葛根汤的抗炎活性及其对MAPK和NF-κB炎性信号通路的调控机制

发布时间：2020-12-27 12:06

　　葛根汤,来源于东汉张仲景的《伤寒论》,是具有代表性的经方之一。葛根汤为解表剂,具有发汗解表,升津舒筋的作用,在临床上主要应用于肩周炎、病毒性肠炎、风寒感冒等疾病。葛根汤在抗炎方面临床应用比较成熟,但其具体的抗炎分子机理尚不清楚,因此以2015版中国药典记载的葛根汤处方为例,研究体内抗炎活性,以LPS激活RAW 264.7细胞建立炎症模型,探究葛根汤的抗炎分子机制。采用高效液相色谱法（HPLC）对葛根汤组方各中药材的指标性成分进行含量测定,评价葛根汤各组方中药材的质量。随机抽取两批葛根汤中药材进行测定,实验结果表明各组方中药材中指标性成分的含量均符合2015版药典规定。按照2015版中国药典记载的方法制备葛根汤溶液。取葛根和麻黄温浸30 min,与桂枝、白芍、甘草、生姜和大枣五味药材合并一起进行煎煮两次,每次30 min,合并煎液,减压浓缩至一定相对密度,即得葛根汤溶液,供后续实验使用。通过检测葛根汤对角叉菜胶致大鼠足肿胀作用和二甲苯致小鼠耳肿胀作用两个急性炎症模型来研究葛根汤的体内抗炎活性。角叉菜胶致大鼠足肿胀和二甲苯致小鼠耳肿胀实验结果表明,葛根汤能够抑制角叉菜胶致大鼠足肿胀和二甲苯... 

