甘草内生菌代谢产物的药效学及相关物质研究

发布时间：2021-03-26 23:16

　　目的研究甘肃野生与栽培乌拉尔甘草内生菌代谢产物的抑菌、抗炎、镇咳、祛痰作用及有效内生菌代谢产物的相关物质,揭示甘草内生菌代谢产物与宿主植物在药效及化学成分方面的关联,为甘草内生菌代谢产物作为微生物资源应用提供依据。方法1.内生菌的分离与鉴定:采用琼脂法对野生及栽培乌拉尔甘草内生菌分离纯化,并对预实验筛选的20株甘草内生菌进行分子生物学鉴定,内生细菌采用16Sr DNA鉴定,内生真菌采用ITS鉴定。2.抑菌研究:体外抑菌试验,采用体外定量抑菌方法,以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为供试菌,检测甘草内生菌代谢产物的抑菌圈直径、最小抑菌浓度。体内抑菌试验,采用小鼠最小致死量（MLD）测定法,将供试菌肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别配成6个浓度梯度的菌悬液,昆明种小鼠3批,每批60只,随机分为6组,每组小鼠腹腔注射一个浓度的供试菌菌悬液,每只0.5m L,观察4d内各组小鼠死亡情况,测定供试菌MLD。再采用对各供试菌感染致死小鼠的保护作用试验方法,昆明种小鼠500只,随机分为25组,即空白组、模型组、阳性对照组、野生甘草水煎液组、栽培甘草水煎液组、20株甘草内生菌发酵物组,各组按... 

【文章来源】：甘肃中医药大学甘肃省

【文章页数】：127 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
前言
第一章 甘草内生菌的分离与鉴定
    第一节 甘草内生菌的分离
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 表面消毒
            2.2 甘草内生菌的分离纯化
            2.3 甘草内生菌的初步鉴定
        3 结果
            3.1 内生菌的形态学鉴定、编号
            3.2 内生菌的分离株数
        4 讨论
        5 小结
    第二节 甘草内生菌的鉴定
        1 实验材料
        2 实验方法
            2.1 甘草内生菌有效菌株的活化
            2.2 甘草内生菌的形态学鉴定
            2.3 甘草内生菌的分子生物学鉴定
        3 结果
            3.1 甘草内生菌菌株形态
            3.2 分子生物学鉴定结果
        4 讨论
        5 小结
第二章 甘草内生菌代谢产物抑菌作用研究
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 甘草内生菌发酵物的体外抑菌试验
        2.2 甘草内生菌发酵物体内抑菌试验
    3 结果
        3.1 体外抑菌
        3.2 体内抑菌试验
    4 讨论
    5 小结
第三章 甘草内生菌代谢产物抗炎作用研究
    第一节 体外抗炎作用研究
        1 材料
        2 方法
            2.1 细胞培养
            2.2 对RAW264.7 细胞存活率试验（MTT法）
            2.3 检测LPS诱导RAW264.7 细胞分泌的NO含量
            2.4 检测LPS诱导RAW264.7 细胞分泌的IL-1β、PGE2的含量
        3 结果
            3.1 对巨噬细胞RAW264.7 存活率的影响
            3.2 各组药物对LPS诱导的RAW264.7 分泌炎症因子的影响
        4 讨论
    第二节 体内抗炎作用研究
        1 材料与仪器
        2 方法
            2.1 甘草内生菌活化
            2.2 药物制备
            2.3 二甲苯致小鼠耳肿胀试验
            2.4 冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高试验
            2.5 对LPS致急性肺炎大鼠的干预作用
        3 结果
            3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
            3.2 对冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响
            3.3 对LPS致急性肺炎大鼠的干预作用
        4 讨论
        5 本章小结
第四章 甘草内生菌代谢产物镇咳祛痰作用研究
    1 材料与仪器
    2 实验方法
        2.1 受试物制备
        2.2 小鼠氨水引咳法
        2.3 小鼠SO2引咳法
        2.4 大鼠痰浊阻肺试验
    3 结果
        3.1 各组药物对氨水引咳小鼠的影响
2引咳小鼠的影响">        3.2 各组药物对SO₂引咳小鼠的影响
        3.3 各组药物对痰浊阻肺模型大鼠的影响
    4 讨论
    5 小结
第五章 甘草内生菌代谢产物化学成分的含量测定
    第一节 总黄酮和总皂苷的含量测定
        1 材料
        2 方法与结果
            2.1 对照品溶液的制备
            2.2 供试品溶液制备
            2.3 UV检测波长的确定
            2.4 方法学考察
            2.5 不同编号的内生菌发酵物中总黄酮、总皂苷含量测定结果
        3 讨论
    第二节 HPLC测定甘草内生菌代谢产物中甘草酸铵、甘草苷及甘草素的含量
        1 材料
        2 方法与结果
            2.1 色谱条件
            2.2 对照品溶液的制备
            2.3 供试品溶液的制备
            2.4 线性考察
            2.5 精密度试验
            2.6 重复性试验
            2.7 稳定性试验
            2.8 加样回收率试验
            2.9 含量测定
        3 讨论
第六章 全文总结与展望
参考文献
文献综述
    参考文献
研究成果
致谢



本文编号：3102415