黄芪多糖对大肠癌的抗癌作用及其与淋巴管生成的相关性研究
发布时间：2021-01-28 13:13
目的:研究黄芪多糖体外对人结肠癌LOVO细胞、正常人淋巴管内皮HLEC细胞增殖能力的影响,以及对淋巴管内皮生长因子VEGF-C蛋白及mRNA表达的影响,探讨黄芪多糖对大肠癌的抗癌作用与淋巴管生成之间的关系。方法:分别用不同浓度黄芪多糖（0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml）与人结肠癌LOVO细胞株、正常人淋巴管内皮HLEC细胞株共培养,培养24h、48h、72h、96h后,用细胞增殖/毒性实验（CCK-8）检测人结肠癌LOVO细胞、正常人淋巴管内皮HLEC细胞活性及增殖能力的影响,研究黄芪多糖对两种细胞的作用及其最佳作用浓度和作用时间。免疫蛋白印迹（Western Blot）法检测黄芪多糖对人结肠癌LOVO细胞、正常人淋巴管内皮HLEC细胞VEGF-C蛋白表达的影响。逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测黄芪多糖对人结肠癌LOVO细胞、正常人淋巴管内皮HLEC细胞VEGF-C mRNA表达的影响。采用SPASS 21.0软件进行数据分析,以α=0.05为检验水准。结果:人结肠癌LOVO细胞经过与不同浓度黄芪多糖（0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg...
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞消化过程
B：培养 2d。C：培养 3d。D：培养 4d。图 1 细胞形态变化（2）细胞传代：①消毒：将需要的 PBS 溶液、细胞完全培养基、1ml 移液器及枪头、0.25%胰蛋白酶溶液、酒精灯置于超净操作台内，紫外线消毒 30min。②PBS 润洗细胞：的 LOVO 细胞株、HLEC 细胞株培养瓶中的培养上清液，然后使用 PBS 润洗细胞 1-2次。③胰酶消化：用1ml移液器分别向LOVO细胞、HLEC细胞培养瓶加入1ml、2ml 0.25%胰蛋白酶溶液，置于 37℃、5%CO2及湿度为 70%-80%的培养箱中消化 1min。在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，分别使用 1ml 移液器加入 1ml、2ml 完全培养基终止消化，并轻轻吹打均匀为细胞悬液（见图 2）。
（2）黄芪多糖溶液的配制：每个孔需要加 100μl 黄芪多糖溶液。共配制 12.8ml 黄芪多糖溶液。所需黄芪多糖总质量为：每组 4 个孔需要黄芪多糖溶液体积×黄芪多糖浓度，总质量为 16mg，因实验过程中药品会有取损失，故称取 18mg 的黄芪多糖药物充分溶解到 9ml 的完全培养基中，得到浓度为 2mg/ml 的母液，无菌过滤器过滤，临用时用完全培养基进行稀释，稀释到所需浓度 0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml。2.2.3 CCK-8 检测方法（1）配制细胞悬液：分别采用对数生长期的人结肠癌 LOVO 细胞、人淋巴管内皮 HLEC细胞→胰酶消化→用完全培养基终止消化→反复吹打混匀成细胞悬液。（2）细胞计数：将血球计数板及盖片擦试干净，并将盖片盖在计数板上。将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，在倒置显微镜下进行细胞记数。计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的，见图 3。然后按公式计算：细胞数/ml＝4 大格细胞总数/4×104。
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪多糖逆转吉非替尼获得性耐药肺腺癌细胞的作用研究[J]. 魏佳,张玥,刘莲,陈兆鑫,俞静. 临床和实验医学杂志. 2019(01)
[2]白花蛇舌草乙醇提取物抑制大肠癌淋巴管新生的作用研究[J]. 魏丽慧,林明和,杨弘,林露敏,彭军,林久茂. 康复学报. 2018(05)
[3]黄芪活性成分抗肿瘤研究进展[J]. 邓春,赵红艳,高美丽. 国外医学(医学地理分册). 2018(03)
[4]血管内皮生长因子C及淋巴管密度与Ⅱ期结直肠癌患者临床病理特征的关系[J]. 陈旭,周永清,丁海斌,聂磊,陈静. 肿瘤研究与临床. 2018 (07)
[5]黄芪多糖协同顺铂诱导宫颈癌siha细胞凋亡的作用机制[J]. 翟秋丽,胡向丹,肖静,余冬青. 广东医学. 2018(09)
[6]COX-2、VEGF-C蛋白在胃癌及癌前病变组织中的表达及意义[J]. 张英辉,闫伟,乔宝军,耿洪刚. 临床和实验医学杂志. 2018(10)
[7]斑蝥酸钠注射液可有效降低炎性因子与血管内皮生长因子的表达[J]. 单福新,沙春艳. 基因组学与应用生物学. 2018(04)
[8]两种中药制剂对IPEC-1细胞因子表达的影响[J]. 施杏芬,邵斌,林辉,占永祥. 中国动物保健. 2018(04)
