蜂斗菜素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路抗结肠癌作用体外和体内实验研究
发布时间：2020-12-30 18:57
目的:本研究拟通过建立体外结肠癌细胞株模型观察蜂斗菜素对结肠癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移,以及在裸鼠异种移植瘤模型中观察其对裸鼠移植瘤生长的影响。通过检测PI3K-Akt-m TOR信号通路的相关分子,初步研究其影响结肠癌细胞生物学行为的机制,为蜂斗菜素的临床应用提供新的实验依据,也为将蜂斗菜素开发成新的抗肿瘤药物之一奠定基础。方法:在体外实验中,采用MTT法检测蜂斗菜素对人结肠癌细胞株Caco-2、Lo Vo、SW-620和HT-29增殖抑制率的影响;采用流式细胞仪Annexine V-FITC/PI染色技术探究细胞凋亡率的变化;采用流式细胞PI染色技术检测细胞周期的变化;采用Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞核的变化;采用JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位;使用划痕愈合实验测试对细胞迁移能力的影响;Transwell实验用于探究细胞的侵袭能力的变化;采用PCR法检测细胞PI3K-Akt-m TOR信号通路相关m RNA（Akt、m TOR、P70S6K、MMP-3、MMP-9、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2）的表达水平;并采用Western bl...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
蜂斗菜素的化学结构（CHO，分子量=316.44）
19Figure 2-2 Petasin induced apoptosis in SW-620 cells. SW-620 cells were treated with 25μmol/L Petasin for 48 h. Apoptosis was detected byAnnexin-V-FITC/PI staining and flowcytometry. p < 0.01 versus control cells.图 2-2 蜂斗菜素(25 μmol/L)处理 48 h 对结肠癌细胞 SW-620 细胞凋亡的影响.与对照组相比，p < 0.012.4.3 蜂斗菜素对结肠癌 SW-620 细胞周期的影响采用流式细胞术检测了 SW-620 细胞周期的变化，结果见图 2-3。对照组胞周期比率依次为 G0/G1（64.15 ± 8.89）%、S（24.51 ± 2.29）%和 G2/M（7.± 0.89）%；蜂斗菜素组（25 μmol/L）细胞周期比率依次为 G0/G1（64.39 ± 11.97）%S（24.81 ± 3.62）%和 G2/M（9.05 ± 1.28）%。两组之间进行统计学分析发现异无统计学意义（p＞0.05），表明蜂斗菜素对 SW-620 细胞周期无显著影响。
20图 2-3 蜂斗菜素(25 μmol/L)对结肠癌细胞 SW-620 细胞周期影响。Figure 2-3 Effects of petasin on cell cycle progression in SW-620 cells.2.4.4 蜂斗菜素对结肠癌 SW-620 细胞核形态的影响如图 2-4 所示，经 Hoechst33258 荧光染色后，于荧光显微镜下观察可对照组 SW-620 细胞核呈现出均匀微弱的蓝色荧光，细胞结构完整，而蜂斗
【参考文献】：
期刊论文
[1]Systematic review of colorectal cancer screening guidelines for average-risk adults: Summarizing the current global recommendations[J]. Florence Bénard,Alan N Barkun,Myriam Martel,Daniel von Renteln. World Journal of Gastroenterology. 2018(01)
[2]中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)[J]. 顾晋,汪建平. 中华临床医师杂志(电子版). 2018(01)
[3]中医药防治结直肠癌研究进展[J]. 李娟,杨柱,唐东昕,龙奉玺,罗莉,王镜辉,郭斌,陈杰,王倩. 湖南中医杂志. 2017(12)
[4]中美结直肠癌流行病学特征及防诊治策略的对比分析[J]. 王锡山. 中华结直肠疾病电子杂志. 2017(06)
[5]结直肠癌治疗进展[J]. 杜楠. 中国癌症防治杂志. 2017(05)
[6]结直肠癌流行病学东西方差异对肿瘤部位的影响[J]. 吴泽华,邓艳红. 中国癌症防治杂志. 2017(05)
