广金钱草总黄酮对COM损伤HK-2细胞的保护作用及活性成分筛选
发布时间：2020-12-18 16:59
目的:本论文通过对广金钱草乙醇提取物进行分离纯化,获得纯化的总黄酮（TFDS）,再通过ODS柱层析法对TFDS进行不同极性部位的分离,得到广金钱草不同极性部位的黄酮成分。通过体外的抗氧化实验初步筛选得到两个具有较强的抗氧化部位,且利用细胞实验考察TFDS及两个不同极性部位对保护一水草酸钙（COM）损伤HK-2细胞的作用,筛选出药效部位,并对其作用机理进行初步研究。利用细胞膜色谱法对TFDS与HK-2细胞靶向结合成分进行鉴定,获得活性成分。还通过对TFDS成分在草酸钙肾结石大鼠体内代谢的研究,探索其黄酮成分的代谢产物及途径,为更深一步探究广金钱草活性成分提供基础。方法:1.TFDS的纯化与活性部位初步筛选实验利用广金钱草醇提物,通过大孔树脂联合聚酰胺分离纯化得到纯度较高的总黄酮,并利用ODS柱层析,以甲醇和水作为洗脱溶剂进行梯度洗脱,获得不同极性的黄酮部位。并采用DPPH、ABTS、铜的还原能力方法对洗脱部位进行抗氧化能力筛选,筛选出两个活性较强的部位,为后续的研究提供基础。2.TFDS及不同极性部位对治疗COM损伤细胞的保护作用选择TFDS、25%洗脱部位、85%洗脱部位为研究对象,采...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
广金钱草不同洗脱部位色谱图(λ=272nm)
注：1.维采宁-2，2.大豆苷，3.异夏佛塔苷，4.夏佛塔苷，5.异牡荆苷，6.橙皮苷图 2 广金钱草不同洗脱部位色谱叠加图(λ=272nm)Figure 2 Chromatogram overlay of different elution parts of TFDS (λ=272nm)A. TFDS；B.5%；C.25%；D.85%；E.100%;F.对照品A.TFDS; B.5%elution; C.25%elution; D.85%elution; E.100%elution; F.Reference sub0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 13000001400000150000016000001234563.2 TFDS 及不同洗脱部位的抗氧化活性结果3.2.1 TFDS 及不同洗脱部位清除 DPPH 作用实验利用 DPPH 清除法测定 TFDS 及不同洗脱部位的抗氧化活性，如图 3 可知品对 DPPH 的清除率在一定浓度范围内具浓度依赖性。且不同的洗脱部位所表现的除率存在差异性。综合图 3、表 1 可观察到不同部位对 DPPH 清除能力依次为 25%脱部位>TFDS>5%洗脱部位>100%洗脱部位>85%洗脱部位。CDEF
广州中医药大学 2018 届硕士学位论文3.2.2 TFDS 及不同洗脱部位清除 ABTS+·作用ABTS+·法广泛用于检测药物的清除自由基能力。当药物具有抗氧化性的时候，可通过提供氢来清除自由基。实验利用 ABTS+·法检测 TFDS 及不同洗脱部位清ABTS+·能力中发现,在一定的浓度范围内，TFDS 及各洗脱部位具有明显的剂量依关系，如图 4 所示。从清除 ABTS+·自由基中的 IC50值观察到 TFDS 清除作用与 85洗脱部位相当，其次为 25%洗脱部位，5%洗脱部位清除能力最弱。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中草药活性成分的高通量筛选技术研究进展[J]. 权宁海,康英锦,李东浩,商海波. 分析科学学报. 2017(05)
[2]HPLC-MS/MS同时测定广金钱草中8种成分在大鼠胆汁中的浓度及其排泄动力学研究[J]. 樊雪艳,王鑫,刘晓晨,王春英. 中国中药杂志. 2017(19)
[3]基于转基因秀丽隐杆线虫模型的抗阿尔茨海默病中药成分筛选思路[J]. 黄燕辉,赵路光,孔令朔,王奇. 中药新药与临床药理. 2017(05)
[4]以PRDM1基因启动子为靶点的药物筛选模型的建立研究[J]. 胡文坛,王婷婷,张世杰,何鑫,张靖宇,刘红春. 重庆医学. 2017(11)
[5]衰老动物模型的研究及其在抗衰老药物活性筛选中的应用[J]. 周玉枝,闫明亮,高丽,秦雪梅,杜冠华. 中草药. 2017(06)
[6]板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响[J]. 侯宪邦,范方田,何立巍. 中国实验方剂学杂志. 2017(09)
[7]片仔癀上调miR-200a抑制大肠癌耐药细胞转移的作用机制[J]. 沈阿灵,刘丽雅,齐飞,陈宏伟,魏丽慧,林久茂,蔡巧燕,彭军. 中华中医药杂志. 2016(09)
[8]保元汤中具有心肌保护作用的活性成分及其潜在作用靶点研究[J]. 舒泽柳,曾克武,马晓丽,屠鹏飞,李军,姜勇. 中国中药杂志. 2016(05)
[9]广金钱草多糖抗氧化活性研究[J]. 林瑶,黄锁义,刘春媚,钟建,梁艳玲,胡金坤. 中南药学. 2016(02)
[10]抗糖尿病天然药物的PPARγ活性部位筛选[J]. 林叶新,夏之宁. 天然产物研究与开发. 2016(04)
博士论文
