黄芪甲苷调控PTEN/PI3K/Akt信号通路介导心肌梗死后血管新生与心肌保护的实验研究

发布时间：2021-03-11 06:07

　　目的:通过构建急性心肌梗死大鼠模型及体外培养人脐静脉性内皮细胞（HUVEC细胞）,观察黄芪甲苷（AS-IV）促进心肌梗死后血管新生及相关心脏保护作用,并探讨促血管新生作用与PTEN/PI3K/Akt信号通路之间的关系,明确作用机制。方法:1.体内实验应用左心室前降支（LAD）结扎术构建大鼠心肌梗死动物模型,随机分为:假手术组（Sham,n=15）、心肌梗死模型组（Model,n=15）、AS-Ⅳ 低剂量组（AS-20mg/kg,n=15）、AS-Ⅳ高剂量组（AS-Ⅳ 50mg/kg,n=15）;假手术组与心肌梗死模型组灌胃等量生理盐水。给药及观察时间为2周。干预2周后心超检测心脏功能;TTC法染色观察心肌梗死面积;H-E染色以及Masson染色观察梗死组织病理变化以及纤维化程度;α-SMA免疫组化评估心肌梗死边缘组织血管新生情况;TUNEL法观察梗死灶边缘细胞凋亡的情况;电镜评估心肌组织线粒体、肌丝、内质网等超微结构病变情况;Western Blot方法检测 PTEN、PI3K、t-Akt、p-AKT、VEGF、Bcl-2、Bax 等蛋白表达。2.体外实验（1）通过设置对照组,采用CC... 

【文章来源】：南京中医药大学江苏省

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１?ＡＳ－ＩＶ干预后各组大鼠心脏功能检测??心脏超声提示：与假手术组（Ｓｈａｍ）相比，心肌梗死组（Ｍｏｄｅｌ）心室间隔和心尖收??缩程度减弱，ＬＶＥＦ和ＬＶＦＳ?

ＡＳ－ＩＶ?２０ｍｇ／ｋｇ?ＡＳ－ＩＶ?５０ｍｇ／ｋｇ??图２各组大鼠心脏大体观??戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉采血处死后离断心脏大血血，剔除其他组织，用滤纸擦干多余水分。大体观可见假异常，穿过ＬＡＤ未结扎缝线仍残留于心肌内；模型组（Ｍ死灶明显，呈灰白色，伴有左室前壁变薄，塌陷，考虑室壁模型组稍小，心肌梗死灶较模型组有所减小，左室前壁塌后各组梗死范围检测??肌梗死模型成模后，各组干预２周，之后戊巴比妥钠麻醉，后放入超低温冰箱冷冻，取同一切面行ＴＴＣ染色观察假手、ＡＳ－ＩＶ高剂量组的梗死范围。??

图３各组梗死范围??染色后多聚甲醛固定，正常心肌活细胞线粒体内的玻珀酸脱氢酶与ＴＴＣ发生反应，故??呈砖红色，梗死心肌因组织坏死脱氢酶活力丧失，故呈苍白色。软件评估梗死面积：白色??面积／左室总面积＝梗死面积。假手术组（Ｓｈａｍ）大鼠心肌呈砖红色，未发现明显梗死灶；??心肌梗死模型组（Ｍｏｄｅｌ）大鼠心脏左室壁变薄，室间隔増厚，考虑心肌梗死后大鼠心肌??代偿所致；低剂量（ＡＳ－ＩＶ２０ｍｇ／ｋｇ）组大鼠心肌梗死面积有所减少，心室扩张程度较模型??组有所改善，而高剂量（ＡＳ－ＩＶ?５０ｍｇ／ｋｇ）可以进一步减少梗死面积及改善心室重塑。??＊＊Ｐ＜０．０１ＶＳ假手术组，＃＃Ｐ＜０．０１ＶＳ模型组。??５．各组大鼠心肌组织ＨＥ染色病理变化??将保存在多聚甲醛中的各组心肌组织进行石蜡包埋、切片，并进行Ｈ－Ｅ染色评估各组??大鼠心肌组织的病变情况。??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3075992