【文章来源】：烟台大学山东省

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 葛根汤的主要药理作用
        1.1.1 降血压
        1.1.2 抗炎镇痛作用
        1.1.3 抗流感、解热作用
        1.1.4 抗过敏作用
        1.1.5 免疫调节作用
    1.2 葛根汤的主要临床应用
        1.2.1 在心血管方面的作用
        1.2.2 感冒
        1.2.3 颈椎病
        1.2.4 肩周炎
        1.2.5 原发性痛经
        1.2.6 呼吸道感染
        1.2.7 其它作用
    1.3 立题依据及意义
2 实验材料和方法
    2.1 药材
    2.2 主要实验仪器
    2.3 实验材料
        2.3.1 试剂和药品
        2.3.2 抗体
        2.3.3 细胞株
    2.4 主要溶液配制
        2.4.1 RPMI-1640 完全培养基
        2.4.2 无菌PBS缓冲溶液（pH7.2-7.4）
        2.4.3 MTT溶液（5 mg/mL）
        2.4.4 脂多糖（LPS）溶液
        2.4.5 SDS-PAGE上样缓冲溶液（5×）
        2.4.6 电泳缓冲液（5×）
        2.4.7 Griess A溶液
        2.4.8 Griess B溶液
        2.4.9 TBS-T溶液
        2.4.10 7%脱脂奶粉
        2.4.11 1%角叉菜胶溶液
        2.4.12 葛根汤颗粒溶液
        2.4.13 醋酸地塞米松溶液
    2.5 高效液相色谱法测定葛根汤各组方药材中指标性成分的含量
        2.5.1 实验原理
        2.5.2 仪器
        2.5.3 实验方法
    2.6 葛根汤的制备
    2.7 葛根汤对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
        2.7.1 实验原理
        2.7.2 实验动物
        2.7.3 实验方法
        2.7.4 实验流程图
    2.8 葛根汤对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
        2.8.1 实验原理
        2.8.2 实验动物
        2.8.3 实验方法
        2.8.4 实验流程图
    2.9 细胞培养
        2.9.1 细胞复苏
        2.9.2 细胞传代培养
        2.9.3 细胞计数
        2.9.4 细胞冻存
    2.10 细胞存活率实验
        2.10.1 实验原理
        2.10.2 实验方法
        2.10.3 实验流程图
    2.11 Griess法测定NO水平
        2.11.1 实验原理
        2.11.2 实验方法
        2.11.3 实验流程图
    2.12 ELISA实验
        2.12.1 实验原理
        2.12.2 ELISA法测定TNF-a水平
        2.12.3 ELISA法测定PGE2 水平
        2.12.4 ELISA法测定IL-6 水平
    2.13 免疫印迹法检测相关蛋白表达水平
        2.13.1 实验原理
        2.13.2 蛋白提取
        2.13.3 蛋白样品变性
        2.13.4 SDS-PAGE凝胶电泳
        2.13.5 转膜
        2.13.6 封闭
        2.13.7 一抗孵育
        2.13.8 二抗孵育
        2.13.9 化学发光反应
        2.13.10 数据处理
        2.13.11 实验流程图
3 实验结果
    3.1 HPLC法测定葛根汤各组方各药材中指标性成分的含量
    3.2 葛根汤对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
    3.3 葛根汤对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
    3.4 MTT法测定葛根汤对RAW264.7 细胞的细胞毒性
    3.5 葛根汤对LPS诱导RAW264.7 细胞释放NO的抑制作用
    3.6 葛根汤对LPS诱导RAW264.7 细胞释放TNF-α的抑制作用
2 的抑制作用">    3.7 葛根汤对LPS诱导RAW274.7 细胞释放PGE₂ 的抑制作用
    3.8 葛根汤对LPS诱导RAW264.7 细胞释放IL-6 的抑制作用
    3.9 Western Blot实验结果
        3.9.1 葛根汤对iNOS、COX-2 蛋白表达水平的影响
        3.9.2 葛根汤对p-ERK、p-JNK和 p-p38 蛋白表达的影响
        3.9.3 葛根汤对IkB-α蛋白降解以及p65 核转位的影响
4 讨论
5 结论
附录
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]阿托伐他汀联合卡托普利治疗高血压患者疗效及对血压水平、颈动脉IMT和血清ET-1、NO、IL-6水平的影响[J]. 王芳.  哈尔滨医药. 2019(01)
[2]支气管肺炎患儿血清hs-CRP、IL-6和TNF-α水平变化及临床意义[J]. 刘宪河.  河北医药. 2019(01)
[3]急性胰腺炎患者血清ET、MCP-1、TNF-α、IL-6水平变化及意义[J]. 杨晴,林刚,林周,薛育政.  山东医药. 2018(41)
[4]葛根的化学成分和药理作用和用途[J]. 赖建有,李兴波.  农业与技术. 2018(20)
[5]健脾益气方配合早期肠内营养对结直肠癌术后患者胃肠功能及血清miR-19a、TNF-α、IL-6水平的影响[J]. 田军军,陶然,曹才望,夏绍友,李晨.  世界中西医结合杂志. 2018(10)
[6]利用MTT法检测活体线虫的主要影响因素及可行性研究[J]. 王瑞,祝晓蕊,梁萌,王新芳,王文蕊,陈林军,钱英红,陈湘江,杨晓野.  中国兽医学报. 2018(09)
[7]葛根汤联合针灸推拿治疗神经根型颈椎病的疗效观察[J]. 谢敏.  中国医药指南. 2018(25)
[8]葛根汤加减治疗胃肠型感冒临床观察[J]. 刘强,杨宏彬,罗献伦,刘小平,胡寿松,吴文斌.  中医药临床杂志. 2018(07)
[9]老年血管性痴呆患者血清C反应蛋白及白介素6检测分析[J]. 徐亚丽,姚莉,何小蓉,邓霞,张瑷琳,漆静,张兴平.  中国实用神经疾病杂志. 2018(12)
[10]葛根汤治疗颈型颈椎病(风寒袭表证)60例临床疗效观察[J]. 喻林,范小春,余飞.  中医临床研究. 2018(18)

硕士论文
[1]中国莱姆病阿弗西尼基因型感染蛋白免疫印迹法诊断方法的研究[D]. 刘志云.南华大学 2011



本文编号：2941704