芪丹地黄汤抑制糖尿病肾病肾脏纤维化的作用和机制研究

发布时间：2020-11-21 05:27

　　 目的确认芪丹地黄汤对DM大鼠的肾功能保护作用;确认芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏结构的影响;研究芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏纤维化的影响;研究芪丹地黄汤对系膜细胞和成纤维细胞纤维化的影响,并探索其机制;确认芪丹地黄汤对DN大鼠肾脏RAS的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常组和造模组,分别予以腹腔注射枸橼酸钠缓冲液和枸橼酸钠STZ缓冲液。1周后检测血糖并纳入空腹血糖16.67的大鼠进行后续实验。将造模成功的大鼠随机分为芪丹地黄汤组、氯沙坦组和模型组。分别于给药后0、2、4、6、8周检测血糖和体重。给药后0、4、8周利用大鼠代谢笼收集大鼠24h尿液,记录尿量(U-vol),并检测24h尿蛋白(24hU-Pro)、尿素氮(BUN)。检测给药后8周的血肌酐(Scr)和24h白蛋白尿(24h MAU)。称取肾脏重量,计算肾脏与体重之比(KW/BW);取部分肾脏组织,分别进行HE,PAS和Masson病理染色;取部分肾脏组织,免疫组化方法分析肾脏中α-SMA、TGF-β1表达;Western blot分析α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、胶原-Ⅰ(COL-Ⅰ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肾脏中的表达情况;药物血清制备:芪丹地黄汤经水煎、过滤、浓缩后保存;SD大鼠30只,随机分为正常组、氯沙坦组、芪丹地黄汤组,每组10只,分别给予氯沙坦和芪丹地黄汤灌胃,对照组给予等量溶媒灌胃。给药3d后下腔静脉取血,分离血清,灭活、过滤,-80℃保存备用。小鼠系膜细胞的培干预和检测:系膜细胞和NRK-49F细胞饥饿12h后,分为对照组、高糖组,高糖+氯沙坦血清组、高糖+芪丹地黄汤血清组。药物刺激48h后,检测MTT法细胞增殖,Western blot检测细胞FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α和RAS中的肾素(renin)、血管紧张素ⅡI受体1(AT1)和肾素/肾素原受体(PRR)的表达情况;Western blot检测DN大鼠中renin、PRR、AT1的表达情况。结果给药8周后,芪丹地黄汤组大鼠的血糖与模型组和氯沙坦组的比较无显著性差异;芪丹地黄汤不会影响DN大鼠的体重和U-vol,也没有显著改善大鼠的BUN和KW/BW。但是芪丹地黄汤可显著降低DN大鼠的24h MAU、24hU-Pro和Scr;给药8周后,DN大鼠肾脏HE,PAS和Masson染色均可见芪丹地黄汤组和氯沙坦组的DN大鼠肾组织病理结构改善,胶原和糖原沉积减少;免疫组化分析则显示,给药8周后,芪丹地黄汤可以抑制α-SMA和TGF-β1在肾小球中的表达。Western blot结果发现,芪丹地黄汤组DN大鼠肾脏中TGF-β1、α-SMA、COL-Ⅰ、TNF-α的蛋白表达降低;含有芪丹地黄汤的药物血清抑制系膜细胞和NRK-49F细胞的增殖率,同时可以降低系膜细胞和NRK-49F细胞中FN、α-SMA、TGF-β1、TNF-α 和 RAS 级联中 renin、PRR、AT1 的表达;给药8周后,芪丹地黄汤能够抑制DN大鼠肾脏RAS级联中renin、PRR和AT1的表达。结论芪丹地黄汤可以改善DN的肾功能和组织结构,可以抑制其纤维化,且这些积极作用,可能与抑制RAS有关。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