[9]黄芪多糖对气阴两虚Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、转移及细胞周期的影响[J]. 李杨,杨玲玲,白彦丽,明海霞. 肿瘤防治研究. 2018(03)
[10]黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制[J]. 桂壮,邵治国,金笛. 中医学报. 2018(04)
硕士论文
[1]黄芪多糖对P53基因介导的信号传导与胃癌发生发展的相关性研究[D]. 聂超.南京中医药大学 2014
本文编号：3005056
【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞消化过程
B：培养 2d。C：培养 3d。D：培养 4d。图 1 细胞形态变化（2）细胞传代：①消毒：将需要的 PBS 溶液、细胞完全培养基、1ml 移液器及枪头、0.25%胰蛋白酶溶液、酒精灯置于超净操作台内，紫外线消毒 30min。②PBS 润洗细胞：的 LOVO 细胞株、HLEC 细胞株培养瓶中的培养上清液，然后使用 PBS 润洗细胞 1-2次。③胰酶消化：用1ml移液器分别向LOVO细胞、HLEC细胞培养瓶加入1ml、2ml 0.25%胰蛋白酶溶液，置于 37℃、5%CO2及湿度为 70%-80%的培养箱中消化 1min。在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，分别使用 1ml 移液器加入 1ml、2ml 完全培养基终止消化，并轻轻吹打均匀为细胞悬液（见图 2）。
（2）黄芪多糖溶液的配制：每个孔需要加 100μl 黄芪多糖溶液。共配制 12.8ml 黄芪多糖溶液。所需黄芪多糖总质量为：每组 4 个孔需要黄芪多糖溶液体积×黄芪多糖浓度，总质量为 16mg，因实验过程中药品会有取损失，故称取 18mg 的黄芪多糖药物充分溶解到 9ml 的完全培养基中，得到浓度为 2mg/ml 的母液，无菌过滤器过滤，临用时用完全培养基进行稀释，稀释到所需浓度 0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml。2.2.3 CCK-8 检测方法（1）配制细胞悬液：分别采用对数生长期的人结肠癌 LOVO 细胞、人淋巴管内皮 HLEC细胞→胰酶消化→用完全培养基终止消化→反复吹打混匀成细胞悬液。（2）细胞计数：将血球计数板及盖片擦试干净，并将盖片盖在计数板上。将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，在倒置显微镜下进行细胞记数。计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的，见图 3。然后按公式计算：细胞数/ml＝4 大格细胞总数/4×104。
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪多糖逆转吉非替尼获得性耐药肺腺癌细胞的作用研究[J]. 魏佳,张玥,刘莲,陈兆鑫,俞静. 临床和实验医学杂志. 2019(01)
[2]白花蛇舌草乙醇提取物抑制大肠癌淋巴管新生的作用研究[J]. 魏丽慧,林明和,杨弘,林露敏,彭军,林久茂. 康复学报. 2018(05)
[3]黄芪活性成分抗肿瘤研究进展[J]. 邓春,赵红艳,高美丽. 国外医学(医学地理分册). 2018(03)
[4]血管内皮生长因子C及淋巴管密度与Ⅱ期结直肠癌患者临床病理特征的关系[J]. 陈旭,周永清,丁海斌,聂磊,陈静. 肿瘤研究与临床. 2018 (07)
[5]黄芪多糖协同顺铂诱导宫颈癌siha细胞凋亡的作用机制[J]. 翟秋丽,胡向丹,肖静,余冬青. 广东医学. 2018(09)
[6]COX-2、VEGF-C蛋白在胃癌及癌前病变组织中的表达及意义[J]. 张英辉,闫伟,乔宝军,耿洪刚. 临床和实验医学杂志. 2018(10)
[7]斑蝥酸钠注射液可有效降低炎性因子与血管内皮生长因子的表达[J]. 单福新,沙春艳. 基因组学与应用生物学. 2018(04)
[8]两种中药制剂对IPEC-1细胞因子表达的影响[J]. 施杏芬,邵斌,林辉,占永祥. 中国动物保健. 2018(04)
[9]黄芪多糖对气阴两虚Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、转移及细胞周期的影响[J]. 李杨,杨玲玲,白彦丽,明海霞. 肿瘤防治研究. 2018(03)
[10]黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制[J]. 桂壮,邵治国,金笛. 中医学报. 2018(04)
硕士论文
[1]黄芪多糖对P53基因介导的信号传导与胃癌发生发展的相关性研究[D]. 聂超.南京中医药大学 2014
本文编号：3005056
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