陈皮枳壳配伍柴胡对应激法致小鼠功能性消化不良的影响

发布时间：2020-11-15 17:42

　　 根据中医辨证,功能性消化不良(FD)多由肝胃不和引起。柴胡疏肝散作为调和肝脾的经典方代表之一,在临床中常用于治疗功能性消化不良,方中陈皮枳壳药对因其理气健脾功效,在治疗功能性消化不良时起到重要作用,再配上疏肝解郁的柴胡,共同起到调和肝脾的作用。如何用现代语言解释其配伍的科学内涵及作用机制?这是本论文的出发点。目的:(1)复制与临床症状相似的FD小鼠模型,并进行模型评价。(2)对比陈皮枳壳药对和陈皮枳壳药对配伍柴胡对FD小鼠的作用效果。(3)研究陈皮枳壳药对配伍柴胡后胃动力增强与Cajal间质细胞(ICC)的关系。(4)研究陈皮枳壳药对配伍柴胡后胃动力增强与5-HT系统的关系。(5)研究陈皮枳壳药对配伍柴胡后通过5-HT系统促进胃动力的作用机制。方法:(1)采用三联一复合应激法复制FD小鼠模型,具体操作为每天给予实验动物束缚6h、过度疲劳游泳、电击三种固定刺激并随机结合慢性不可预知刺激中的一种刺激,造模30天。造模期间定期记录体重、日均进食量和饮水量、糖水偏好百分率以及旷场实验行为学活动评分,造模结束后采用苯酚红法测定两组小鼠胃残留率和小肠推进率,用酶联免疫试剂盒检测血清中p物质(SP)和胃动素(MTL)含量,采集实验动物的肝、胃、结肠组织作病理切片分析。(2)造模30天后对FD小鼠灌胃给药,连续给药12天,给药组分为陈皮枳壳药对组(CZ组)和陈皮枳壳药对配伍柴胡组(CCZ组)。给药结束后,测量小鼠体重、日均进食量和饮水量,进行糖水偏好实验和旷场实验,测定胃残留率,检测血清中p物质(SP)和胃动素(MTL)含量。(3)以GAPDH作为内参对照,运用实时荧光定量PCR法和Westren Blot法测定胃窦组织中c-kit的基因和蛋白表达水平。(4)以GAPDH作为内参对照,用酶联免疫试剂盒检测血清和脑组织中5-HT含量,运用实时荧光定量PCR法和Westren Blot法测定十二指肠中5-HT_4R的基因和蛋白表达水平。(5)通过血清药理学方法分别制备CZ组和CCZ组的含药血清,采用酶解法提取分离、纯化大鼠胃窦平滑肌细胞,细胞免疫荧光技术鉴定平滑肌细胞,采用CCK-8法绘制生长曲线和测定各组含药血清对平滑肌细胞的影响的活性。应用Fluo-3-am作为Ca~(2+)荧光探针,激光共聚焦显微镜技术测定各组平滑肌细胞内Ca~(2+)荧光强度的变化。结果:(1)与正常组小鼠比较,本实验建立的FD小鼠体重降低、日均进食量和饮水量下降、糖水偏好百分率和自主活动评分均减少,出现大便便溏和抑郁样症状,胃残留率上升,血清MTL、SP含量水平均下降,病理切片显示胃肠组织无器质性病变,与临床因肝胃不和引起功能性消化不良的患者症状相似,说明FD小鼠模型复制成功。(2)FD小鼠经过中药处理后,CZ组和CCZ组体重均有不同程度地增加,糖水偏好百分率和自主活动均明显改善(P0.05,P0.05),胃残留显著下降(P0.01,P0.01)血清中MTL、SP水平明显上升(P0.01,P0.01)。两个给药组相比,CCZ组比CZ组的胃残留率更低(P0.05),p物质水平更高(P0.05)。(3)与正常组比较,FD模型小鼠胃窦组织中c-kit基因和蛋白表达水平下调(P0.01)。与模型组相比,CZ组和CCZ组的c-kit表达均明显上升(P0.01,P0.01),CCZ组与CZ组相比没有优势。(4)与正常组比较,FD模型组小鼠同时在血清和脑组织中5-HT含量显著下降(P0.01),十二指肠中5-HT_4R基因和蛋白表达水平下调(P0.01)。与模型组相比,两个给药组均能明显提高5-HT含量和5-HT_4R表达水平(P0.01,P0.05),并且,CCZ组比CZ组提高更多(P0.05)。(5)成功分离、纯化和培养大鼠胃窦平滑肌细胞后,测定其对数生长期为3-4天。通过对比各组含药血清作用,与正常含药血清组相比,10%多潘立酮组、10%CZ组、10%CCZ组的平滑肌细胞活性和胞内Ca~(2+)荧光强度均显著增强(P0.01,P0.01,P0.01),并且10%CCZ组比10%CZ组Ca~(2+)荧光强度更强(P0.01)。结论:三联一复合应激处理小鼠后产生与临床中由肝胃不和引起的功能性消化不良相似的症状,说明心理应激是功能性消化不良的重要致病因素。柴胡疏肝散方中的陈皮枳壳药对具有减少胃残留、增加胃动力、改善FD症状的作用,药对配伍柴胡后药效作用更强,增强的机制与直接的胃肠道因素(MTL、ICC)无关,而是通过增强5-HT系统(5-HT、5-HT_4R、p物质)促进胃平滑肌细胞Ca~(2+)内流,实现胃动力增强。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1-1 ICC 概况1.1.4 功能性消化不良与 5-羟色胺（5-HT）5-羟色胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）是众多脑肠肽中研究的热点，它不仅能 CNS 中可检测到，在 ENS 中也广泛分布[52]。基础研究表明 5-HT 在中枢神经系统可通过神经递质的方式来参与机体的感知、情绪、心理变化等生理过程；在胃肠道

图 1-2 5-HT4R 与胃肠动力1.1.5 功能性消化不良与胃动素（MTL）胃动素（MTL）是属于兴奋型脑肠肽，其受体主要分布在胃窦、十二指肠和部分小肠粘膜中。MTL与特异性受体结合后，在消化期Ⅲ相时可提高胃肠道平滑肌、胆道

图 2-1 小鼠自制束缚管价过程中，每隔 2-3 天测量一次小鼠的体重，日均食量好实验和旷场实验，此外观察小鼠的精神状态和排便。末次给药结束后，进行胃残留率和小肠推进率检测
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本文编号：2885022