PEG化新藤黄酸脂质体加速血液清除现象的考察及其初步机制探讨

发布时间：2020-12-11 00:35

　　目的:（1）制备研究ABC现象的模型制剂PEG-GNA-Liposomes,选出最优工艺与处方,并对其进行表征;（2）证明模型制剂PEG-GNA-Liposomes二次注射具有ABC现象,并考察前后两次注射间隔时间及剂量对该现象强弱的影响,与此同时考察各组肝、脾组织药物蓄积量;（3）从血液学与组织学水平分别对ABC现象的产生机制进行初步探讨。旨在为最终消除PEG化纳米载体二次注射产生的ABC现象提供解决思路。方法:（1）参考实验室前期研究,并以包封率为主要考察指标,结合单因素考察与正交试验,最终确定用溶剂注入法制备PEG-GNA-Liposomes的最优处方,并通过扫描电镜、粒径、Zeta电位、体外释放等对最优处方下的PEG-GNA-Liposomes进行表征;（2）确定以HPLC法检测血浆与肝、脾组织中GNA的方法。通过将首次注射PEG-GNA-Liposomes与二次注射后药时曲线下降的速度作比较,证明该制剂二次注射是否具有ABC现象。将两次注射间隔时间分为3天、5天和7天三组,比较三组药时曲线下降速度,判断ABC现象是否具有时间依赖性。将注射剂量分为高、中、低三组,通过药时曲线下... 

