海胆多糖调控成骨活性中BMP-2相关信号分子的研究
发布时间：2021-01-22 14:01
我国海洋中蕴含着充足的生物资源,由于生存环境的特殊性,海洋生物体内多糖的合成过程与陆地生物存在差异,产生了很多结构新颖,具有特殊生理功能的活性物质。现研究表明,海洋多糖因具有多种生物活性将可能作为药物中有效成分克服某些疑难病症。随着对海胆多糖结构研究的不断深入,人们开始关注海胆多糖的生物功能及其药理活性,并在抗肿瘤、调节免疫活性等方面取得初步进展。虾夷马粪海胆（Strongylocentrotus intermedius）生殖腺多糖（SUP）通过结构解析,表明其分子量小,结构简单稳定,活性高,可能具有促进细胞成熟分化的功能。在此基础之上,本实验研究SUP协同重组人骨形态发生蛋白-2（BMP-2）对体外培养小鼠颅顶前成骨细胞（MC3T3-E1细胞）成骨分化活性的影响。采用复合酶法、乙醇沉淀法以及超滤分级法提取海胆生殖腺多糖,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化法分析其单糖组成。以MC3T3-E1细胞模型测试SUP协同成骨活性能力,以不同浓度的SUP作用于MC3T3-E1细胞,用MTT法、BCIP/NBT组织染色法、茜红素染色法以及Elisa法分别对MC3T3-E1细胞的...
【文章来源】：大连工业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??４??
ＱＤＯ?２００?４．００?６００?ＳＯＣ?１０．ＣＤ?２０３?１４００?１６０３?ＩＳ?００?２Ｑ０Ｃ?２２０３?Ｘ００?２￡??Ｍｎ＾ｅｓ??图３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??４??Ｆｉｇ．３．１?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＳＵＰ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ??表３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??Ｔａｂｌｅ．３．１?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＳＵＰ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ??未知糖峰?出峰时间／ｍｉｎ??ａ?１０．１３７??ｂ?１２．１４２??ｃ?１９．５３９??Ｈ?ｌ??３（Ｘｈ?ｌ??ｓ?ｇ３??２９＞?＾?Ｓ??２０ＣＬ?人??－?Ｊ?！＼??Ｑ０Ｃ＞—■?Ｊ?，■■?■?．?７７＾．??Ｑ００?２００?４００?６００?８００?１Ｑ０Ｏ?１２００?１４?ＣＯ?ｉａ〇０?－Ｂ００?２ＱＣＤ?２２００?２４．０３?２６Ｃ??Ｍａｌｅｓ??图３．２各标准单糖的液相色谱图??Ｆｉｇ．３．２?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?
３．１＿２?ＳＵＰ白勺纯度鉴定??本实验按照２．２．５中的方法进行高效液相色谱分析（ＨＰＬＣ）法鉴定ＳＵＰ的纯度及??相对分子量大小，ＳＵＰ的液相色谱图结果如图３．３－３．５所示。ＳＵＰ色谱峰的保留时间为??２５．５?ｍｉｎ?（图３．３所示），图谱呈现狭窄单一对称性较好的对称峰，分子量分布范围较??小，说明本实验中所得ＳＵＰ分子量较均一，是较纯的均一组分。采用ＨＰＬＣ法测得的??相对分子质量为ｌｋＤ标准品的液相色谱图（图３．４所示），保留时间为２７?ｍｉｎ；采用??ＨＰＬＣ法测得的相对分子质量为５?ｋＤ标准品的液相色谱图（图３．５所示），保留时间为??２４．５?ｍｉｎ。该实验中所得ＳＵＰ色谱峰出峰位置在１?ｋＤ和５?ｋＤ之间，曹月刚［８４Ｈ仑文中所??得ＳＵＰ的相对分子质量为４４３６?Ｄ，与本实验中所得结果一致。因此，该多糖ＳＵＰ可用??于后续的细胞实验各指标的检测。??ｚ叫??Ｏｆｉ？Ｔ???ａｏｏ?２〇〇?４．（〇?６．ｃｏ?ｔｏｏ?ｉｓ．ｅｃ?ｉｒｃｏ?ｍ．ｏｏ?＜ａｏｃ?ｕ．ｃｏ?ｘａｏ?？ｏｃ?７＊．ｃｃ?＾?？ｅｏ?２？ｏｃ?ｗｏｏ?？〇〇?ｍｏｃ?ｍｃｃ?ｍｃｏ?＜ｏｅｃ?＊３００?？〇〇?？〇〇?４？ｏｃ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]虾夷马粪海胆不同家系和性别间性腺性状的比较[J]. 常亚青,张伟杰,丁君,石生宝,赵冲,张勃. 水产学报. 2010(07)
