广地龙对大鼠气道平滑肌细胞增殖的调节作用及机制研究
发布时间：2021-04-06 05:16
目的:广地龙为我国常用的动物类药材,在我国最早的中药学著作《神农本草经》中就已收载,其药用历史十分悠久,具有清热抗炎、抗惊厥、溶栓、平喘、利尿等功效,广泛应用于哮喘等呼吸道疾病的治疗。虽然广地龙有良好的平喘功效,但关于其抗哮喘分子机制的报道甚少。因此,本研究拟构建原代大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）的增殖模型,通过研究广地龙对ASMC增殖的影响作用,从细胞学和分子生物学水平探索广地龙治疗哮喘中气道重塑的作用靶点和作用途径,为广地龙开发新的治疗靶点和临床合理应用提供相关的理论基础和实验依据。方法:培养原代大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）的实验中,在无菌条件下从SPF级雄性SD大鼠分离出气管,并小心翼翼剥除结缔组织和脂肪,采用组织块法培养原代大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）,根据成纤维细胞和平滑肌细胞的贴壁时间不同,采用差速法纯化,并以荧光免疫反应鉴定其纯度。构建大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖模型的实验中,取第3～6代的ASMC,以组胺（Hist）作为大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖模型的诱导剂,选用四甲基偶氮唑盐法（MTT）考察Hist诱导ASMC增殖的成模浓度与时间范围。探索广地龙对平...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．?１?ＴＧＦ－?Ｐ?／ｓｍａｄｓ信号途径机制示意图??１．１．２．?２ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依赖通路（图１．２）：?ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依赖通路是气道重??塑的重要通路之一
纤维细胞转变，导致气道重塑。??图１．２?ＮＦ－?ｋ?Ｂ信号通路机制７Ｆ意图??１．１．２．３?ＭＡＰＫｓ通路（图１．３）：?ＭＡＰＫｓ通路主要是通过促进ＡＳＭＣ异常增殖，且??释放多种活性成分，从而参与气道重塑的发生和发展。ＭＡＰＫ是一个丝氨酸／苏氨酸激??酶家族，主要将细胞外刺激信号从细胞膜表面传导至细胞核内，有三个部分构成：ＥＲＫ、??ｐ３８和ＪＮＫ。ＥＲＫ部分是细胞增殖、分化、存活的关键的调控信号；ｐ３８和ＪＮＫ参与细??胞应激和凋亡的调节。冃前研究认为，主要诱导ＡＳＭＣ进行分裂的因子包括：①生长??因子：转化生长因子－３（ＴＧＦ－?Ｐ?）、表皮生长因子（ＥＧＦ）、血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）、??胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）、成纤维细胞生长因子；②炎症介质：内皮素－１?（ＥＴ－?１）、??白三烯Ｄ?４?（ＬＴＩ）?４）、血栓素Ａ?２?（ＴＸＡ?２）；③细胞因子：ＩＬ＿?１１和ＩＬ－?６；④酶：??ａ－凝血酶、溶酶体水解酶等。不同的促有丝分裂因子可与不同的受体结合发挥传递??信号的作用ｗ，生长因子是通过催化蛋白质酪氨酸残基磷酸化而诱导ＡＳＭＣ的有丝分??裂，一些炎症介质与Ｇ－蛋白耦联型受体（ＧＰＣＲ）相结合发挥作用，而细胞因子是经细??胞表面与Ｓｒｃ相耦联的糖蛋白受体传递信号，不Ｎ途径传递的信号都是以ｐ２１ｒａＳ?（?—??钟单体ＧＴＰ结合蛋白）为聚合点？，然后ｐ２１ｍＳ分别与下游的ｒａｆ－?１或磷脂酰肌??５??
，＿用，可改善组胺引发的豚鼠哮喘病情和舒张痉挛的离体气道组织，而对Ａｃｈ所诱导??鼠哮喘无疗效［４°］。??１．２．?１．３纤溶作用??上皮下纤维化作为哮喘气道重塑的一个重要的病理生理学变化，其形成与细胞外??质（ＥＣＭ）的生成，堆积和降解有关。而纤溶酶和基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）是参与??控细胞外基质的沉淀和水解的关键性蛋白酶。首先，在丽Ｐ依赖型胶原水解之前，??溶酶从ＥＣＭ中降解糖蛋白；其次，纤溶酶可直接活化ＭＭＰｓ促进ＥＣＭ的降解［４１］；最??，纤溶酶也可以通过拮抗匪Ｐ抑制物减少ＥＣＭ的沉淀。??研宄表明，地龙具有活化纤溶酶作用和直接降解纤维蛋白的纤溶酶样作用，可使??血液中优球蛋白的纤溶活性增加和降解时间缩短。Ｍｉｈａｒａ是第一个发现地龙水提物能??挥直接降解纤维蛋白和活化纤溶酶原的作用，并将其称为蚓激酶［４２］，广地龙因其较??的纤溶作用而起到控制或扭转气道重塑的上皮下纤维化。??为了便于了解近年来地龙药理作用，本文利用简化过后的图表将其药理作用进行??了总结和梳理，详见下图（图１．４）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参酮ⅡA对大鼠肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响[J]. 邵笑,祝骥,赵峻峰,许颖龄,张颖颖,杨建清,卢德赵. 浙江中西医结合杂志. 2016(05)
[2]补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响[J]. 李水芹,李学君,王飞,钟振东. 辽宁中医杂志. 2015(12)
[3]平喘Ⅰ号对哮喘鼠气道重塑ERK信号转导的干预[J]. 杨季国,马慧娟,徐缨,沈聪玲,李鹏飞,徐王燕,申琳雅. 中华中医药杂志. 2014(11)