[7]结直肠癌的中药治疗进展[J]. 马瑞,徐玲,曲秀娟,车晓芳,郭天舒,刘云鹏. 辽宁中医杂志. 2017(10)
[8]中西医结合治疗大肠癌的研究进展[J]. 周懿明,徐婧,宋怡琳. 中西医结合心血管病电子杂志. 2017(29)
[9]中西医结合治疗大肠癌的研究进展[J]. 沈艳,李莉. 中国临床研究. 2017(08)
[10]香菇多糖对结肠癌化疗患者免疫功能及外周血中炎症因子水平的影响[J]. 万盟,朱余兵,邱润泽,田星,朱庆贵. 中国医药导报. 2017(12)
硕士论文
[1]蜂斗菜素抗神经母细胞瘤细胞增殖作用的分子机制研究[D]. 王明洋.郑州大学 2014
[2]蜂斗菜素和查尔酮衍生物抑制人神经母细胞瘤细胞增殖作用及其机制研究[D]. 程月芳.郑州大学 2012
本文编号：2948135
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
蜂斗菜素的化学结构（CHO，分子量=316.44）
19Figure 2-2 Petasin induced apoptosis in SW-620 cells. SW-620 cells were treated with 25μmol/L Petasin for 48 h. Apoptosis was detected byAnnexin-V-FITC/PI staining and flowcytometry. p < 0.01 versus control cells.图 2-2 蜂斗菜素(25 μmol/L)处理 48 h 对结肠癌细胞 SW-620 细胞凋亡的影响.与对照组相比，p < 0.012.4.3 蜂斗菜素对结肠癌 SW-620 细胞周期的影响采用流式细胞术检测了 SW-620 细胞周期的变化，结果见图 2-3。对照组胞周期比率依次为 G0/G1（64.15 ± 8.89）%、S（24.51 ± 2.29）%和 G2/M（7.± 0.89）%；蜂斗菜素组（25 μmol/L）细胞周期比率依次为 G0/G1（64.39 ± 11.97）%S（24.81 ± 3.62）%和 G2/M（9.05 ± 1.28）%。两组之间进行统计学分析发现异无统计学意义（p＞0.05），表明蜂斗菜素对 SW-620 细胞周期无显著影响。
20图 2-3 蜂斗菜素(25 μmol/L)对结肠癌细胞 SW-620 细胞周期影响。Figure 2-3 Effects of petasin on cell cycle progression in SW-620 cells.2.4.4 蜂斗菜素对结肠癌 SW-620 细胞核形态的影响如图 2-4 所示，经 Hoechst33258 荧光染色后，于荧光显微镜下观察可对照组 SW-620 细胞核呈现出均匀微弱的蓝色荧光，细胞结构完整，而蜂斗
【参考文献】：
期刊论文
[1]Systematic review of colorectal cancer screening guidelines for average-risk adults: Summarizing the current global recommendations[J]. Florence Bénard,Alan N Barkun,Myriam Martel,Daniel von Renteln. World Journal of Gastroenterology. 2018(01)
[2]中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)[J]. 顾晋,汪建平. 中华临床医师杂志(电子版). 2018(01)
[3]中医药防治结直肠癌研究进展[J]. 李娟,杨柱,唐东昕,龙奉玺,罗莉,王镜辉,郭斌,陈杰,王倩. 湖南中医杂志. 2017(12)
[4]中美结直肠癌流行病学特征及防诊治策略的对比分析[J]. 王锡山. 中华结直肠疾病电子杂志. 2017(06)
[5]结直肠癌治疗进展[J]. 杜楠. 中国癌症防治杂志. 2017(05)
[6]结直肠癌流行病学东西方差异对肿瘤部位的影响[J]. 吴泽华,邓艳红. 中国癌症防治杂志. 2017(05)
[7]结直肠癌的中药治疗进展[J]. 马瑞,徐玲,曲秀娟,车晓芳,郭天舒,刘云鹏. 辽宁中医杂志. 2017(10)
[8]中西医结合治疗大肠癌的研究进展[J]. 周懿明,徐婧,宋怡琳. 中西医结合心血管病电子杂志. 2017(29)
[9]中西医结合治疗大肠癌的研究进展[J]. 沈艳,李莉. 中国临床研究. 2017(08)
[10]香菇多糖对结肠癌化疗患者免疫功能及外周血中炎症因子水平的影响[J]. 万盟,朱余兵,邱润泽,田星,朱庆贵. 中国医药导报. 2017(12)
硕士论文
[1]蜂斗菜素抗神经母细胞瘤细胞增殖作用的分子机制研究[D]. 王明洋.郑州大学 2014
[2]蜂斗菜素和查尔酮衍生物抑制人神经母细胞瘤细胞增殖作用及其机制研究[D]. 程月芳.郑州大学 2012
本文编号：2948135
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