山茱萸环烯醚萜苷对创伤性脑损伤大鼠认知功能及tau蛋白磷酸化的影响

发布时间：2020-11-13 22:30

　　 目的观察山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycoside,CIG)对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)大鼠认知功能及tau蛋白过度磷酸化的影响。方法采用改良自由落体Feeney法致右侧大脑皮质损伤制备TBI大鼠模型。造模后3 h开始给药,持续给药28 d。应用避暗试验检测大鼠被动回避记忆能力,应用Fluoro Jade B染色检测变性神经元,采用Western blotting法检测tau蛋白磷酸化的水平。结果 TBI造模术后28 d,模型组大鼠在避暗试验中的错误次数增多,海马区变性神经元增多,创伤部位tau蛋白磷酸化水平增高。CIG灌胃给药28 d能够改善TBI大鼠的被动回避记忆功能障碍,减轻海马区神经元退行性病变,抑制TBI大鼠脑创伤部位tau蛋白在Thr205和Ser396位点的过度磷酸化。结论 CIG对脑创伤所致认知功能障碍可能具有治疗作用。
【部分图文】：

将大鼠麻醉后仰卧位固定于手术台上,开胸暴露心脏。由主动脉弓进针,在右心耳处剪开一小口,先后灌入0.9%(质量分数)氯化钠注射液和4%(质量分数)多聚甲醛,四肢僵硬即固定完成,分离取出脑组织。将取出的脑组织浸于含4%(质量分数)多聚甲醛和30%(质量分数)蔗糖的后固定液中脱水。固定好的脑组织进行冰冻切片,得到厚度为20 μm的脑片。之后用特异性标记变性神经元的荧光染料Fluoro Jade B,参照文献[12]中方法进行Fluoro Jade B染色。每只大鼠随机选取3张脑片,贴于预先明胶处理过的载玻片上。待自然晾干。按照以下步骤染色:①贴片浸入含1%(质量分数)NaOH的80%(体积分数)乙醇溶液中5 min;②贴片入70%(体积分数)乙醇溶液中20 min,之后蒸馏水中浸洗2 min;③贴片入0.06%(质量分数)高锰酸钾溶液中10 min,蒸馏水冲洗2 min;④贴片于0.000 4%(质量分数)Fluoro Jade B染色液[溶于0.1%(体积分数)乙酸]中染色20 min,之后蒸馏水冲洗3 min;⑤贴片在50 ℃条件下烘干,用DAPI封片剂封片后,在荧光显微镜下观察及拍照。1.7 Western blotting法检测

在TBI术后28 d进行避暗试验,记录大鼠在第2次训练24 h后首次进入暗室的时间(步入潜伏期)以及进入暗室的次数(错误次数)。步入潜伏期在各组小鼠间差异无统计学意义(图1A);模型组大鼠进入暗室的错误次数与假手术组相比显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),而灌胃给予CIG(30、60、120 mg/kg)28 d能够降低TBI大鼠的错误次数,其中CIG中剂量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05,图1B)。2.2 CIG对TBI大鼠海马区神经元变性的影响

应用Western blotting法检测TBI大鼠创伤部位磷酸化tau蛋白的表达。与假手术组比较,TBI模型组大鼠创伤部位tau蛋白在苏氨酸(Thr)205位点和丝氨酸(Ser)396位点的磷酸化水平显著增高(P<0.05);而给予CIG能够降低TBI大鼠tau蛋白Thr205位点的磷酸化水平,其中CIG中、大剂量组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05);给予CIG也能够降低tau蛋白Ser396位点的磷酸化水平,其中CIG大剂量组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。各组小鼠的总tau蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05),详见图3。3 讨论
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