[2]马粪海胆壳棘多糖的分离、纯化和抗肿瘤活性的研究[J]. 白日霞,王长海. 大连水产学院学报. 2010(02)
[3]海胆黄多糖SEP酶解及产物免疫活性测定[J]. 徐张展,邢莹莹,周长林,奚涛. 药物生物技术. 2009(04)
[4]BMP-2信号通路与成骨细胞分化[J]. 王霖霞,李玉坤. 国际骨科学杂志. 2009(02)
[5]骨形态发生蛋白信号传导和功能调节的结构基础[J]. 王弘毅,张伟滨. 国际骨科学杂志. 2008(06)
[6]淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达和BGP影响的实验研究[J]. 肖强兵,邹季. 中国中医骨伤科杂志. 2007(09)
[7]一氧化氮对成骨细胞样细胞系MC3T3-E1的矿化调控[J]. 黄湛,刘洪臣,王东胜,贾静. 中华老年口腔医学杂志. 2007(02)
[8]黄芪多糖对糖尿病鼠T细胞亚群的免疫调节作用[J]. 陈蔚,李益明,俞茂华,施小梅. 中国现代医学杂志. 2007(01)
[9]硫酸酯化茶多糖的制备及降血糖活性的研究[J]. 彭永华,金征宇,王元凤. 食品工业科技. 2006(11)
[10]海胆的研究进展及其应用现状[J]. 王冬,王政乾,田红伟,邵香芝,魏丽娟. 中国海洋药物. 2006(04)
硕士论文
[1]金丝桃苷通过BMP和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的实验研究[D]. 林思俭.南昌大学医学院 2015
[2]虾夷马粪海胆生殖腺多糖的提取、分离纯化及结构研究[D]. 曹月刚.大连工业大学 2014
本文编号：2993357
【文章来源】：大连工业大学辽宁省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??４??
ＱＤＯ?２００?４．００?６００?ＳＯＣ?１０．ＣＤ?２０３?１４００?１６０３?ＩＳ?００?２Ｑ０Ｃ?２２０３?Ｘ００?２￡??Ｍｎ＾ｅｓ??图３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??４??Ｆｉｇ．３．１?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＳＵＰ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ??表３．１?ＳＵＰ的单糖组成高效液相色谱图??Ｔａｂｌｅ．３．１?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ＳＵＰ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ??未知糖峰?出峰时间／ｍｉｎ??ａ?１０．１３７??ｂ?１２．１４２??ｃ?１９．５３９??Ｈ?ｌ??３（Ｘｈ?ｌ??ｓ?ｇ３??２９＞?＾?Ｓ??２０ＣＬ?人??－?Ｊ?！＼??Ｑ０Ｃ＞—■?Ｊ?，■■?■?．?７７＾．??Ｑ００?２００?４００?６００?８００?１Ｑ０Ｏ?１２００?１４?ＣＯ?ｉａ〇０?－Ｂ００?２ＱＣＤ?２２００?２４．０３?２６Ｃ??Ｍａｌｅｓ??图３．２各标准单糖的液相色谱图??Ｆｉｇ．３．２?ＨＰＬＣ?ｓｐｅｃｔｒｕｍ?ｏｆ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?
