吴茱萸次碱通过TRPV1/[Ca 2+ ]i/Sirt1途径抑制高糖诱导的内皮细胞衰老
发布时间：2021-02-14 01:07
目的:高糖导致的大血管和微血管病变继而引发的一系列血管并发症是糖尿病致残和致死的首要原因。近年来高糖诱导血管内皮细胞衰老在糖尿病血管并发症中的作用受到了广泛的关注。在高糖状态下,氧化应激水平明显增加,可下调细胞长寿蛋白Sirt1,从而加速内皮细胞衰老。Sirt1作为去乙酰化酶,可通过抑制P53活性而减少细胞周期抑制蛋白P21的表达而产生抗衰老效应。吴茱萸次碱（rutaecarpine,Rut）是传统中药吴茱萸的主要活性成分,是一种五环类吲哚喹唑啉类生物碱,具有广泛的心血管保护作用,其主要心血管保护效应均为激活辣椒素受体（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）。前期有研究发现Rut有抑制ROS生成的抗氧化效应,还有文献报道Rut可抑制高血压状态下的内皮祖细胞衰老。因此本课题的研究目的是在培养的人脐静脉内皮细胞上观察Rut对高糖诱导内皮细胞衰老的影响,并进一步确定Rut抗衰老效应机制是否涉及TRPV1/[Ca2+]i/Sirt1途径。方法:在培养的人脐静脉内皮细胞株HUVEC中,加入30mM高糖孵育24h诱导高糖...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中文对照表
第1章 引言
第2章 材料与试剂
2.1 主要的材料与试剂
2.1.1 实验用的细胞株
2.1.2 主要的试剂和产品
2.2 实验主要仪器和设备
2.3 主要试剂配制
第3章 实验方法
3.1 人脐静脉内皮细胞HUVEC的培养
3.1.1 细胞复苏
3.1.2 细胞传代
3.2 实验分组及处理方法
3.2.1 实验分组与实验内容
3.2.2 CCK比色法检测细胞增殖
3.2.3 细胞凋亡试剂盒检测凋亡率
3.2.4 细胞周期试剂盒检测细胞周期
3.2.5 SA-β-Gal染色法检测细胞衰老
3.2.6 Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞内钙含量
3.2.7 ROS试剂盒检测细胞内ROS水平
3.2.8 Western blotting检测HUVEC细胞中P21、Sirt1及LC3II/LC3I蛋白表达水平
3.3 数据处理
第4章 实验结果
第一部分 RUT抗高糖诱导HUVEC细胞损伤
4.1 RUT抑制高糖诱导的HUVEC细胞活力下降
4.2 RUT可轻度抑制高糖诱导的HUVEC细胞凋亡
4.3 RUT对高糖诱导的HUVEC细胞自噬无明显影响
4.4 RUT抑制内皮细胞衰老
4.5 RUT抑制高糖诱导的HUVEC细胞周期G1/G0期阻滞
4.6 RUT可显著上调HUVEC细胞中长寿蛋白SIRT1的表达
4.7 RUT可显著降低高糖诱导的HUVEC细胞中ROS的生成
第二部分 TRPV1/胞内钙信号介导RUT的抗衰老机制
4.8 RUT可升高HUVEC细胞内钙浓度
4.9 TRPV1阻断剂CAPZ及胞内钙信号阻断剂（W-7和BAPTA）可减弱RUT的抗衰老作用
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]吴茱萸次碱对胰岛素抵抗骨骼肌细胞炎症因子表达的影响[J]. 杨建文,聂绪强,史海霞,张玉金,张建永,袁野,卞卡. 中国中药杂志. 2014(15)
[2]Endothelium-specific SIRT1 overexpression inhibits hyperglycemia-induced upregulation of vascular cell senescence[J]. CHEN HouZao 1,WAN YanZhen 1,ZHOU Shuang 1,2,LU YunBiao 1,ZHANG ZhuQin 1,ZHANG Ran 1,CHEN Feng 1,HAO DeLong 1,ZHAO Xiang 1,GUO ZhiChen 1,LIU DePei 1* & LIANG ChihChuan 1 1 National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100005,China;2 Department of Rheumatology and Immunology,Peking Union Medical College Hospital,Beijing 100005,China. Science China（Life Sciences）. 2012(06)
