基于TNF-α-HIF-1α-iNOS-NO信号通路探讨大黄素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响
发布时间：2021-01-18 10:40
目的研究大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）肿瘤坏死因子ɑ（TNF-α）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）以及一氧化氮（NO）表达的影响,探讨大黄素通过调控TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信号通路干预RA的机制。方法培养来源于人的RA-FLS与正常-FLS,设立正常组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性组。正常组用正常-FLS,其余5组用RA-FLS。高/中/低剂量组分别予80μmol·L-1、40μmol·L-1及20μmol·L-1的大黄素溶液。阳性组予0.1mg·L-1地塞米松溶液。药物干预24h、48h、72h、96h,用HE染色法观测滑膜细胞的生长和形态学改变;用ELISA法与硝酸还原酶法检测滑膜细胞培养液中TNF-α、HIF-1α、iNOS及NO表达变化;用Western blot法检测滑膜细胞中TNF-α、HIF-1α以及iNOS表达水平。结果 HE染色结果显示:以梭形为主的滑膜细胞均贴壁生长,卵圆形胞核居于细胞中央,R...
【文章来源】：时珍国医国药. 2020,31(04)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
滑膜细胞HE染色图片(200×)
RA主要病理改变为持续性滑膜炎、血管翳增生以及骨与软骨损伤[1]。TNF-α是一种调节机体免疫的促炎细胞因子,其产生的免疫损害是导致RA慢性炎症的主要因素[8]。HIF-1α是机体由缺血、缺氧环境刺激产生的炎症调节因子[9]。NO是细胞内调节组织代谢的重要信号分子,而NOS是合成NO的关键酶[10]。TNF-α受到γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激,激活核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB),诱导HIF高表达,HIF - 1α又诱导其下游基因iNOS 、VEGF转录和表达。VEGF 直接促进血管增生,iNOS 催化L-精氨酸生成NO,一方面增加血管的通透性,加速血管新生;另一方面又刺激环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2 )释放,抑制软骨细胞合成Ⅱ型胶原去濡养骨与软骨,软骨细胞增值减少而凋亡增加,最终导致RA病情发展[11～13]。本实验用80μmol·L-1、40μmol·L-1以及20μmol·L-1大黄素分别干预人RA-FLS 24h、48h、72h以及96h,检测人RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO水平,探讨不同浓度大黄素干预不同时间后对人RA-FLS细胞培养液中相关蛋白表达的影响和对RA的作用机制。实验结果显示,与人正常-FLS比较,RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达均有升高,并且随着细胞培养时间延长,TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO增加幅度越来越大,尤其在96h段增加最多,差异有统计学意义(P<0.05)。用不同浓度大黄素干预24h、48h、72h以及96h后,人RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达水平均比模型组降低,并且随着药物干预时间延长,下降幅度越来越大,尤其在96h段下降最多,差异有统计学意义(P<0.05)。大黄素组TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达在4个时间段均表现为高剂量组下降最多,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性组TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO在4个时间段表现为大多与中剂量组相近。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄素和黄芩苷联用对急性胰腺炎模型大鼠Akt/Nrf2通路的影响研究[J]. 李慧艳,张超,张松,徐灏,刘洁,李菲,杨琦. 中国药房. 2018(13)
[2]黄芪及其提取物对大骨节病模型大鼠TNF-α、IL-6、NO和NOS的影响[J]. 罗继红,颜春鲁. 中医学报. 2018(05)
[3]巢乱蛋白2及JAK-STAT通路对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响[J]. 刘兴振,高颖,祝春华,綦柯,徐霞,赵东宝. 中华医学杂志. 2018 (15)
[4]防风多糖治疗骨质疏松大鼠的效果及对血清IL-6、TNF-α、TGFβ1、NO、NOS水平的影响[J]. 徐俊. 中华中医药学刊. 2018(03)
[5]白细胞介素-34对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞CCL28表达的影响[J]. 欧阳寻丽,李寒,孙晓彤,张彦,李霞,魏晶. 中国免疫学杂志. 2018(02)
[6]类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中钙网织蛋白经NF-κB通路上调c-FLIP的表达[J]. 焦亚冲,黄珊珊,万春友,刘宜昕,王阳,白英玉,马骏,郑芳. 天津医药. 2018(02)
[7]基于缺氧诱导因子及PI3K-AKT-mTOR信号通路诱导佐剂关节炎滑膜血管新生的实验观察[J]. 张晓军,刘健,万磊,黄传兵,黄旦,齐亚军. 中国临床保健杂志. 2018(01)
[8]类风湿汤对类风湿性关节炎大鼠血清RF、抗-CCP抗体的影响[J]. 黄少炎,杨守盘,罗先意,史红美,王光义,吕明庄. 贵州医科大学学报. 2018(01)