【文章来源】：安徽中医药大学安徽省

【文章页数】：108 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
前言
    1 加速血液清除现象
        1.1 加速血液清除现象的提出
        1.2 现有免疫学机制不能完全诠释加速血液清除现象
        1.3 加速血液清除现象与ABC转运体
    2 PEG化新藤黄酸脂质体
    3 课题设计思路
第一章 处方前研究
    1 仪器与材料
        1.1 主要仪器
        1.2 材料和试剂
    2 方法与结果
        2.1 GNA体外分析方法的建立
            2.1.1 标准储备溶液的制备
            2.1.2 色谱条件
            2.1.3 专属性
                2.1.3.1 对照品溶液
                2.1.3.2 供试品溶液的制备
                2.1.3.3 阴性供试品溶液的
            2.1.4 标准曲线的建立
            2.1.5 精密度实验
            2.1.6 重复性
            2.1.7 回收率
            2.1.8 稳定性
        2.2 包封率测定方法的建立
            2.2.1 包封率测定方法的选择-微柱离心法
            2.2.2 微柱的制备
            2.2.3 微柱对GNA吸附率考察
            2.2.4 洗脱曲线
            2.2.5 包封率及载药量的测定
    3 讨论
    4 本章小结
第二章 PEG化新藤黄酸脂质体的处方研究与质量评价
    第一节PEG-GNA-Liposomes的制备工艺与处方研究
        1 仪器与材料
            1.1 主要仪器
            1.2 试剂与试药
        2 方法与结果
            2.1 制备方法的选择
            2.2 有机溶剂的选择
            2.3 单因素考察PEG-GNA-Liposomes的处方工艺
                2.3.1 制备工艺的考察
                    2.3.1.1 制备温度的选择
                    2.3.1.2 搅拌速度的选择
                    2.3.1.3 搅拌时间的选择
                2.3.2 PEG-GNA-Liposomes处方的筛选
                    2.3.2.1 水相/有机相比例的选择
                    2.3.2.2 卵磷脂/胆固醇（w:w）比例的选择
                    2.3.2.4 磷脂用量的考察
                    2.3.2.5 卵磷脂/mPEG-PE比例的选择
            2.4 正交设计试验
            2.5 验证实验
        3 讨论
    第二节PEG化新藤黄酸脂质体的质量评价
        1 仪器与材料
            1.1 仪器
            1.2 材料与试剂
        2 方法与结果
            2.1 形态学考察
            2.2 粒径分布
            2.3 Zeta电位考察
            2.4 制剂初步稳定性考察
                2.4.1 低温（4℃）初步稳定性考察
                2.4.2 室温（25℃）初步稳定性考察
            2.5 体外释药性考察
                2.5.1 色谱条件
                2.5.2 释放介质的选择
                2.5.3标准曲线绘制
                2.5.4 精密度实验
                2.5.5 测定方法与结果
                2.5.6 体外释放模型拟合
        3 讨论
        4 本章小结
第三章 不同影响因素对PEG化新藤黄酸脂质体加速血液清除现象影响的考察
    第一节GNA生物样品分析方法的确立
        1 仪器与材料
            1.1 仪器
            1.2 材料
            1.3 实验动物
        2 方法与结果
            2.1 血浆样品中GNA含量测定方法
                2.1.1 血浆样品处理
                2.1.2 色谱条件
                2.1.3 专属性
                2.1.4 标准曲线的建立
                2.1.5 定量下限（LLOQ）
                2.1.6 残留
                2.1.7 精密度和准确度
                2.1.8 回收率
                    2.1.8.1 提取回收率
                    2.1.8.2 相对回收率
                2.1.9 GNA血浆样品稳定性
                    2.1.9.1 储备液稳定性
                    2.1.9.2 GNA血浆样品室温放置稳定性
                    2.1.9.3 GNA血浆样品反复冻融稳定性
            2.2 组织样品分析方法建立-HPLC法
                2.2.1 组织样品处理
                2.2.2 色谱条件
                2.2.3 专属性考察
                2.2.4 标准曲线的制备
                2.2.5 精密度试验
                2.2.6 回收率
                    2.2.6.1 提取回收率
                    2.2.6.2 相对回收率
        3 讨论
    第二节 时间与剂量因素对加速血液清除现象的影响
        1 仪器和材料
            1.1 仪器
            1.2 材料和试剂
            1.3 试验动物
        2 血浆药动参数研究
            2.1 不同间隔天数对二次给药血药浓度的影响
                2.1.1 给药剂量
                2.1.2 分组及给药方式
                2.1.3 样品处理与分析
                2.1.4 测定结果
                    2.1.4.1 药时曲线的绘制
                    2.1.4.2 药动学参数分析
            2.2 剂量因素（前后两次给药剂量相同）对二次给药血药浓度的影响58
                2.2.1 给药剂量
                2.2.2 给药间隔天数
                2.2.3 分组及给药方式
                2.2.4 样品处理与分析
                2.2.5 测定结果
                    2.2.5.1 药时曲线的绘制
                    2.2.5.2 药动学参数分析
            2.3 剂量因素（首次给药剂量分组，二次给药剂量相同）对二次给药血药浓度的影响
                2.3.1 给药剂量
                2.3.2 给药间隔天数
                2.3.3 分组及给药方式
                2.3.4 样品处理与分析
                2.3.5 测定结果
                    2.3.5.1 药时曲线的绘制
                    2.3.5.2 药动学参数分析
        3 组织分布研究
            3.1 不同间隔天数对二次给药组织药物蓄积的影响
                3.1.1 给药剂量
                3.1.2 分组及给药方式
                3.1.3 样品处理与分析
                3.1.4 实验结果
            3.2 剂量因素（前后两次给药剂量相同）对二次给药组织药物蓄积的影响
                3.2.1 给药剂量
                3.2.2 给药间隔天数
                3.2.3 分组及给药方式
                3.2.4 样品处理与分析
                3.2.5 实验结果
            3.3 剂量因素（第一次给药剂量分组，二次给药剂量相同）对二次给药血药浓度的影响
                3.3.1 给药剂量
                3.3.2 给药间隔天数
                3.3.3 分组及给药方式
                3.3.4 样品处理与分析
                3.3.5 实验结果
        4 讨论
        5 本章小结
第四章 PEG化新藤黄酸脂质体加速血液清除现象的产生机制初步探讨
    第一节ELISA法检测血清抗PEG-IgM抗体的初步研究
        1 仪器和材料
            1.1 主要仪器
            1.2 材料和试剂
            1.3 实验动物
        2 实验方法
            2.1 样品采集
            2.2 试剂配制
            2.3 操作步骤
        3 实验结果
        4 讨论
    第二节Western blot检测肝脏组织ABCA1、MDR1、ABCG1蛋白表达水平
        1 仪器和材料
            1.1 主要仪器
            1.2 材料和试剂
        2 实验方法
            2.1 分组及给药方式
            2.2 大鼠肝组织总蛋白提取
            2.3 蛋白定量
            2.4 SDS-PAGE凝胶电泳
        3 实验结果
        4 讨论
        5 本章小结
全文总结
参考文献
综述 PEG化脂质体引起的加速血液清除现象的研究
    参考文献
个人介绍
攻读学位期间发表论文情况
致谢



本文编号：2909574