虫草素上调SIRT1表达减少内皮细胞凋亡相关信号通路研究
发布时间：2020-12-19 06:49
目的探讨胞外信号调节激酶（ERK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）、蛋白激酶B（AKT）、Toll样受体4（TLR4）信号传导通路在虫草素上调沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）的表达、减少高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡中的作用,旨在明确虫草素对内皮细胞保护作用的机制。方法选取处于对数生长期的状态优良的2-3代HUVECs用于实验。选取四个通路的抑制剂进行相关信号通路的研究。实验分组:（1）对照组;（2）高糖组;（3）白藜芦醇组;（4）10μM虫草素组;（5）20μM虫草素组;（6）雷帕霉素（m TOR抑制剂）组;（7）雷帕霉素+10μM虫草素组;（8）雷帕霉素+20μM虫草素组;（9）CLI-095（TLR4抑制剂）组;（10）CLI-095+20μM虫草素组;（11）AZD5363（AKT抑制剂）组;（12）AZD5363+20μM虫草素组;（13）U0126（ERK抑制剂）组;（14）U0126+20μM虫草素组。各组细胞培养2448h后,应用Brd U-ELISA法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人脐静脉内皮细胞倒置相差显微镜观察结果
1 人脐静脉内皮细胞倒置相差显微镜观察结果（A:100×，B:400×）的免疫法细胞鉴定免疫化学染色法细胞鉴定结果显示，有 95%以胞质中含有棕黄色颗粒，胞核被苏木素染色后呈B
图 4 虫草素促进 SIRT1 mRNA 表达与 mTOR 信号通路关系注：SIRT1：沉默信息调节因子 2 同源蛋白 1；mTOR：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白。A.实时荧光定量 PCR 基因的扩增曲线。B.实时荧光定量 PCR 基因的溶解曲线。C.不同处理组 SIRT1mRNA 相对表达倍数比较。与对照组比较，##P＜0.01；与高糖组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与单用雷帕霉素组比较，△P＜0.05；与 10μM 虫草素组相比，▲P＜0.05。2.3.3 虫草素与 ERK、AKT 信号通路在促进 SIRT1 mRNA 表达中的作用按实验分组干预 48h 后，相对定量 PCR 法测定各组 SIRT1 mRNA 表达水平。与对照组比较，高糖组细胞 SIRT1mRNA 表达明显降低（P＜0.01）；与高糖组比较，白藜芦醇组、单用虫草素组、单用 AZD5363（AKT 抑制剂）的 SIRT1 mRNA表达明显升高（P＜0.05）；与单用虫草素组比，虫草素+AZD5363 组 SIRT1 mRNA表达无明显变化（P＞0.05）；与单用虫草素组比，虫草素+U0126（ERK 抑制剂）组细胞 SIRT1 mRNA 表达显著降低（P＜0.05，图 5）。A
【参考文献】：
期刊论文
[1]虫草提取物对高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤模型的保护作用[J]. 阮景明,叶章正,黄华玮,林帆,余惠珍,朱鹏立. 中华老年心脑血管病杂志. 2013(10)
博士论文
[1]JAK2/STAT通路在人肾小球系膜细胞衰老过程中的作用研究[D]. 周红丽.中国医科大学 2010
硕士论文
[1]虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用探讨[D]. 林慧榕.福建医科大学 2016
[2]保护血管内皮细胞食药用真菌乙酸乙酯提取物的筛选及机制探讨[D]. 叶章正.福建医科大学 2012
本文编号：2925464
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
人脐静脉内皮细胞倒置相差显微镜观察结果
1 人脐静脉内皮细胞倒置相差显微镜观察结果（A:100×，B:400×）的免疫法细胞鉴定免疫化学染色法细胞鉴定结果显示，有 95%以胞质中含有棕黄色颗粒，胞核被苏木素染色后呈B
图 4 虫草素促进 SIRT1 mRNA 表达与 mTOR 信号通路关系注：SIRT1：沉默信息调节因子 2 同源蛋白 1；mTOR：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白。A.实时荧光定量 PCR 基因的扩增曲线。B.实时荧光定量 PCR 基因的溶解曲线。C.不同处理组 SIRT1mRNA 相对表达倍数比较。与对照组比较，##P＜0.01；与高糖组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与单用雷帕霉素组比较，△P＜0.05；与 10μM 虫草素组相比，▲P＜0.05。2.3.3 虫草素与 ERK、AKT 信号通路在促进 SIRT1 mRNA 表达中的作用按实验分组干预 48h 后，相对定量 PCR 法测定各组 SIRT1 mRNA 表达水平。与对照组比较，高糖组细胞 SIRT1mRNA 表达明显降低（P＜0.01）；与高糖组比较，白藜芦醇组、单用虫草素组、单用 AZD5363（AKT 抑制剂）的 SIRT1 mRNA表达明显升高（P＜0.05）；与单用虫草素组比，虫草素+AZD5363 组 SIRT1 mRNA表达无明显变化（P＞0.05）；与单用虫草素组比，虫草素+U0126（ERK 抑制剂）组细胞 SIRT1 mRNA 表达显著降低（P＜0.05，图 5）。A
【参考文献】：
期刊论文
[1]虫草提取物对高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤模型的保护作用[J]. 阮景明,叶章正,黄华玮,林帆,余惠珍,朱鹏立. 中华老年心脑血管病杂志. 2013(10)
博士论文
[1]JAK2/STAT通路在人肾小球系膜细胞衰老过程中的作用研究[D]. 周红丽.中国医科大学 2010
硕士论文
[1]虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用探讨[D]. 林慧榕.福建医科大学 2016
[2]保护血管内皮细胞食药用真菌乙酸乙酯提取物的筛选及机制探讨[D]. 叶章正.福建医科大学 2012
本文编号：2925464
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