蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

发布时间：2021-03-30 04:10

　　目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml^-1)、中(0.22 mg·ml^-1)、高(0.44 mg·ml^-1)浓度组。细胞在5%CO₂-95%N₂环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P&... 

【文章来源】：中国药师. 2020,23(06)

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【部分图文】：

蕨麻多酚对缺氧致凋亡心肌细胞形态的影响(Hoechst-PI染色，200×)

图1 蕨麻多酚对缺氧致凋亡心肌细胞形态的影响(Hoechst-PI染色，200×)细胞凋亡是细胞程序性死亡，是维持生物体内平衡的重要机制，主要通过细胞死亡受体介导的途径和线粒体介导的途径发挥凋亡作用。研究表明，缺氧导致的心肌细胞凋亡以线粒体凋亡为主[14,15]，细胞发生凋亡时形态学特征性表现为细胞核浓缩，染色质固缩，胞浆皱缩，并最终形成凋亡小体[16]。荧光染料Hoechst 33342能透过细胞膜，使染色后的正常细胞呈弱蓝色荧光，而凋亡细胞因染色质固缩而呈现出亮蓝色荧光。细胞坏死后，细胞膜丧失了完整性，从而碘化丙啶(PI)能透过坏死细胞的细胞膜嵌入核DNA后呈亮红色荧光。本实验采用Hoechst-PI双染方法同时观察到缺氧损伤模型组中的早期凋亡、晚期凋亡和死亡的心肌细胞，同时通过流式细胞技术检测也证实缺氧后心肌细胞凋亡率达到48.96%，明显高于正常对照组，两项结果表明缺氧诱导了心肌细胞的凋亡，此外实验还发现与正常对照组细胞相比，缺氧模型组细胞代谢活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)生成均显著降低，MDA生成量和LDH漏出量则显著升高，内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)水平降低，诱导型一氧化氮合酶(i NOS)则升高(已另文撰写)，表明心肌细胞缺氧损伤模型建立成功。给予蕨麻多酚干预后，晚期凋亡及死亡细胞显著减少，仅部分细胞出现早期凋亡，同时流式细胞技术检测也证实蕨麻多酚干预组心肌细胞的凋亡率均显著低于缺氧模型组，表明蕨麻多酚能够抑制缺氧导致的心肌细胞凋亡，对心肌细胞起到保护作用。在既往研究中曾经证实蕨麻乙醇提取物及蕨麻正丁醇部位可抑制缺血缺氧导致的心肌细胞凋亡[4,16]，本次研究结果进一步提示蕨麻多酚部位是蕨麻正丁醇部位抗凋亡作用的重要组成部分。

蕨麻多酚对缺氧损伤心肌细胞Bax m RNA表达的影响(n=3)


本文编号：3108833