当归六黄汤对非酒精性脂肪肝的作用及机制研究

发布时间：2021-01-18 18:22

　　目的:通过游离脂肪酸建立非酒精性脂肪肝（NAFL）细胞模型,研究当归六黄汤（DGLHD）对此细胞模型的作用及其机制;进一步探讨DGLHD对NAFL小鼠模型的作用及其机制。方法:首先,用不同浓度的游离脂肪酸（油酸:棕榈酸=2:1）培养HepG2细胞,MTT法检测细胞活性,以油红O染色定性观察细胞内脂滴,油红O比色法测定脂质含量,酶法检测模型组细胞内甘油三酯（TG）含量。然后,通过FFA诱导HepG2细胞建立NAFL模型后,给予不同剂量（2.5、5、10 mg/mL）的DGLHD处理,采用油红O染色观察细胞内脂质累积情况,酶法检测细胞内TG含量;Real-time PCR检测PI3K、Akt、mTOR、GSK3β、GLUT4、ACC-1和CD36的表达,Western blot测定p-PI3K、t-PI3K、p-Akt和t-Akt的蛋白表达。最后,通过高脂饲料喂养（HFD）诱导NAFL小鼠模型,给予HFD 4周后,灌胃给予不同剂量的DGLHD（10、5、2.5 g/kg）,持续给药8周。（1）分析肝脏、脂肪组织的病理切片,油红O染色检测肝脏内滴,检测血清和组织中的TG、游离脂肪酸（NEFA... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

FFA对HepG2细胞活性的影响

viability.#P<0.05,##P<0.01 compared with Control group.1.2 FFA 对 HepG2 细胞内脂质累积的影响采用油红 O 染色法，观察并测定 FFA 对 HepG2 细胞内脂滴和脂质含量的影响。如图 3 显示，光学显微镜下，可观察到对照组中 HepG2 细胞边缘清晰，细胞核呈蓝紫色，细胞内少见红色微小脂滴；随着 FFA 浓度的升高，可见各实验组中细胞内的红色脂滴逐渐增多，而当 FFA 浓度 > 1mM 时，HepG2 细胞数量呈现大幅度减少。由图 4 可知，各组细胞内的脂质含量，亦随着 FFA 浓度的升高而增多，1mM 时含量最多；而当浓度增至 1.25mM 时，脂质含量呈现降低趋势。结果表明，FFA 浓度为 1mM 时，HepG2 细胞内脂质累积最多。结合 MTT检测细胞活性试验，确定 FFA 的最佳作用为 24h，最佳作用浓度为 1mM。

2 细胞内脂质含量的影响。与正常对照组比较，#P<0.05FA on lipid content in HepG2 Cells.#P<0.05,##P<0.01 com内甘油三酯的测定，与对照组比较，模型组 HepG2 细胞内的 TG 含结果一致。提示，选择 1mM 的 FFA（OA:PA=2h，可以成功建立体外 NAFL 细胞模型。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2985422