基于Syk/Ras/c-Fos信号通路探讨芪藤消浊颗粒治疗慢性肾炎的机制
发布时间：2021-03-04 14:51
目的芪藤消浊颗粒是国家级名老中医曹恩泽根据慢性肾小球肾炎（CGN）“脾虚、湿停、血瘀”的基本病机,提出“健脾、行水、化瘀”的治法,创制的特色中药制剂,临床主治CGN疗效确切,但其具体的分子学机制尚不清楚。本研究旨在研究芪藤消浊颗粒对Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用,探讨芪藤消浊颗粒防治CGN的潜在分子学机制。方法1芪藤消浊颗粒对ADR诱导的CGN大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用采用尾静脉注射阿霉素（ADR）复制CGN大鼠模型,取造模成功大鼠分为模型组、芪藤消浊颗粒不同剂量组（21.6、10.8、5.4 g/kg）组和黄葵胶囊（1.0 g/kg）组,每组10只,另取10只正常大鼠作为对照组。除模型组外,其余各组给药30天后,HE染色观察C GN大鼠肾小球病变情况,测定24h尿蛋白、N-乙酰氨基糖苷酶（NAG）含量和血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、胱抑素（Cys-c）和视黄醇结合蛋白（RBP）的含量,RT-q PCR检测Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2和c-Fos m RNA表达情况,免疫组化法和Western blot（WB）法检测p-Syk...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词（Abbreviation）
前言
实验一 芪藤消浊颗粒对阿霉素诱导的慢性肾小球肾炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 实验方法
2.1 慢性肾小球肾炎动物模型的建立及给药方案
2.2 大鼠的一般形态学观察
2.3 大鼠的体质量检测
2.4 大鼠 24 h尿蛋白含量和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活力的测定
2.5 大鼠血清中尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、视黄醇结合蛋白（RBP）、胱抑素（Cys-c）含量测定
2.6 大鼠肾脏指数的测定
2.7 大鼠肾皮质病理组织学观察
2.8 免疫组化法检测CGN大鼠肾皮质p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
2.9 RT-qPCR检测CGN大鼠肾皮质Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表达
2.10 蛋白质免疫印迹法检测CGN大鼠肾皮质p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
3 统计学分析
4 结果
4.1 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠行为状态的影响
4.2 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠体质量的影响
4.3 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠 24h尿蛋白和NAG的影响
4.4 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠BUN、Scr、Cys-c、RBP的影响
4.5 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠脏器指数的影响
4.6 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质病理组织学的影响
4.7 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质Syk mRNA和p-Syk蛋白表达的影响
4.8 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质Ras mRNA和蛋白表达的影响
4.9 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质MEK1/2 mRNA和p-MEK1/2 蛋白表达的影响
4.10 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2 蛋白表达的影响
4.11 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质c-Fos mRNA和蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 动物模型的选择依据
5.2 肾功能指标与CGN
5.3 CGN与Syk/Ras/c-Fos信号通路
实验二 芪藤消浊颗粒含药血清对LPS诱导的肾小球系膜细胞中Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 细胞株
1.4 试剂
1.5 仪器
1.6 溶液配制
2 实验方法
2.1 芪藤消浊颗粒含药血清的制备
2.2 肾小球系膜细胞的培养
2.3 MTT法筛选芪藤消浊颗粒含药血清最佳浓度和最佳作用时间
2.4 细胞实验分组及干预
2.5 RT-qPCR检测Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表达
2.6 WB检测p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
3 统计学分析
4 结果
4.1 芪藤消浊颗粒含药血清最佳浓度和最佳作用时间的筛选
4.2 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中Syk mRNA和p-Syk蛋白表达的影响
4.3 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中Ras mRNA和蛋白表达的影响
4.4 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中MEK1/2mRNA和p-MEK1/2 蛋白表达的影响
4.5 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中ERK1/2mRNA和p-ERK1/2 蛋白表达的影响
4.6 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中c-Fos mRNA和蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 血清药理学
5.2 芪藤消浊颗粒对GMCs增殖的影响
5.3 芪藤消浊颗粒对Syk/Ras/c-Fos信号通路的影响
结论
参考文献
综述
参考文献
个人简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]肾炎康复片治疗肾小球肾炎的应用效果及作用机制分析[J]. 李君科. 当代医学. 2017(03)
[2]黄葵胶囊联合缬沙坦胶囊治疗慢性肾小球肾炎的疗效观察[J]. 张瑜琪,冯爱桥. 中国医院用药评价与分析. 2016(12)
[3]六味地黄汤加减治疗慢性肾炎110例临床疗效分析[J]. 张家丽,徐钊熠,马秀宁. 中国医药指南. 2016(35)
[4]中药复方联合西药治疗急性细菌性痢疾疗效及安全性Meta分析[J]. 王一战,苏芮,韩经丹,王玉贤,范吉平. 辽宁中医药大学学报. 2017(01)
[5]联合检测血清CysC和RBP对肾炎早期诊断价值[J]. 李卉,吴翠翠. 中国城乡企业卫生. 2016(10)