[9]抑制COX-2表达通过Akt/iNOS/NO信号通路发挥抗凋亡作用机制的研究[J]. 孙小婷,姜曦,庞磊,麻海春. 中国实验诊断学. 2017(02)
[10]iNOS/NO与胃癌关系的研究进展[J]. 魏房,谢强,张德巍,郑元,桑海泉. 现代肿瘤医学. 2013(09)
博士论文
[1]断藤益母汤及其组方药物对胶原诱导性关节炎大鼠骨代谢的影响及其机制研究[D]. 卢军.广州中医药大学 2016
[2]制天南星抗类风湿性关节炎物质基础和作用机制及其药物动力学初步研究[D]. 赵重博.成都中医药大学 2016
本文编号：2984808
【文章来源】：时珍国医国药. 2020,31(04)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
滑膜细胞HE染色图片(200×)
RA主要病理改变为持续性滑膜炎、血管翳增生以及骨与软骨损伤[1]。TNF-α是一种调节机体免疫的促炎细胞因子,其产生的免疫损害是导致RA慢性炎症的主要因素[8]。HIF-1α是机体由缺血、缺氧环境刺激产生的炎症调节因子[9]。NO是细胞内调节组织代谢的重要信号分子,而NOS是合成NO的关键酶[10]。TNF-α受到γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激,激活核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB),诱导HIF高表达,HIF - 1α又诱导其下游基因iNOS 、VEGF转录和表达。VEGF 直接促进血管增生,iNOS 催化L-精氨酸生成NO,一方面增加血管的通透性,加速血管新生;另一方面又刺激环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2 )释放,抑制软骨细胞合成Ⅱ型胶原去濡养骨与软骨,软骨细胞增值减少而凋亡增加,最终导致RA病情发展[11～13]。本实验用80μmol·L-1、40μmol·L-1以及20μmol·L-1大黄素分别干预人RA-FLS 24h、48h、72h以及96h,检测人RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO水平,探讨不同浓度大黄素干预不同时间后对人RA-FLS细胞培养液中相关蛋白表达的影响和对RA的作用机制。实验结果显示,与人正常-FLS比较,RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达均有升高,并且随着细胞培养时间延长,TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO增加幅度越来越大,尤其在96h段增加最多,差异有统计学意义(P<0.05)。用不同浓度大黄素干预24h、48h、72h以及96h后,人RA-FLS细胞培养液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达水平均比模型组降低,并且随着药物干预时间延长,下降幅度越来越大,尤其在96h段下降最多,差异有统计学意义(P<0.05)。大黄素组TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表达在4个时间段均表现为高剂量组下降最多,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性组TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO在4个时间段表现为大多与中剂量组相近。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄素和黄芩苷联用对急性胰腺炎模型大鼠Akt/Nrf2通路的影响研究[J]. 李慧艳,张超,张松,徐灏,刘洁,李菲,杨琦. 中国药房. 2018(13)
[2]黄芪及其提取物对大骨节病模型大鼠TNF-α、IL-6、NO和NOS的影响[J]. 罗继红,颜春鲁. 中医学报. 2018(05)
[3]巢乱蛋白2及JAK-STAT通路对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响[J]. 刘兴振,高颖,祝春华,綦柯,徐霞,赵东宝. 中华医学杂志. 2018 (15)
[4]防风多糖治疗骨质疏松大鼠的效果及对血清IL-6、TNF-α、TGFβ1、NO、NOS水平的影响[J]. 徐俊. 中华中医药学刊. 2018(03)
[5]白细胞介素-34对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞CCL28表达的影响[J]. 欧阳寻丽,李寒,孙晓彤,张彦,李霞,魏晶. 中国免疫学杂志. 2018(02)
[6]类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中钙网织蛋白经NF-κB通路上调c-FLIP的表达[J]. 焦亚冲,黄珊珊,万春友,刘宜昕,王阳,白英玉,马骏,郑芳. 天津医药. 2018(02)
[7]基于缺氧诱导因子及PI3K-AKT-mTOR信号通路诱导佐剂关节炎滑膜血管新生的实验观察[J]. 张晓军,刘健,万磊,黄传兵,黄旦,齐亚军. 中国临床保健杂志. 2018(01)
[8]类风湿汤对类风湿性关节炎大鼠血清RF、抗-CCP抗体的影响[J]. 黄少炎,杨守盘,罗先意,史红美,王光义,吕明庄. 贵州医科大学学报. 2018(01)
[9]抑制COX-2表达通过Akt/iNOS/NO信号通路发挥抗凋亡作用机制的研究[J]. 孙小婷,姜曦,庞磊,麻海春. 中国实验诊断学. 2017(02)
[10]iNOS/NO与胃癌关系的研究进展[J]. 魏房,谢强,张德巍,郑元,桑海泉. 现代肿瘤医学. 2013(09)
博士论文
[1]断藤益母汤及其组方药物对胶原诱导性关节炎大鼠骨代谢的影响及其机制研究[D]. 卢军.广州中医药大学 2016
[2]制天南星抗类风湿性关节炎物质基础和作用机制及其药物动力学初步研究[D]. 赵重博.成都中医药大学 2016
本文编号：2984808
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