[1]排石冲剂对肾结石大鼠肾小管上皮细胞氧化应激损伤及occludin、ZO-1表达的影响[D]. 曹秋实.湖北中医药大学 2015
[2]体外代谢用于中药活性成分筛选的研究[D]. 孔亮.中国科学院研究生院（大连化学物理研究所） 2005
[3]广金钱草及土大黄有效成分研究与应用[D]. 卢兖伟.中国人民解放军军事医学科学院 2003
硕士论文
[1]应用成骨细胞生物色谱法研究牡丹皮促进骨折愈合的效应物质[D]. 顾伟伟.南京中医药大学 2017
[2]广金钱草总黄酮抑制肾草酸钙结石形成的作用机制研究[D]. 汪茜.广州中医药大学 2015
[3]牛磺酸干预草酸和草酸钙晶体诱导的HK-2细胞线粒体氧化应激损伤的研究[D]. 何勇雄.广西医科大学 2013
[4]基于转基因斑马鱼抗血管生成中药活性成分筛选及其作用机制研究[D]. 郑浩江.南方医科大学 2013
[5]基于液质联用技术的金钱草与广金钱草化学成分比较及广金钱草的药动学和排泄动力学研究[D]. 孙冬晓.河北医科大学 2013
[6]广金钱草的生物活性成分研究[D]. 刘茁.沈阳药科大学 2005
本文编号：2924309
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
广金钱草不同洗脱部位色谱图(λ=272nm)
注：1.维采宁-2，2.大豆苷，3.异夏佛塔苷，4.夏佛塔苷，5.异牡荆苷，6.橙皮苷图 2 广金钱草不同洗脱部位色谱叠加图(λ=272nm)Figure 2 Chromatogram overlay of different elution parts of TFDS (λ=272nm)A. TFDS；B.5%；C.25%；D.85%；E.100%;F.对照品A.TFDS; B.5%elution; C.25%elution; D.85%elution; E.100%elution; F.Reference sub0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 13000001400000150000016000001234563.2 TFDS 及不同洗脱部位的抗氧化活性结果3.2.1 TFDS 及不同洗脱部位清除 DPPH 作用实验利用 DPPH 清除法测定 TFDS 及不同洗脱部位的抗氧化活性，如图 3 可知品对 DPPH 的清除率在一定浓度范围内具浓度依赖性。且不同的洗脱部位所表现的除率存在差异性。综合图 3、表 1 可观察到不同部位对 DPPH 清除能力依次为 25%脱部位>TFDS>5%洗脱部位>100%洗脱部位>85%洗脱部位。CDEF
广州中医药大学 2018 届硕士学位论文3.2.2 TFDS 及不同洗脱部位清除 ABTS+·作用ABTS+·法广泛用于检测药物的清除自由基能力。当药物具有抗氧化性的时候，可通过提供氢来清除自由基。实验利用 ABTS+·法检测 TFDS 及不同洗脱部位清ABTS+·能力中发现,在一定的浓度范围内，TFDS 及各洗脱部位具有明显的剂量依关系，如图 4 所示。从清除 ABTS+·自由基中的 IC50值观察到 TFDS 清除作用与 85洗脱部位相当，其次为 25%洗脱部位，5%洗脱部位清除能力最弱。
【参考文献】：
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[3]基于转基因秀丽隐杆线虫模型的抗阿尔茨海默病中药成分筛选思路[J]. 黄燕辉,赵路光,孔令朔,王奇. 中药新药与临床药理. 2017(05)
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[6]板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响[J]. 侯宪邦,范方田,何立巍. 中国实验方剂学杂志. 2017(09)
[7]片仔癀上调miR-200a抑制大肠癌耐药细胞转移的作用机制[J]. 沈阿灵,刘丽雅,齐飞,陈宏伟,魏丽慧,林久茂,蔡巧燕,彭军. 中华中医药杂志. 2016(09)
[8]保元汤中具有心肌保护作用的活性成分及其潜在作用靶点研究[J]. 舒泽柳,曾克武,马晓丽,屠鹏飞,李军,姜勇. 中国中药杂志. 2016(05)
[9]广金钱草多糖抗氧化活性研究[J]. 林瑶,黄锁义,刘春媚,钟建,梁艳玲,胡金坤. 中南药学. 2016(02)
[10]抗糖尿病天然药物的PPARγ活性部位筛选[J]. 林叶新,夏之宁. 天然产物研究与开发. 2016(04)
博士论文
[1]排石冲剂对肾结石大鼠肾小管上皮细胞氧化应激损伤及occludin、ZO-1表达的影响[D]. 曹秋实.湖北中医药大学 2015
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硕士论文
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[6]广金钱草的生物活性成分研究[D]. 刘茁.沈阳药科大学 2005
本文编号：2924309
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