[6]虫类药对慢性肾小球肾炎治疗作用探析[J]. 鞠俭奎,冷玉杰. 辽宁中医药大学学报. 2016(10)
[7]CysC、RBP、BUN和Cr联合检测早期诊断肾脏疾病的意义研究[J]. 周华强,白志杨,伍尚华. 中国当代医药. 2016(23)
[8]麻黄连翘赤小豆汤加味治疗慢性肾炎的临床分析[J]. 范志华,王晓婷,崔云,邢晓东. 中国继续医学教育. 2016(22)
[9]和解少阳法联合黄芪注射液对慢性肾小球肾炎蛋白尿及炎症指标的影响研究[J]. 衣芳亮. 现代中西医结合杂志. 2016(15)
[10]小柴胡汤对机体免疫系统的影响及临床应用[J]. 张莹,周小莉. 中医药导报. 2016(08)
本文编号：3063416
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词（Abbreviation）
前言
实验一 芪藤消浊颗粒对阿霉素诱导的慢性肾小球肾炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 实验方法
2.1 慢性肾小球肾炎动物模型的建立及给药方案
2.2 大鼠的一般形态学观察
2.3 大鼠的体质量检测
2.4 大鼠 24 h尿蛋白含量和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活力的测定
2.5 大鼠血清中尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、视黄醇结合蛋白（RBP）、胱抑素（Cys-c）含量测定
2.6 大鼠肾脏指数的测定
2.7 大鼠肾皮质病理组织学观察
2.8 免疫组化法检测CGN大鼠肾皮质p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
2.9 RT-qPCR检测CGN大鼠肾皮质Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表达
2.10 蛋白质免疫印迹法检测CGN大鼠肾皮质p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
3 统计学分析
4 结果
4.1 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠行为状态的影响
4.2 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠体质量的影响
4.3 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠 24h尿蛋白和NAG的影响
4.4 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠BUN、Scr、Cys-c、RBP的影响
4.5 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠脏器指数的影响
4.6 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质病理组织学的影响
4.7 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质Syk mRNA和p-Syk蛋白表达的影响
4.8 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质Ras mRNA和蛋白表达的影响
4.9 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质MEK1/2 mRNA和p-MEK1/2 蛋白表达的影响
4.10 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2 蛋白表达的影响
4.11 芪藤消浊颗粒对CGN大鼠肾皮质c-Fos mRNA和蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 动物模型的选择依据
5.2 肾功能指标与CGN
5.3 CGN与Syk/Ras/c-Fos信号通路
实验二 芪藤消浊颗粒含药血清对LPS诱导的肾小球系膜细胞中Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控作用
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 细胞株
1.4 试剂
1.5 仪器
1.6 溶液配制
2 实验方法
2.1 芪藤消浊颗粒含药血清的制备
2.2 肾小球系膜细胞的培养
2.3 MTT法筛选芪藤消浊颗粒含药血清最佳浓度和最佳作用时间
2.4 细胞实验分组及干预
2.5 RT-qPCR检测Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表达
2.6 WB检测p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表达
3 统计学分析
4 结果
4.1 芪藤消浊颗粒含药血清最佳浓度和最佳作用时间的筛选
4.2 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中Syk mRNA和p-Syk蛋白表达的影响
4.3 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中Ras mRNA和蛋白表达的影响
4.4 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中MEK1/2mRNA和p-MEK1/2 蛋白表达的影响
4.5 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中ERK1/2mRNA和p-ERK1/2 蛋白表达的影响
4.6 芪藤消浊颗粒含药血清对肾小球系膜细胞中c-Fos mRNA和蛋白表达的影响
5 讨论
5.1 血清药理学
5.2 芪藤消浊颗粒对GMCs增殖的影响
5.3 芪藤消浊颗粒对Syk/Ras/c-Fos信号通路的影响
结论
参考文献
综述
参考文献
个人简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]肾炎康复片治疗肾小球肾炎的应用效果及作用机制分析[J]. 李君科. 当代医学. 2017(03)
[2]黄葵胶囊联合缬沙坦胶囊治疗慢性肾小球肾炎的疗效观察[J]. 张瑜琪,冯爱桥. 中国医院用药评价与分析. 2016(12)
[3]六味地黄汤加减治疗慢性肾炎110例临床疗效分析[J]. 张家丽,徐钊熠,马秀宁. 中国医药指南. 2016(35)
[4]中药复方联合西药治疗急性细菌性痢疾疗效及安全性Meta分析[J]. 王一战,苏芮,韩经丹,王玉贤,范吉平. 辽宁中医药大学学报. 2017(01)
[5]联合检测血清CysC和RBP对肾炎早期诊断价值[J]. 李卉,吴翠翠. 中国城乡企业卫生. 2016(10)
[6]虫类药对慢性肾小球肾炎治疗作用探析[J]. 鞠俭奎,冷玉杰. 辽宁中医药大学学报. 2016(10)
[7]CysC、RBP、BUN和Cr联合检测早期诊断肾脏疾病的意义研究[J]. 周华强,白志杨,伍尚华. 中国当代医药. 2016(23)
[8]麻黄连翘赤小豆汤加味治疗慢性肾炎的临床分析[J]. 范志华,王晓婷,崔云,邢晓东. 中国继续医学教育. 2016(22)
[9]和解少阳法联合黄芪注射液对慢性肾小球肾炎蛋白尿及炎症指标的影响研究[J]. 衣芳亮. 现代中西医结合杂志. 2016(15)
[10]小柴胡汤对机体免疫系统的影响及临床应用[J]. 张莹,周小莉. 中医药导报. 2016(08)
本文编号：3063416
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