二氢杨梅素对对乙酰氨基酚所致肝损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2021-03-20 21:05

　　对乙酰氨基酚（APAP）是世界上使用较为广泛的解热镇痛剂,治疗剂量下安全可靠,但各种原因所致的APAP过量会导致急性肝功能衰竭。由于APAP用药范围广,其肝毒性问题逐渐引起人们的注意。N-乙酰半胱氨酸（NAC）是FDA唯一批准的APAP中毒治疗药物。然而,NAC具有某些弊端,例如给药时间和诱导胃肠道反应,这限制了其临床应用。因此,探索合适的替代解毒剂是必要和迫切的。目前已经证明,许多单体活性成分和天然产物都对APAP所致的肝毒性具有抵抗作用。在安全剂量下,60%左右的APAP被UDP-葡糖醛酸基转移酶（UGT）代谢快速产生葡萄糖醛酸化代谢物,然后排泄到胆汁和尿液中。此外,大约10%的APAP被细胞色素P450（特别是CYP2E1,CYP1A2和CYP3A11）氧化成有毒性的中间体N-乙酰-X对苯醌亚胺（NAPQI）,随后由谷胱甘肽S-转移酶（GST）介导与谷胱甘肽（GSH）结合丧失毒性。在APAP过量时,NAPQI积累导致GSH耗竭,通过与巯基结合引发线粒体氧化应激反应,并最终导致严重的细胞死亡和肝损伤。经研究表明枳棋子乙醇提取物对APAP的肝脏毒性具有抵抗作用,其中含有一定量的二氢杨... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 前言
    1 对乙酰氨基酚肝脏毒性
        1.1 病因病机
        1.2 中毒机制
    2 保肝药物的研究现状
        2.1 中药抵抗APAP肝毒性研究现状
        2.2 枳椇子抵抗APAP肝损伤
        2.3 枳椇子和DHM
        2.4 DHM与肝脏保护
    3 本研究的主要内容与意义
        3.1 实验方法
        3.2 实验内容
        3.3 研究意义
第二章 二氢杨梅素对对乙酰氨基酚肝毒性的肝保护作用
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验动物
        1.3 仪器设备
        1.4 溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 动物实验
            2.1.1 小鼠血清获取及处理方法
            2.1.2 小鼠肝组织处理方法
        2.2 小鼠血清生化指标测定
            2.2.1 丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定
            2.2.2 天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定
            2.2.3 碱性磷酸酶（AKP）测定
            2.2.4 甘油三酯（TG）测定
            2.2.5 总胆固醇（T-CHO）测定
            2.2.6 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定
            2.2.7 总胆汁酸（TBA）测定
        2.3 小鼠肝组织H&E、Hoechst33258染色
        2.4 小鼠肝匀浆生化指标测定
            2.4.1 肝匀浆蛋白含量测定
            2.4.2 超氧化物歧化酶（SOD）测定
            2.4.3 丙二醛（MDA）测定
            2.4.4 谷胱甘肽（GSH）测定
        2.5 数据处理
    3 实验结果和讨论
        3.1 小鼠体重变化
        3.2 小鼠血清生化指标测定结果
        3.3 小鼠肝组织H&E及Hoechst染色结果
        3.4 小鼠肝匀浆生化指标测定结果
    4 本章小结
第三章 二氢杨梅素对对乙酰氨基酚体内代谢的影响
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 村料
        1.3 仪器设备
        1.4 溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 小鼠血清的处理
        2.2 LC-MS分析条件
        2.3 荧光定量PCR测定
        2.4 Western blot测定
        2.5 数据处理
    3 实验结果和讨论
        3.1 DHM对APAP及其体内代谢物的影响
        3.2 DHM对APAP体内代谢酶的调节作用
        3.3 DHM调节CYP2E1、CYP1A2和UGT1A1的活性
    4 本章小结
第四章 二氢杨梅素对肝细胞死亡和再生的影响
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 材料
        1.3 仪器设备
        1.4 溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 Western blot检测
        2.2 小鼠肝组织PCNA免疫组化
        2.3 数据处理
    3 实验结果和讨论
        3.1 DHM对APAP诱导的肝细胞死亡的抑制作用
        3.2 DHM对于肝再生相关蛋白的激活作用
            3.2.1 小鼠肝组织PCNA免疫组化结果
            3.2.2 DHM对APAP相关的肝再生的调节作用
    4 本章小结
第五章 二氢杨梅素对于对乙酰氨基酚所致体内脂质紊乱的调节
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 材料
        1.3 仪器设备
        1.4 溶液的配制
    2 实验方法
        2.1 荧光定量PCR检测
        2.2 数据处理
    3 实验结果与讨论
        3.1 荧光定量PCR对脂质稳态相关基因的测定结果
            3.1.1 脂肪酸摄取相关基因的测定结果
            3.1.2 脂质相关转录因子的测定结果
            3.1.3 甘油三脂合成相关基因的测定结果
            3.1.4 脂肪酸氧化相关基因的测定结果
            3.1.5 胆固醇合成相关基因的测定结果
            3.1.6 胆固醇代谢相关基因的测定结果
            3.1.7 胆汁酸外排相关基因的测定结果
            3.1.8 胆汁酸吸收相关基因的测定结果
    4 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读学位期间的学术成果
附录
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
[1]二氢杨梅素对APAP诱导小鼠急性肝损伤的保护作用[J]. 屠梦珏,魏进歌,陈鑫,王玉琴.  中国药理学通报. 2018(12)
[2]枳椇子品质与产地和外观性状相关性分析[J]. 刘聪,吴加梁,赵娜,孙健,沈晓霞,王志安.  中国中药杂志. 2017(24)
[3]Liuweiwuling tablets attenuate acetaminophen-induced acute liver injury and promote liver regeneration in mice[J]. Yan-Chang Lei,Wen Li,Pan Luo.  World Journal of Gastroenterology. 2015(26)
[4]Dihydromyricetin alleviates carbon tetrachloride-induced acute liver injury via JNK-dependent mechanism in mice[J]. Jun Xie,Jie Liu,Tu-Ming Chen,Qing Lan,Qing-Yu Zhang,Bin Liu,Dong Dai,Wei-Dong Zhang,Li-Ping Hu,Run-Zhi Zhu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(18)
[5]胆固醇合成途径的负反馈调控机制[J]. 柳童斐,宋保亮.  中国细胞生物学学报. 2013(04)
[6]对乙酰氨基酚肝毒性机理及药物干预靶点[J]. 汪倩,徐瑞娟,杨劲.  药学与临床研究. 2011(03)
[7]枳■子黄酮类成分研究[J]. 丁林生,梁侨丽,腾艳芬.  药学学报. 1997(08)



本文编号：3091667