诱导的BRL-3A细胞凋亡。
【部分图文】：

各组细胞凋亡率比较

关于NASH的流行病学研究表明，NASH患者的发病率逐年在增加，在未来十年可能成为肝移植的主要原因。因此，关于NASH的防治研究已成为研究的热点。细胞凋亡与有丝分裂的过程在正常情况下处于平衡状态，维持机体细胞的平衡。但在NASH模型中凋亡占主导地位，凋亡过度会进一步导致肝损伤和氧化应激紊乱等。因此，能否改善肝细胞的凋亡对于NASH的治疗具有重要意义。用脂肪酸刺激肝细胞建立NASH的体外模型较为成熟，为研究药物对NASH的作用机制奠定了良好的基础。在PA诱导的BRL-3A细胞，我们首先观察到DHC对PA引起细胞LDH的释放有缓解作用。LDH一般存在于细胞质中，当细胞膜受损的时候会被释放到培养上清，因此培养上清LDH越多，代表细胞膜受损越严重[11]。我们的结果显示DHC可以减少细胞LDH的释放，说明DHC可以改善PA引起的细胞膜的损伤。然后，我们用流式细胞仪检测了凋亡细胞情况，结果发现DHC可以减少由PA引起的细胞早期凋亡、晚期凋亡和坏死数量。通过这部分的研究结果，我们推测DHC可以改善脂肪变情况下的细胞凋亡。
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