二氢杨梅素对NF-κB活化及其信号通路作用机制的研究

发布时间：2021-01-06 10:09

　　目的:二氢杨梅素,是在筛选NF-κB抑制剂时,发现的一种有效的源自天然产物的小分子抑制剂。它是从葡萄科蛇葡萄属的一种木质藤本植物中提取出来的黄酮类化合物,具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种活性。在本研究中,主要检测二氢杨梅素对TNF-α诱导的HeLa细胞中NF-κB活化的及其信号通路作用机制的影响。方法:①用MTT实验来检测二氢杨梅素对HeLa细胞存活率的影响;②采用荧光素酶报告基因实验来检测二氢杨梅素对NF-κB转录活性的影响;③通过蛋白免疫印迹法来检测二氢杨梅素对NF-κB相关蛋白表达影响;④利用RT-PCR实验来检测二氢杨梅素对cyclin D1/iNOS/VEGF mRNA表达的影响;⑤免疫荧光试验来检测药物对p65核转位的影响;⑥蛋白免疫印迹法来检测二氢杨梅素对TNFR1信号通路的影响。⑦采用MTT法、细胞集落实验、EdU实验来检测二氢杨梅素对HeLa细胞增殖的影响;⑧利用流式细胞术来检测药物对HeLa细胞凋亡率的影响。结果:1.MTT实验和荧光素酶报告基因显示,二氢杨梅素抑制TNF-α诱导的NF-κB活化且在20-200 uM时,无明显的细胞毒性。没有明显的... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２经典和非经典ＮＦ－ｋＢ通路示意图??１．２ＮＦ－ＫＢ、炎症在癌症中的发展??

硕士学位论文?二ａ杨梅素对ｎｆ－ｋｂ活化及其信号通路作用机制第三章结果??氢杨梅素对ＮＦ－ｋＢ转录活性的影响??光素酶报告基因检测了二氢杨梅素对ＮＦ－ｋＢ转录活性的影响。将Ｍ、２０ｐＭ、５０ｐＭ、ＩＯＯｋＭ、２００?ｐＭ依次加入转染了?ｐＮＦ－ＫＢ－ＬｕｃＬａ细胞中，处理ＴＮＦ－ｃｔ，使用化学发光仪检测荧光强度。结果显素剂量性抑制ＮＦ－ｋＢ的转录活性。?????

?＋?ＴＮＦ－ａ??ｓｔｉｍｕｌｉ?０?２０?５０?１００?２００?ＤＭＹ?＿＞??图３－１荧光素酶报告基因实验检测二氢杨梅素对ＮＦ－ｋＢ转录活性的影响??（＊ｐ＜?０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１，?＊＊＊ｐ＜０．００１）??３．２二氢杨梅素对细胞毒性的影响??ＭＴＴ实验检测了二氢杨梅素对细胞毒性的影响。将药物按浓度Ｏ＾Ｍ、２０?ｐＭ??、５０＿１、ｌＯＯｐＭ、２００?＾ｉＭ依次加入ＨｅＬａ细胞中，使用酶标仪在５７０?ｎｍ处??检测吸光度。结果显示，二氢杨梅素在２０－２００?ｕＭ时，无明显的细胞毒性。??２７??

【参考文献】：
期刊论文
[1]显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素的含量测定[J]. 何桂霞,裴刚,周天达,周雪仙.  中国中药杂志. 2000(07)



本文编号：2960380