我国不同地区印度块菌伴生微生物多样性及化学成分含量分析

发布时间：2020-11-11 04:48

　　 印度块菌Tuberindicum是隶属于子囊菌门的一类珍贵的地下生外生菌根真菌,具有重要的食药用价值及生态价值,广泛分布于我国多个地区,是我国最主要的出口贸易食用菌之一。印度块菌整个生活史漫长,地下菌丝、菌根及子实体的形成和发育各个阶段几乎都发生在地下,与土壤中的微生物发生紧密关系。研究表明,微生物在印度块菌菌根形成及子实体发育、独特芳香气味形成等过程中发挥重要作用,但其具体作用机制还尚不明确。目前对我国不同地区的印度块菌伴生微生物多样性及其生态功能的相关研究还尚未开展。本文运用高通量测序技术结合传统分离培养方法研究了不同地理分布区的印度块菌子实体伴生微生物的组成和差异以及块菌生长发育过程中不同部位的微生物多样性,同时采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)和高效液相色谱(HPLC)等方法比较分析了不同地区的印度块菌子实体化学成分含量及其抗氧化活性,以期明确地理分布对印度块菌伴生微生物、化学成分含量的影响,为将来对不同地区的印度块菌质量评价标准的制定奠定理论基础。主要研究结果如下:1,对我国西南、东北及华北地区的6个不同地区的印度块菌子实体伴生细菌多样性研究表明,印度块菌子实体均被变形菌门Proteobacteria(36.90-80.79%)、厚壁菌门 Firmicutes(0.04%-37.20%)、拟杆菌门 Bacteroidetes(4.44-14.85%)等定殖,以慢生根瘤菌属Bradyrhizobium为优势菌属(2.66-47.66%),但细菌结构组成表现出地区差异性;此外,印度块菌菌根中优势菌属为链霉菌属Streptomyces(4.65%)等,土壤中主要为鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas(3.12-6.26%)等。2,对不同地区的印度块菌子实体中化学成分含量及抗氧化活性研究表明,云南曲靖的印度块菌子实体中游离糖(23.67mg/gdw)、总酚类(4.46 mg/gdw)、黄酮类化合物(2.31mg/gdw)含量最高,清除DPPH自由基(EC50值为0.93±0.11 mg/mL)和ABTS自由基活性(EC50值为0.68±0.13mg/mL)最强,西藏的印度块菌中多糖含量最高(115.24mg/gdw);印度块菌子实体中挥发性化合物成分主要为醇类(28.30-69.65%)、醛类(5.35-23.21%)、酮类(1.88-16.10%)、芳香族化合物(0-0.91%)以及含硫化合物(0-0.11%)等,其中1-辛烯-3-醇含量最高(26.74-59.72%),化合物组成及相对含量表现出地区差异性。3,从印度块菌子实体中分离获得了 60株可培养细菌,隶属于4门24属,以假单胞菌属Pseudomonas sp.、粪产碱杆菌Alcaligenes sp.、微杆菌属 Microbacterium sp.、节杆菌属Arthobactersp.为优势类群。其中13株能在Burk's无氮培养基上生长,8株具有固氮酶基因,暗示其可能有固氮能力,1株具溶解无机磷能力,暗示其在印度块菌发育过程中可能发挥重要作用。
【学位单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S567.3;R284.1
【部分图文】：

?第二章印度块菌伴生微生物多样性???ＨＫＡＳ１０４３７３－３７６、昭通市的样品?ＨＫＡＳ８５２３４、ＨＫＡＳ８５２３７－ＨＫＡＳ８５２４０、??ＨＫＡＳ８５２４４、ＨＫＡＳ８５２５５、ＨＫＡＳ８５２６３、ＨＫＡＳ８５２６４，四川省凉山彝族自治州的??样品ＨＫＡＳ６１０９０、ＨＫＡＳ６１０８６、ＨＫＡＳ６１０８８，西藏自治区林芝市的样品??ＨＫＡＳ１０４３６７－ＨＫＡＳ１０４３６９，河北省遵化市的样品?ＨＫＡＳ９６７７９－ＨＫＡＳ９６７８１，黑龙??江省齐齐哈尔市的样品ＨＫＡＳ１０４２１２－ＨＫＡＳ１０４２１４，牡丹江市样品??ＨＫＡＳ１０４２０８－ＨＫＡＳ１０４２１０，辽宁省朝阳市的样品?ＨＫＡＳ１０４２１５－ＨＫＡＳ１０４２１６。??

