新藤黄酸通过PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预HUVEC细胞血管生成的研究
发布时间：2021-01-03 15:56
本实验通过之前研究,发现GNA在抑制肿瘤血管生成方面亦表现出很好的生物活性,浓度在2.0μM以上时即能够阻断条件培养液中血管形成因子对HUVEC的促增殖作用,并在一定浓度范围内呈剂量依赖性;将两种不同的细胞进行复合培养,结果表明浓度在2.0 μM以上时GNA能阻断肺癌A549细胞培养上清诱导的小管形成,提示GNA可阻止肿瘤细胞分泌的血管生成因子,影响细胞的增殖和管腔形成,成为干预肿瘤血管生成的重要环节。所以研究新藤黄酸如何干预血管生成的机制,为其作为抗癌新药的开发,做好理论基础。1目的建立非直接接触型细胞共培养体系,体外模拟血管新生的过程,评价新藤黄酸对血管生成的影响。探讨新藤黄酸影响血管生成的信号转导机制,明确PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在上述效应中的作用,以求更深入研究其抑制血管生成的关键靶点。2方法在这项研究中,我们培养了人脐静脉内皮细胞;采用MTT法和细胞克隆试验方法,研究新藤黄酸对HUVEC细胞增殖影响;倒置显微镜下观察HUVEC细胞形态变化;采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI双染检测人脐静脉内皮细胞凋亡;应用薄层胶原建立血管内皮细胞的二维培...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ细胞的活力的影响（［±ｓ，?ｎ＝３）??
?３．２倒置显微镜观察新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ细胞形态的影响??于图３观察可见，在未加药组，细胞伸展状态良好；２４ｈ后发现人脐静脉内??皮细胞在条件培养液作用下，出现核固缩变圆，体积变小的现象，并有少??量贴壁细胞出现不稳定状态；２?ｐＭ上述条件培养基作用ＨＵＶＥＣ细胞２４ｈ后，??发现少数细胞，体积变大，细胞肿胀、破裂呈现坏死状态，多数细胞变圆，脱落，??漂浮于培养液中；４?上述条件培养基作用下，大量细胞固缩变圆，贴壁不牢，??浮于液体中（图３）。??ｍｍ??ｍｕ??图３倒置显微镜下观察不同浓度新藤黄酸作用ＨＵＶＥＣ细胞后形态变化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
３．３新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ克隆形成率的影响??本研究采用浓度分别为１、２、４｜ｉＭ上述条件培养基处理ＨＵＶＥＣ细胞，平??板克隆检测结果显示，与空白组相比，克隆形成率呈剂量依赖性降低（图４－１?），??提示ＧＮＡ抑制ＨＵＶＥＣ增殖，各组细胞克隆形成率的比较（图４－２）。??＇?Ｖ??图４－１不同浓度新藤黄酸作用ＨＵＶＥＣ细胞后克隆形成率的变化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．４－１?Ｔｈｅ?ｐｌａｔｅ?ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ａｔ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ｘ?１００）??Ａ：?Ｃｏｎｔｒｏｌ；?Ｂ：?ＩｊｘＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｃ：?２．０（ｉＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｄ：?４．０ｐＭＧＮＡ??作用２４ｈ??７?１５０－??１００－?二??１?■?＿?二??５〇－??ｓ?ｏｉｌ＿＿，＿Ｋ＿，＿＿??０?１２?４??ＧＮＡ（?ｐＭ）??１７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]芸香宁碱抑制血管生成作用的研究[J]. 华慧,李增. 安徽医药. 2015(08)
[2]新藤黄酸诱导细胞凋亡抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的研究[J]. 杨莉,王梅,程卉,李庆林. 中国中药杂志. 2011(09)
[3]血管能抑素及中药抗肿瘤血管生成研究进展[J]. 石磊,陈平. 中国中医药信息杂志. 2010(06)
[4]中医药防治恶性肿瘤化疗后骨髓抑制研究[J]. 王振强,谢丽娜,李小江. 中医学报. 2010(02)
[5]藤黄酸及其衍生物抗肿瘤机制研究进展[J]. 苏婧婧,朱国旗,王训翠,李庆林. 亚太传统医药. 2009(11)
[6]大黄素等中药成分抗肿瘤-血管内皮细胞黏附作用及机制研究[J]. 曾雄义,可燕,朱春赟. 上海中医药大学学报. 2008(06)
[7]中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究[J]. 刘菲,王建刚,席守民,马晓娟. 时珍国医国药. 2008(04)
[8]新藤黄酸体内外抗肿瘤作用研究[J]. 程卉,彭代银,王效山,汤立建,黄鹏,李庆林. 中草药. 2008(02)
[9]芹菜素抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞血管内皮生长因子表达[J]. 金雪瑛,任常山. 中国现代医学杂志. 2007(04)
[10]温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对血管内皮生长因子表达的影响[J]. 何必立,吕宾,徐毅,苗青,范一宏. 中医药学刊. 2006(09)
硕士论文
[1]半枝莲含药血清抑制肿瘤血管生成的实验研究[D]. 张妮娜.扬州大学 2005
本文编号：2955085
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ细胞的活力的影响（［±ｓ，?ｎ＝３）??