３．１＿２?ＳＵＰ白勺纯度鉴定??本实验按照２．２．５中的方法进行高效液相色谱分析（ＨＰＬＣ）法鉴定ＳＵＰ的纯度及??相对分子量大小，ＳＵＰ的液相色谱图结果如图３．３－３．５所示。ＳＵＰ色谱峰的保留时间为??２５．５?ｍｉｎ?（图３．３所示），图谱呈现狭窄单一对称性较好的对称峰，分子量分布范围较??小，说明本实验中所得ＳＵＰ分子量较均一，是较纯的均一组分。采用ＨＰＬＣ法测得的??相对分子质量为ｌｋＤ标准品的液相色谱图（图３．４所示），保留时间为２７?ｍｉｎ；采用??ＨＰＬＣ法测得的相对分子质量为５?ｋＤ标准品的液相色谱图（图３．５所示），保留时间为??２４．５?ｍｉｎ。该实验中所得ＳＵＰ色谱峰出峰位置在１?ｋＤ和５?ｋＤ之间，曹月刚［８４Ｈ仑文中所??得ＳＵＰ的相对分子质量为４４３６?Ｄ，与本实验中所得结果一致。因此，该多糖ＳＵＰ可用??于后续的细胞实验各指标的检测。??ｚ叫??Ｏｆｉ？Ｔ???ａｏｏ?２〇〇?４．（〇?６．ｃｏ?ｔｏｏ?ｉｓ．ｅｃ?ｉｒｃｏ?ｍ．ｏｏ?＜ａｏｃ?ｕ．ｃｏ?ｘａｏ?？ｏｃ?７＊．ｃｃ?＾?？ｅｏ?２？ｏｃ?ｗｏｏ?？〇〇?ｍｏｃ?ｍｃｃ?ｍｃｏ?＜ｏｅｃ?＊３００?？〇〇?？〇〇?４？ｏｃ?
【参考文献】：
期刊论文
[1]虾夷马粪海胆不同家系和性别间性腺性状的比较[J]. 常亚青,张伟杰,丁君,石生宝,赵冲,张勃. 水产学报. 2010(07)
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[3]海胆黄多糖SEP酶解及产物免疫活性测定[J]. 徐张展,邢莹莹,周长林,奚涛. 药物生物技术. 2009(04)
[4]BMP-2信号通路与成骨细胞分化[J]. 王霖霞,李玉坤. 国际骨科学杂志. 2009(02)
[5]骨形态发生蛋白信号传导和功能调节的结构基础[J]. 王弘毅,张伟滨. 国际骨科学杂志. 2008(06)
[6]淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原表达和BGP影响的实验研究[J]. 肖强兵,邹季. 中国中医骨伤科杂志. 2007(09)
[7]一氧化氮对成骨细胞样细胞系MC3T3-E1的矿化调控[J]. 黄湛,刘洪臣,王东胜,贾静. 中华老年口腔医学杂志. 2007(02)
[8]黄芪多糖对糖尿病鼠T细胞亚群的免疫调节作用[J]. 陈蔚,李益明,俞茂华,施小梅. 中国现代医学杂志. 2007(01)
[9]硫酸酯化茶多糖的制备及降血糖活性的研究[J]. 彭永华,金征宇,王元凤. 食品工业科技. 2006(11)
[10]海胆的研究进展及其应用现状[J]. 王冬,王政乾,田红伟,邵香芝,魏丽娟. 中国海洋药物. 2006(04)
硕士论文
[1]金丝桃苷通过BMP和Wnt/β-catenin信号通路调控成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的实验研究[D]. 林思俭.南昌大学医学院 2015
[2]虾夷马粪海胆生殖腺多糖的提取、分离纯化及结构研究[D]. 曹月刚.大连工业大学 2014
本文编号：2993357
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