铁皮石斛多糖对神经细胞凋亡抑制作用的研究

发布时间：2020-12-09 11:04

　　目的探究铁皮石斛多糖（DOP）能否抑制由肿瘤坏死因子-α（TNF-α）引起的神经细胞凋亡,以及其抑制凋亡的最佳浓度。方法分别采用不同浓度的TNF-α对小鼠海马神经元细胞系（HT22）进行培养,确定TNF-α诱导HT22细胞凋亡的最佳浓度;再将不同浓度的DOP与最佳浓度的TNF-α共同培养HT22细胞24 h后,采用PCR、Western blot检测凋亡相关基因和蛋白的表达,查找DOP抑制HT22细胞凋亡的最佳作用浓度;之后,同时通过吉姆萨染色、赫斯特（Hoechst）染色、原位末端转移酶标记技术（Tunel）染色、流式细胞术观察HT22细胞凋亡数量及比例的变化。结果与正常培养组比较,TNF-α可增加HT22细胞中凋亡相关基因的表达,且最佳浓度为5 ng/ml （P<0.000 1）。与5 ng/ml TNF-α组比较,各浓度DOP均可抑制HT22细胞凋亡基因的表达,其中20μg/ml和25μg/ml DOP组的抑制效果最为明显（P <0. 001）;且20μg/ml和25μg/ml DOP组相关蛋白的表达、HT22细胞的凋亡数量和比例均显著低于5 ng/ml TNF-α组... 

【文章来源】：安徽医科大学学报. 2020年08期 第1214-1220页 北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

TNF-α诱导HT22细胞凋亡PCR检测和细胞增殖实验

DOP抑制HT22细胞凋亡相关基因和蛋白表达的作用检测

吉姆萨染色结果(图3A)显示,加入5 ng/ml TNF-α后,深染凋亡细胞数量较正常培养组增多;与5 ng/ml TNF-α组比较,分别加入20、25 μg/ml DOP后,深染凋亡细胞数量均减少。Hoechst染色结果(图3B)表明,与正常培养组比较,5 ng/ml TNF-α培养HT22细胞24 h后,蓝色深染细胞(凋亡细胞)数量增多,差异有统计学意义(P<0.000 1);分别加入20、25 μg/ml DOP后,其凋亡细胞的数量与5 ng/ml TNF-α组比较均减少,差异有统计学意义(P<0.000 1)。Tunel染色结果(图3C)显示,与正常培养组比较,5 ng/ml TNF-α组绿色凋亡细胞增多,差异有统计学意义(P<0.000 1);与5 ng/ml TNF-α组比较,分别加入20、25 μg/ml DOP 后,绿色凋亡细胞减少,差异有统计学意义(P<0.001)。Annexin V/PI凋亡流式细胞术检测结果(图3D)表明,在加入5 ng/ml TNF-α后,HT22细胞的凋亡比例可达到29.74%,而正常培养组仅为6.97%,说明TNF-α可以增加HT22细胞的凋亡比例;在分别加入20、25 μg/ml DOP后,HT22细胞的凋亡比例分别为22.80%和24.48%,均较5 ng/ml TNF-α组的凋亡比例降低,差异有统计学意义(P<0.01),表明浓度为20、25 μg/ml的DOP均可抑制由TNF-α引起的HT22细胞凋亡。3 讨论


本文编号：2906768