白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞NOX2-ROS介导Akt-Erk1/2通路抗凋亡分子机理研究

发布时间：2021-01-11 22:57

　　本研究采用细胞培养、台盼蓝/TUNEL/DAPI染色、ROS荧光标记、定点突变、免疫细胞化学分析、Western blot分析等细胞分子生物学技术和方法;以PC12细胞和小鼠原代神经细胞为实验对象,综合研究了离体镉染毒模型中白藜芦醇调控镉诱导神经细胞NOX2-ROS介导Akt-Erk1/2通路抗凋亡分子机理。结果如下:1白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞NOX2依赖的ROS抗凋亡PC12细胞和小鼠原代神经元用白藜芦醇（100 μM）预处理1 h后暴露镉（10和20 μM）12 h或24 h、或用ROS清除剂NAC（5 mM）联合白藜芦醇（100 μM）预处理1 h后再用镉处理12 h或24 h。免疫荧光染色分析细胞内NOX2表达,ROS荧光探针CM-H2DCFDA分析细胞内ROS水平,TUNEL和DAPI检测细胞凋亡,Caspase-3/7活性分析,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果显示:白藜芦醇显著抑制镉诱导神经细胞NOX2及Caspase的活性升高;NAC加强白藜芦醇对于镉诱导神经细胞NOX2及其调节蛋白表达上调、ROS水平升高和凋亡发生的抑制效果。提示:白藜芦醇抑制镉诱导... 

【文章来源】：南京师范大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１?ＮＯＸ２及其调节蛋白示意图＿??

??Ｃｄ?州?〇?〇?１０?１０?２０?２０??图４－１白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞ＮＯＸ２表达和凋亡性细胞死亡??Ｆｉｇ．?４－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?ｔｈｅ?ＮＯＸ２?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ??ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｄｍｉｕｍ??Ａ：?ＰＣ１２细胞和原代神经细胞用１００?ｇＭ白藜芦醇预处理１?ｈ，暴露于镉（１０和??２０?（ｉＭ）１２?ｈ、２４?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?分析显不?ＮＯＸ２、Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ??蛋白表达变化；Ｂ：细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３／７活性分析；Ｃ和Ｄ：免疫焚光染色及定量统??计分析。数据用平均值±标准误（ｎ?＝?５）表示；ａＰ?＜?０．０５，与对照组比较；Ｖ?＜?０．０５，??与丨Ｏ＾ｉＭ镉处理组比较；ｅＰ＜０．０５，与２０ｊａＭ镉处理组比较。??

Ｃｄ?１０?Ｃｄ?１０?卩?Ｍ?？?？?？?？?＋?＋??图５－１白藜芦醇调控Ａｋｔ－Ｅｒｋｌ／２信号通路抗镉诱导神经细胞凋亡??Ｆｉｇ．?５－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ?ａｇａｉｎｓｔ?Ｃｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｎｅｕｒａｌ?ｃｅｌｌｓ??ｔｈｒｏｕｇｈ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?Ａｋｔ－?Ｅｒｋｌ／２?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??Ａ：白藜芦醇预处理１?ｈ后，暴露镉１２?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ａｋｔ及其憐酸化水平；??８－０：八水加－八１＾和八￡＾＾？或八（１－１＾；２分别感染？（：１２细胞后，用白藜芦醇（１００??ＨＭ）或?Ｕ０１２６?（５ｐＭ）预处理?１?ｈ?后暴露镉（１０ｐＭ）?１２ｈ?或?２４ｈ。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ??检测Ａｋｔ、Ｅｒｋｌ／２及其隣酸化和Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３表达（Ｂ）；台盼蓝染色检测细??胞存活率（Ｃ）；?ＴＵＮＥＬ检测细胞凋亡表现（Ｄ）。数据用平均值±标准误（ｎ?＝?５）??表示；ａＰ＜０．０５


本文编号：2971635