图２－２不同地区印度块菌子实体宏观及微观形态特征Ａｌ－７为釆集于云南省怒江州贡山县??（Ａ１）、河北省（Ａ２）、辽宁省（Ａ３）、黑龙江省牡丹江市（Ａ４）、黑龙江省齐齐哈尔（Ａ５）、??云南省曲靖市（Ａ６）、西藏自治区（Ａ７）的印度块菌子实体形态特征；Ｂ１－７为云南省怒江州??贡山县（Ｂ１）、河北省（Ｂ２）、辽宁省（Ｂ３）、黑龙江省牡丹江市（Ｂ４）、黑龙江省齐齐哈尔市??（Ｂ５）、云南省曲靖市（Ｂ６）、西藏自治区（Ｂ７）的印度块菌孢子形态特征；Ａ８为辽宁的印??度块菌釆样地生境、Ｂ８为河北的印度块菌釆样地生境??Ｆｉｇ?２－２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ａｎｄ?ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｃｈｉｎａ．?Ａｌ－７?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ｆｒｕｉｔｉｎｇ?ｂｏｄｉｅｓ?ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｄｅｒｕｎｇ－Ｎｕ??Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ?Ｃｏｕｎｔｙ?Ｇｏｎｇｓｈａｎ，?Ｙｕｎｎａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａｌ），?Ｈｅｂｅｉ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ２），?Ｌｉａｏｎｉｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ３），??Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ?ｃｉｔｙ，?Ｈｅｉｌｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ４），?Ｑｉｑｉｈａｒ?ｃｉｔｙ，?Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ５），?Ｑｕｊｉｎｇ，??Ｙｕｎｎａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ?（Ａ６），?Ｔｉｂｅｔ?（Ａ７）；?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ?ｏｆ?ａｓｃｏｓｐｏｒｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ??

Ｆｉｇ?２－３?Ｔｈｅ?Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ?ｔｒｅｅ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ＩＴＳ?ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?Ｔ．?ｉｎｄｉｃｕｍ?ｆｒｏｍ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｒｅｇｉｏｎｓ．??ＡＨＢ１－ＨＢ３：?Ｈｅｂｅｉ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＨＬＮ１－ＬＮ３：?Ｌｉａｏｎｉｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?＃ＱＪ１－ＱＪ３：?Ｑｕｊｉｎｇ．?Ｙｕｎｎａｎ??ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＡＭＤＪ１－ＭＤＪ３：?Ｍｕｄａｎｊｉａｎｇ，?Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＯＧＳ１－ＧＳ３：?Ｇｏｎｇｓｈａｎ?ｃｏｕｎｔｙ，??Ｎｕｊｉａｎｇ，?Ｙｕｎａｎｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?ＤＸＺ２－１－ＸＺ２－３：?Ｌｉｎｚｈｉ?ｃｉｔｙ，?Ｔｉｂｅｔ；?ＴＱＱ２，?ＱＱ４：?Ｑｉｑｉｈａｒ，??Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ；?Ｖ?ＳＣ?１－３：?Ｌｉａｎｇｓｈａｎ，?Ｓｉｃｈｕａｎ?ｐｒｏｖｉｎｃｅ??釆用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ方法对我国不同地理位置的印度块菌ｎｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列构??建系统发育树，以Ｔ．ｔｏｒｃ／ｎＹ作为外类群（图２－３）。结果表明，所有样品在系统发??育树上共同聚集在一个大的分枝上（Ｃｌａｄｅ?１），系统发育关系较为相近。??（二）不同地区印度块菌子实体伴生细菌多样性分析??基于ＩＵｕｍｉｎａ?ＨｉＳｅｑ测序平台，对釆集于我国６个省的印度块菌子实体伴生细??菌１６Ｓ?ｒＤＮＡ?Ｖ３＋Ｖ４片段测序，共获得３９８１６９２对Ｒｅａｄｓ，拼接过滤后共产生??３４５０２９３条ｄｅａｎ?ｔａｇｓ。在９７％相似度下可将其聚类为用于物种分析的６９５个ＯＴＵｓ，??如表２－１所示。??２５??
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本文编号：2878766