靛玉红调节MAVS通路降低流感易感性研究

发布时间：2021-03-12 06:05

　　实验目的:流感是一种由流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病,严重危害人类的健康。板蓝根是临床常用的抗病毒中药,具有清热解毒、预防感冒及利咽等功效,用于温热发热、发斑、风热感冒、咽喉肿烂、腮腺炎等病毒感染疾患。靛玉红是板蓝根的主要活性成分,但人们对靛玉红的抗病毒作用和机制研究存在不足,其原因可能是缺乏合适的体内及体外抗病毒活性评价模型。除了病毒因素外,宿主因素也在流感病毒感染过程中起着关键的作用,因此,建立与宿主因素相关的病毒易感模型有利于评价中药和天然产物的抗病毒活性。本课题组前期利用拘束应激小鼠建立体内病毒易感性模型,发现拘束应激能够降低机体I型干扰素的分泌,增加小鼠对流感的易感性,并使用该模型成功评价了多种中药及天然产物的抗流感病毒活性。课题组的前期研究结果提示拘束应激导致的皮质酮（Corticosterone,CORT）上升是增加小鼠对流感易感性的主要原因,因此,本研究采用CORT负荷的A549细胞建立体外病毒易感性模型。本文在前期工作基础上,采用拘束应激小鼠模型及CORT负荷的A549细胞模型评价靛玉红的抗流感病毒作用,并探究其抗病毒机制,旨在深入揭示靛玉红抗病毒作用和机制,为开发... 

【文章来源】：暨南大学广东省 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
    1.1 流感病毒与流感的防治
    1.2 机体对流感的防御机制
        1.2.1 非特异性免疫的抗流感作用
        1.2.2 后天免疫的抗流感作用
    1.3 线粒体抗流感病毒信号通路
    1.4 流感易感性
    1.5 靛玉红可能的抗流感机理
    1.6 立题依据
第二章 靛玉红改善拘束应激小鼠流感易感性的研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 药品与主要试剂
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 病毒
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物分组及处理
        2.2.2 肺组织病理切片
        2.2.3 Western Blotting检测炎症因子的蛋白表达
        2.2.4 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠发病率和生存率的影响
        2.3.2 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺指数的影响
        2.3.3 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺组织的影响
        2.3.4 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺组织炎症因子的影响
    2.4 讨论
第三章 靛玉红降低流感易感性的作用机制研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 药品与实验试剂
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 实验细胞
        3.1.4 病毒
        3.1.5 实验仪器
        3.1.6 试剂配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 动物分组及处理
        3.2.2 细胞培养及处理
        3.2.3 MTT法检测靛玉红对细胞活力的影响
        3.2.4 细胞免疫荧光
        3.2.5 Western Blotting检测蛋白表达
        3.2.6 统计学处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺组织中NP、IFN-β 和IFITM3蛋白表达的影响
        3.3.2 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺组织中MAVS、p-IRF3和NF-κB蛋白表达的影响
        3.3.3 靛玉红对A549细胞及CORT负荷A549细胞增殖率的影响
        3.3.4 靛玉红对流感病毒感染CORT负荷A549细胞的保护作用
        3.3.5 靛玉红在CORT负荷A549细胞模型上的抗流感病毒机制研究
    3.4 讨论
第四章 靛玉红在线粒体抗病毒信号通路中靶标蛋白的研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 药品与试剂
        4.1.2 实验细胞
        4.1.3 病毒
        4.1.4 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养与处理
        4.2.2 Western Blotting检测蛋白表达
        4.2.3 pAcGFP1-Mito转染
        4.2.4 线粒体膜电位测定
        4.2.5 靛玉红作用靶标蛋白的预测及分子对接
        4.2.6 siRNA转染
        4.2.7 统计学处理
    4.3 实验结果
        4.3.1 靛玉红对流感病毒感染应激小鼠肺组织和CORT负荷A549细胞中Mfn2表达的影响
        4.3.2 靛玉红对流感病毒感染CORT负荷A549细胞线粒体形态的影响
        4.3.3 靛玉红对流感病毒感染CORT负荷A549细胞线粒体膜电位的影响
        4.3.4 靛玉红作用MAVS通路的靶标蛋白预测
        4.3.5 靛玉红在CORT负荷A549细胞模型上调节STING促进IFN-β 产生
    4.4 讨论
第五章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 创新和突破
    5.3 展望
参考文献
致谢
在学期间发表论文
附录



本文编号：3077815