AMPKα2介导香草酸抗心肌缺氧/复氧损伤作用研究

发布时间：2020-12-23 21:07

　　目的:香草酸（vanillic acid,VA）是植物次生代谢产生的酚类化合物,现有的实验研究成果已经提供了香草酸对心血管疾病有效的证据。本课题进一步研究香草酸抗心肌缺氧/复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤的分子机制。方法:以H9c2细胞为实验对象,经不同浓度的香草酸预处理后,构建心肌A/R损伤模型,MTS法检测H9c2细胞生存率,Western Blot法检测AMPKα2蛋白表达,流式细胞仪检测H9c2细胞活性氧（ROS）水平及线粒体膜电位（ΔΨ_m）变化,分光光度计法检测H9c2细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性、肌酸磷酸激酶（CPK）活性、线粒体通透性转换孔（mPTP）开放程度和半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）活性,流式细胞仪和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测H9c2细胞凋亡水平。结果:VA预处理对心肌A/R损伤保护存在量效关系,不同浓度的香草酸预处理各实验组与A/R组相比,1.00mM VA预处理组的细胞存活率增加最显著（p<0.05）;VA+A/R组的AMPKα2蛋白较A/R组明显上调（p<... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写及全称和中文对照表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 主要材料及试剂
    2.2 实验主要仪器和设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 H9c2细胞的培养
        2.3.2 慢病毒感染H9c2细胞
        2.3.3 H9c2细胞体外缺氧/复氧（A/R）损伤模型的构建
        2.3.4 实验分组及处理
        2.3.5 MTS法检测H9c2细胞存活率
        2.3.6 蛋白质免疫印迹（WesternBlot）法检测H9c2细胞中蛋白的表达.
        2.3.7 H9c2细胞乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸磷酸激酶（CPK）的活性检测
        2.3.8 DCFH-DA法检测H9c2细胞内活性氧（ROS）含量
        2.3.9 JC-1法检测H9c2细胞线粒体膜电位（ΔΨm）
        2.3.10 分光光度计法检测H9c2细胞线粒体通透性转换孔开放
        2.3.11 分光光度计法检测H9c2细胞caspase-3活性
        2.3.12 AnnexinV-FITC和PI双染色法检测H9c2细胞凋亡
        2.3.13 TUNEL法检测H9c2细胞凋亡
    2.4 统计学分析
第3章 结果
    3.1 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞存活率的影响
    3.2 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞AMPKα2蛋白表达的影响
    3.3 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞LDH和CPK的影响
    3.4 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞ROS生成的影响
    3.5 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞ΔΨm的影响
    3.6 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞mPTP开放的影响
    3.7 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞caspase-3活性的影响
    3.8 香草酸预处理对A/R损伤后H9c2细胞凋亡的影响
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
综述 AMPK：在心肌缺血中的能量传递和存活机制
    参考文献



本文编号：2934360