表没食子儿茶素没食子酸酯对柔红霉素与人血清白蛋白相互作用影响的光谱学及细胞毒性研究
发布时间：2021-03-07 22:32
茶多酚与抗肿瘤药物联用具有增效、减毒以及逆转耐药性的作用,可作为生化调节剂应用于临床。通过荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色光谱和动态光散射研究了柔红霉素（DNR）与人血清白蛋白（HSA）在模拟生理条件下的相互作用以及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对DNR与HSA结合过程的影响。通过MTT法测定了DNR单一药物、 EGCG+DNR组合药物及其与HSA的复合物对人宫颈癌HeLa细胞系的细胞毒性。荧光猝灭结果与紫外-可见吸收差谱表明DNR与HSA之间形成静态复合物。由荧光数据拟合得到猝灭常数、结合常数、结合位点数、焓变和熵变。正的焓变和熵变表明DNR与HSA的结合过程主要为熵驱动,且疏水作用为结合过程的主要驱动力。位点标记竞争实验结合同步荧光光谱表明, DNR主要结合在HSA的IIA结构域,并且更接近色氨酸残基。在HSA+EGCG+DNR三元体系中,建立了三元体系的荧光数据处理模型,并用Matlab拟合得到EGCG存在下DNR与HSA相互作用的结合位点数与结合常数均明显减小,表明EGCG的存在降低了DNR与HSA的亲和力。此外,在EGCG存在下, DNR与HSA作用的结合常数随着温...
【文章来源】：光谱学与光谱分析. 2020,40(06)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
DNR (a)和EGCG (b)的分子结构图
式(1)中, F0和F分别为加入猝灭剂前后HSA的荧光强度, KSV为猝灭常数, kq为猝灭速率常数, τ0为HSA的荧光寿命, 约为10-8 s[8], [Q]为猝灭剂的浓度。不同温度下的F0/F对DNR浓度作图均呈良好线性关系, 所得猝灭速率常数列于表1中。 由表1可见, 猝灭速率常数kq数量级均为1012, 远远大于各类猝灭剂对生物大分子的最大动态猝灭速率常数2.0×1010 L·mol-1·s-1, 并且可以看出在298.2, 302.2, 306.2和310.2 K下, 随着温度的升高HSA的猝灭常数减小, 由此可以推测出DNR与HSA形成复合物, 此过程为静态猝灭过程。
紫外吸收光谱法用于DNR与HSA结合机制的验证。 不同浓度DNR对HSA紫外吸收光谱的影响如图3所示, 随着DNR浓度的增加, HSA吸光度增大, 表明DNR与HSA之间形成复合物。 另外对于静态猝灭来说, 蛋白的吸收强度由于生成复合物而改变, 动态猝灭则不会变化。 图3中插图所示为紫外差谱图, 图中(HSA+DNR)-DNR吸收谱线与HSA的吸收谱线存在差异, 该结果进一步表明DNR与HSA相互作用为静态猝灭过程[9]。表1 不同温度下DNR与HSA相互作用的猝灭速率常数、 结合常数、 结合位点数和吉布斯自由能变Table 1 Quenching rate constants, binding constants, the number of binding sites and Gibbs free energy changes for the interaction of DNR with HSA at different temperatures T/K kq/(×1012 L·mol-1·s-1) Ka/(×104 L·mol-1) n ΔG0/(kJ·mol-1) 298.2 1.76±0.02 2.60±0.06 1.04±0.02 -25.19±0.06 302.2 1.72±0.01 3.21±0.33 1.06±0.01 -26.05±0.26 306.2 1.64±0.02 3.97±0.30 1.07±0.01 -26.94±0.19 310.2 1.61±0.01 4.93±0.50 1.10±0.01 -27.85±0.26
【参考文献】：
期刊论文
[1]桑色素与血清白蛋白相互作用热力学行为[J]. 谢文,何欢,董家新,郭清莲,刘义. 物理化学学报. 2019(07)