?３．２倒置显微镜观察新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ细胞形态的影响??于图３观察可见，在未加药组，细胞伸展状态良好；２４ｈ后发现人脐静脉内??皮细胞在条件培养液作用下，出现核固缩变圆，体积变小的现象，并有少??量贴壁细胞出现不稳定状态；２?ｐＭ上述条件培养基作用ＨＵＶＥＣ细胞２４ｈ后，??发现少数细胞，体积变大，细胞肿胀、破裂呈现坏死状态，多数细胞变圆，脱落，??漂浮于培养液中；４?上述条件培养基作用下，大量细胞固缩变圆，贴壁不牢，??浮于液体中（图３）。??ｍｍ??ｍｕ??图３倒置显微镜下观察不同浓度新藤黄酸作用ＨＵＶＥＣ细胞后形态变化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
３．３新藤黄酸对ＨＵＶＥＣ克隆形成率的影响??本研究采用浓度分别为１、２、４｜ｉＭ上述条件培养基处理ＨＵＶＥＣ细胞，平??板克隆检测结果显示，与空白组相比，克隆形成率呈剂量依赖性降低（图４－１?），??提示ＧＮＡ抑制ＨＵＶＥＣ增殖，各组细胞克隆形成率的比较（图４－２）。??＇?Ｖ??图４－１不同浓度新藤黄酸作用ＨＵＶＥＣ细胞后克隆形成率的变化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．４－１?Ｔｈｅ?ｐｌａｔｅ?ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ａｔ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ｘ?１００）??Ａ：?Ｃｏｎｔｒｏｌ；?Ｂ：?ＩｊｘＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｃ：?２．０（ｉＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｄ：?４．０ｐＭＧＮＡ??作用２４ｈ??７?１５０－??１００－?二??１?■?＿?二??５〇－??ｓ?ｏｉｌ＿＿，＿Ｋ＿，＿＿??０?１２?４??ＧＮＡ（?ｐＭ）??１７??
【参考文献】：
期刊论文
[1]芸香宁碱抑制血管生成作用的研究[J]. 华慧,李增. 安徽医药. 2015(08)
[2]新藤黄酸诱导细胞凋亡抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的研究[J]. 杨莉,王梅,程卉,李庆林. 中国中药杂志. 2011(09)
[3]血管能抑素及中药抗肿瘤血管生成研究进展[J]. 石磊,陈平. 中国中医药信息杂志. 2010(06)
[4]中医药防治恶性肿瘤化疗后骨髓抑制研究[J]. 王振强,谢丽娜,李小江. 中医学报. 2010(02)
[5]藤黄酸及其衍生物抗肿瘤机制研究进展[J]. 苏婧婧,朱国旗,王训翠,李庆林. 亚太传统医药. 2009(11)
[6]大黄素等中药成分抗肿瘤-血管内皮细胞黏附作用及机制研究[J]. 曾雄义,可燕,朱春赟. 上海中医药大学学报. 2008(06)
[7]中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究[J]. 刘菲,王建刚,席守民,马晓娟. 时珍国医国药. 2008(04)
[8]新藤黄酸体内外抗肿瘤作用研究[J]. 程卉,彭代银,王效山,汤立建,黄鹏,李庆林. 中草药. 2008(02)
[9]芹菜素抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞血管内皮生长因子表达[J]. 金雪瑛,任常山. 中国现代医学杂志. 2007(04)
[10]温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对血管内皮生长因子表达的影响[J]. 何必立,吕宾,徐毅,苗青,范一宏. 中医药学刊. 2006(09)
硕士论文
[1]半枝莲含药血清抑制肿瘤血管生成的实验研究[D]. 张妮娜.扬州大学 2005
本文编号：2955085
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/2955085.html