[3]多靶点药物研究新技术及其应用进展[J]. 刘少强,铁璐,李学军. 神经药理学报. 2011(04)
[4]细胞衰老相关基因的研究进展[J]. 曲丹,蔡东联. 国外医学(卫生学分册). 2008(02)
本文编号：3032871
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中文对照表
第1章 引言
第2章 材料与试剂
2.1 主要的材料与试剂
2.1.1 实验用的细胞株
2.1.2 主要的试剂和产品
2.2 实验主要仪器和设备
2.3 主要试剂配制
第3章 实验方法
3.1 人脐静脉内皮细胞HUVEC的培养
3.1.1 细胞复苏
3.1.2 细胞传代
3.2 实验分组及处理方法
3.2.1 实验分组与实验内容
3.2.2 CCK比色法检测细胞增殖
3.2.3 细胞凋亡试剂盒检测凋亡率
3.2.4 细胞周期试剂盒检测细胞周期
3.2.5 SA-β-Gal染色法检测细胞衰老
3.2.6 Fluo-3 AM钙离子荧光探针检测细胞内钙含量
3.2.7 ROS试剂盒检测细胞内ROS水平
3.2.8 Western blotting检测HUVEC细胞中P21、Sirt1及LC3II/LC3I蛋白表达水平
3.3 数据处理
第4章 实验结果
第一部分 RUT抗高糖诱导HUVEC细胞损伤
4.1 RUT抑制高糖诱导的HUVEC细胞活力下降
4.2 RUT可轻度抑制高糖诱导的HUVEC细胞凋亡
4.3 RUT对高糖诱导的HUVEC细胞自噬无明显影响
4.4 RUT抑制内皮细胞衰老
4.5 RUT抑制高糖诱导的HUVEC细胞周期G1/G0期阻滞
4.6 RUT可显著上调HUVEC细胞中长寿蛋白SIRT1的表达
4.7 RUT可显著降低高糖诱导的HUVEC细胞中ROS的生成
第二部分 TRPV1/胞内钙信号介导RUT的抗衰老机制
4.8 RUT可升高HUVEC细胞内钙浓度
4.9 TRPV1阻断剂CAPZ及胞内钙信号阻断剂（W-7和BAPTA）可减弱RUT的抗衰老作用
第5章 讨论
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]吴茱萸次碱对胰岛素抵抗骨骼肌细胞炎症因子表达的影响[J]. 杨建文,聂绪强,史海霞,张玉金,张建永,袁野,卞卡. 中国中药杂志. 2014(15)
[2]Endothelium-specific SIRT1 overexpression inhibits hyperglycemia-induced upregulation of vascular cell senescence[J]. CHEN HouZao 1,WAN YanZhen 1,ZHOU Shuang 1,2,LU YunBiao 1,ZHANG ZhuQin 1,ZHANG Ran 1,CHEN Feng 1,HAO DeLong 1,ZHAO Xiang 1,GUO ZhiChen 1,LIU DePei 1* & LIANG ChihChuan 1 1 National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100005,China;2 Department of Rheumatology and Immunology,Peking Union Medical College Hospital,Beijing 100005,China. Science China（Life Sciences）. 2012(06)
[3]多靶点药物研究新技术及其应用进展[J]. 刘少强,铁璐,李学军. 神经药理学报. 2011(04)
[4]细胞衰老相关基因的研究进展[J]. 曲丹,蔡东联. 国外医学(卫生学分册). 2008(02)
本文编号：3032871
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