[2]人参皂苷Rh2与血清白蛋白相互作用立体选择性的光谱及分子对接研究[J]. 李红,许茜,郑晓丽,许卉,陈庚,孟庆国. 光谱学与光谱分析. 2018(12)
[3]表没食子儿茶素没食子酸酯全乙酰化衍生物对柔红霉素致小鼠心脏毒性的影响[J]. 李丽,唐燕霞,欧冰凝,周焕第,陈润丽,刘布鸣,梁钢. 中国药理学通报. 2014(03)
[4]茶多酚的分子作用靶点及其在抗肿瘤药物实验治疗中的作用[J]. 陈淑珍,甄永苏. 药学学报. 2013(01)
[5]百草枯与牛血清白蛋白结合作用的荧光光谱[J]. 颜承农,张华新,刘义,梅平,李克华,童金强. 化学学报. 2005(18)
本文编号：3069918
【文章来源】：光谱学与光谱分析. 2020,40(06)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
DNR (a)和EGCG (b)的分子结构图
式(1)中, F0和F分别为加入猝灭剂前后HSA的荧光强度, KSV为猝灭常数, kq为猝灭速率常数, τ0为HSA的荧光寿命, 约为10-8 s[8], [Q]为猝灭剂的浓度。不同温度下的F0/F对DNR浓度作图均呈良好线性关系, 所得猝灭速率常数列于表1中。 由表1可见, 猝灭速率常数kq数量级均为1012, 远远大于各类猝灭剂对生物大分子的最大动态猝灭速率常数2.0×1010 L·mol-1·s-1, 并且可以看出在298.2, 302.2, 306.2和310.2 K下, 随着温度的升高HSA的猝灭常数减小, 由此可以推测出DNR与HSA形成复合物, 此过程为静态猝灭过程。
紫外吸收光谱法用于DNR与HSA结合机制的验证。 不同浓度DNR对HSA紫外吸收光谱的影响如图3所示, 随着DNR浓度的增加, HSA吸光度增大, 表明DNR与HSA之间形成复合物。 另外对于静态猝灭来说, 蛋白的吸收强度由于生成复合物而改变, 动态猝灭则不会变化。 图3中插图所示为紫外差谱图, 图中(HSA+DNR)-DNR吸收谱线与HSA的吸收谱线存在差异, 该结果进一步表明DNR与HSA相互作用为静态猝灭过程[9]。表1 不同温度下DNR与HSA相互作用的猝灭速率常数、 结合常数、 结合位点数和吉布斯自由能变Table 1 Quenching rate constants, binding constants, the number of binding sites and Gibbs free energy changes for the interaction of DNR with HSA at different temperatures T/K kq/(×1012 L·mol-1·s-1) Ka/(×104 L·mol-1) n ΔG0/(kJ·mol-1) 298.2 1.76±0.02 2.60±0.06 1.04±0.02 -25.19±0.06 302.2 1.72±0.01 3.21±0.33 1.06±0.01 -26.05±0.26 306.2 1.64±0.02 3.97±0.30 1.07±0.01 -26.94±0.19 310.2 1.61±0.01 4.93±0.50 1.10±0.01 -27.85±0.26
【参考文献】：
期刊论文
[1]桑色素与血清白蛋白相互作用热力学行为[J]. 谢文,何欢,董家新,郭清莲,刘义. 物理化学学报. 2019(07)
[2]人参皂苷Rh2与血清白蛋白相互作用立体选择性的光谱及分子对接研究[J]. 李红,许茜,郑晓丽,许卉,陈庚,孟庆国. 光谱学与光谱分析. 2018(12)
[3]表没食子儿茶素没食子酸酯全乙酰化衍生物对柔红霉素致小鼠心脏毒性的影响[J]. 李丽,唐燕霞,欧冰凝,周焕第,陈润丽,刘布鸣,梁钢. 中国药理学通报. 2014(03)
[4]茶多酚的分子作用靶点及其在抗肿瘤药物实验治疗中的作用[J]. 陈淑珍,甄永苏. 药学学报. 2013(01)
[5]百草枯与牛血清白蛋白结合作用的荧光光谱[J]. 颜承农,张华新,刘义,梅平,李克华,童金强. 化学学报. 2005(18)
本文编号：3069918
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