ＴＧＦ－Ｐ，的表达，而阻断Ａｎｇｌｌ的活性，可显著降低ＴＧＦ－Ｍ＾表达，降低ＥＣＭ生成，??有效的减缓疾病的进展，改善肾脏疾病的诸多症状如蛋白尿、炎症细胞浸润和??纤维化［４３４５］（如图１）。因此，我们可以认为，如果能够抑制Ａｎｇｌｌ的表达，则可??能抑制细胞分泌ＥＣＭ。??Ａｎｇ?ＩＩ??￣￥?＿＿ＴＧＦ－Ｐ??Ｘ?￣￣１?￣￣??／?Ｒｅｎａｌ?ｃｅｌｌｓ?＼?藝．??／?（ｍｅｓａｎｇｉａｌ，?ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ??丨广－产??ＥＣＭ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ??图１?Ａｎｇ?ＩＩ诱导ＥＣＭ堆积的机制??Ｆｉｇ．ｌ?ｔｈｅ?ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ＥＣＭ?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?Ａｎｇ?ＩＩ?－ｉｎｄｕｃｅｄ??肾素（原）受体［（ｐｒｏ）ｒｅｎｉｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＰＲＲ］在调控Ａｎｇｌｌ的生成中起着重要作用??Ｋ６４８］。２００２年，首次报道了?ＲＡＳ上游的一个新成员一ＰＲＲ，主要位于细胞表面??以及细胞间隔，尤其是核周间隙［４９，?５Ｑ］。ＰＲＲ参与Ａｎｇｌｌ的生成主要通过两个途??径：蛋白水解途径和非蛋白水解途径［５１，５２］。蛋白水解途径，具体来说，是肾素??原与ＰＲＲ结合，产生的一系列移除肾素原前肽的级联效应。肾素原是肾素的前??５??

（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ?Ｉ，ＡｎｇＩ），血管经张素原向Ａｎｇｌ、ＩＩ转化。非蛋白水解途径，即??肾素原与ＰＲＲ结合后，通过构型改变，暴露出其活性部位，并与ＡＧＴ发生结合，??产生生成Ａｎｇｌｌ的ＲＡＳ级联（如图２）。通过蛋白酶解生成的肾素，又与ＰＲＲ??结合，可增加其５倍的酶促活性［４９］。有研究发现，ＤＭ患者肾脏中ＰＲＲ表达上??调。阻断ＰＲＲ可以改善ＤＮ肾部分切除术大鼠的蛋白尿和肾小球硬化。因此，??可以认为，在ＤＮ的发生发展过程中，ＰＲＲ发挥着重要的细胞生物学效应。??ｆ?＾ａｃ＾＊ｅ?ｐｒｏｒｅｎｉｎ??ｐｒｏｔｅｏｈｌｉｃ?／?＼?ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅｏＭｃ??ｒ?．?／?＼?離?ａｃｔｉｖｅ?ｓ！ｔｅ??／?＼?，一，?ｐｒｏｓｅｇｍｅａｔ??ｒｅｎｉｎ??图２肾素原的蛋白水解和非蛋白水解途径??Ｆｉｇ．２?ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ?ａｎｄ?ｎｏｎ－ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｐｒｏｒｅｎｉｎ??综上，我们可以认为，ＤＮ发展为ＥＳＲＤ的过程中，肾脏纤维化是一个重要??且无法回避的病理过程。ＥＣＭ在肾脏中的过度堆积，是造成肾脏纤维化的重要??原因。在调控ＥＣＭ生成的上游因子中，ＴＧＦ－（３表现出了关键作用。在调节ＴＧＦ－Ｐ??的上游因素中

在调控ＥＣＭ生成的上游因子中，ＴＧＦ－（３表现出了关键作用。在调节ＴＧＦ－Ｐ??的上游因素中，Ａｎｇｌｌ具有重要的意义。ＰＲＲ在Ａｎｇｌｌ的级联中扮演者不可或缺??的角色（如图３）。??６??
【参考文献】

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本文编号：2892591