靶向RAC1蛋白的大黄酸衍生物4L合成及对卵巢癌细胞的生长抑制作用

发布时间：2021-03-23 20:52

　　目的:以抑制卵巢癌浸润转移的RAC1蛋白为潜在靶点,利用分子对接辅助设计软件,对先导化合物大黄酸的母体结构进行修饰并合成大黄酸衍生物,探讨新合成衍生物对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用以及靶向调控机制。方法:1.基于RAC1靶点,利用分子对接软件,对大黄酸进行结构修饰合成大黄酸衍生物,利用紫外分光光度计、多功能酶标仪测定衍生物的紫外可见光吸收光谱、荧光激发光谱、荧光发射光谱,激光共聚焦显微镜观察衍生物在卵巢癌SKOV3细胞内的分布,高效液相色谱仪检测SKOV3细胞对合成衍生物的摄取量。2.采用MTT法检测衍生物对SKOV3细胞的生长抑制作用,HE染色观察衍生物4L对SKOV3细胞形态的影响,利用流式细胞仪检测衍生物4L对SKOV3细胞诱导凋亡情况,划痕实验检测衍生物对SKOV3细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测衍生物对SKOV3细胞侵袭能力的影响。3.Western blot法检测衍生物作用于SKOV3细胞后RAC1的表达情况的变化,根据荧光素酶报告基因系统原理构建含RAC1基因启动子和荧光素酶报告基因的慢病毒载体,转染SKOV3细胞株后经筛选获得SKOV3-RAC1-L... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１．大黄酸、化合物Ｘ和４Ｌ的分子结构，Ａ．大黄酸，Ｂ．化合物Ｘ，?Ｃ．大黄酸衍生物４Ｌ??

波长为２６１ｎｍ和４３１ｎｍ。结构改造后大黄酸紫外区的吸收峰未发??生明显改变，可见光区的吸收峰发生明显蓝移，结构改造后的衍生物４Ｌ吸??收峰分别为２６２ｎｍ和３８６ｎｍ，如图１－３。??０？７００?｜?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０．６３０?＾６１００?－??０．５６０?■?ｉ?－??０．４９０?－?Ｉ?＼?？??０．４２０?■?＼?－??Ｒｈｅｉｎ?｜?〇．３５〇?■?＼?４３ｉ．〇〇?■??０．２８０?？?？??０?２１０?ｉ?Ａ??０．１４０?＼?＼?３２７．ｆｆｉ８．００?／?＼?－??ｙ?＼?Ｉ?Ｉ?Ｚ?＼?５３１．００??０．０７０?－?１?１?＼?－?－??〇．〇〇〇?｜?，?，?，?，?，?■——■?■■?■??２４９．００?２８６．１０?３２３．２０?３６０．３０?３９７．４０?４３４．５０?４７１．６０?５０８．７０?５４５．８０?５８２．９０?６２０．００??波长“）??０．７００??１?１?■???１?１?１?１?１?１?＇?■?■?ｉ???０．６３０?■?？??２６２．００??０．５６０?■?｜?■??０．４９０?？?Ａ?．??＼??０．４２０?■?Ｉ?＼?？??４Ｌ?Ｉ?０．３５０?？?Ｉ?＼?．??０．２８０?■?＼?■??＼?３８６．００??０．２１０?■?＼?｜?？??０．１４０＾°?＼?ｎｎ?＾一＼?４２３．００?？??Ｏ．ＯＴＯ?＇Ｖｊ：００—义?■?■??〇■〇〇〇?ｉ?７￣?，?

２０１８届硕士毕业论文??３．?５大黄酸衍生物４Ｌ在ＳＫ０Ｖ３细胞的药物分布??通过激光共聚焦观察衍生物４Ｌ的药物分布，结果见图１－５，红色的标记??的是细胞膜，蓝色的是细胞核，衍生物４Ｌ的激发波长为４７〇ｎｍ，发射波长为??５４０ｎｍ，因此在４７０ｍｎ的激发光激发下可以发出绿色的荧光，发现药物除了??在细胞的边缘聚集，在细胞内也有明显的聚集，说明衍生物４Ｌ不仅结合细??胞膜，还能进入细胞内，进入细胞后的药物主要分布在细胞质中，进入细??胞核的较少。??■■??漏邐??图１－５．４Ｌ在ＳＫ０Ｖ３细胞内的分布（６００Ｘ），Ａ．红色为用ｄｉｌ染的细胞膜，Ｂ．蓝色为用ｈｏｅｃｈｅｓｔ染的细胞??核，Ｃ．绿色为被激发光激发的４Ｌ，?Ｄ．合并图??Ｆｉｇｌ－５．

【参考文献】：
期刊论文
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[3]抗癌新药乙双吗啉（AT-1727）与乙亚胺、丙亚胺的作用比较[J]. 张覃沐,陈正玉,林晨.  河南医学院学报. 1980(03)
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硕士论文
[1]大黄酸衍生物RH-01的抑制骨肉瘤生长作用及其作用机制研究[D]. 万宗明.河北医科大学 2006



本文编号：3096408