[4]支气管哮喘气道重塑的研究认识[J]. 兰永怀,周铜,杨绎原,李舻,文新强,唐映利. 中国临床研究. 2014(06)
[5]补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad3表达的影响[J]. 杨晗,王飞,王全林,钟振东,李斌,杨昆. 中国实验方剂学杂志. 2013(24)
[6]哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞及线粒体超微结构变化[J]. 李淼,尚云晓. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[7]祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38 MAPK信号通路的影响[J]. 史锁芳,刘丽,黄辉,沈伟. 中华中医药杂志. 2012(09)
[8]气道平滑肌细胞作为免疫调节细胞与支气管哮喘炎症的关系[J]. 张贞贞,莫碧文. 中华哮喘杂志(电子版). 2012(01)
[9]阿奇霉素对大鼠气道平滑肌细胞瘦素和白介素-8、肿瘤坏死因子-α表达的影响[J]. 张文辉,嵇桂娟,朱述阳,段存玲,闫明华. 实用医学杂志. 2011(23)
[10]参环毛蚓细胞原代培养灭菌方法的研究[J]. 林小桦,李薇,侯雪芹,李巧容,韦健红,李维. 广州中医药大学学报. 2011(03)
硕士论文
[1]组胺对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERKmRNA、CyclinD1mRNA表达的影响[D]. 柴景伟.山西医科大学 2011
[2]ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用[D]. 黄磊.安徽医科大学 2009
本文编号：3120836
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．?１?ＴＧＦ－?Ｐ?／ｓｍａｄｓ信号途径机制示意图??１．１．２．?２ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依赖通路（图１．２）：?ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依赖通路是气道重??塑的重要通路之一
纤维细胞转变，导致气道重塑。??图１．２?ＮＦ－?ｋ?Ｂ信号通路机制７Ｆ意图??１．１．２．３?ＭＡＰＫｓ通路（图１．３）：?ＭＡＰＫｓ通路主要是通过促进ＡＳＭＣ异常增殖，且??释放多种活性成分，从而参与气道重塑的发生和发展。ＭＡＰＫ是一个丝氨酸／苏氨酸激??酶家族，主要将细胞外刺激信号从细胞膜表面传导至细胞核内，有三个部分构成：ＥＲＫ、??ｐ３８和ＪＮＫ。ＥＲＫ部分是细胞增殖、分化、存活的关键的调控信号；ｐ３８和ＪＮＫ参与细??胞应激和凋亡的调节。冃前研究认为，主要诱导ＡＳＭＣ进行分裂的因子包括：①生长??因子：转化生长因子－３（ＴＧＦ－?Ｐ?）、表皮生长因子（ＥＧＦ）、血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）、??胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）、成纤维细胞生长因子；②炎症介质：内皮素－１?（ＥＴ－?１）、??白三烯Ｄ?４?（ＬＴＩ）?４）、血栓素Ａ?２?（ＴＸＡ?２）；③细胞因子：ＩＬ＿?１１和ＩＬ－?６；④酶：??ａ－凝血酶、溶酶体水解酶等。不同的促有丝分裂因子可与不同的受体结合发挥传递??信号的作用ｗ，生长因子是通过催化蛋白质酪氨酸残基磷酸化而诱导ＡＳＭＣ的有丝分??裂，一些炎症介质与Ｇ－蛋白耦联型受体（ＧＰＣＲ）相结合发挥作用，而细胞因子是经细??胞表面与Ｓｒｃ相耦联的糖蛋白受体传递信号，不Ｎ途径传递的信号都是以ｐ２１ｒａＳ?（?—??钟单体ＧＴＰ结合蛋白）为聚合点？，然后ｐ２１ｍＳ分别与下游的ｒａｆ－?１或磷脂酰肌??５??
，＿用，可改善组胺引发的豚鼠哮喘病情和舒张痉挛的离体气道组织，而对Ａｃｈ所诱导??鼠哮喘无疗效［４°］。??１．２．?１．３纤溶作用??上皮下纤维化作为哮喘气道重塑的一个重要的病理生理学变化，其形成与细胞外??质（ＥＣＭ）的生成，堆积和降解有关。而纤溶酶和基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）是参与??控细胞外基质的沉淀和水解的关键性蛋白酶。首先，在丽Ｐ依赖型胶原水解之前，??溶酶从ＥＣＭ中降解糖蛋白；其次，纤溶酶可直接活化ＭＭＰｓ促进ＥＣＭ的降解［４１］；最??，纤溶酶也可以通过拮抗匪Ｐ抑制物减少ＥＣＭ的沉淀。??研宄表明，地龙具有活化纤溶酶作用和直接降解纤维蛋白的纤溶酶样作用，可使??血液中优球蛋白的纤溶活性增加和降解时间缩短。Ｍｉｈａｒａ是第一个发现地龙水提物能??挥直接降解纤维蛋白和活化纤溶酶原的作用，并将其称为蚓激酶［４２］，广地龙因其较??的纤溶作用而起到控制或扭转气道重塑的上皮下纤维化。??为了便于了解近年来地龙药理作用，本文利用简化过后的图表将其药理作用进行??了总结和梳理，详见下图（图１．４）。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参酮ⅡA对大鼠肺纤维化细胞TGF-β1/Smads信号通路的影响[J]. 邵笑,祝骥,赵峻峰,许颖龄,张颖颖,杨建清,卢德赵. 浙江中西医结合杂志. 2016(05)
[2]补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响[J]. 李水芹,李学君,王飞,钟振东. 辽宁中医杂志. 2015(12)
[3]平喘Ⅰ号对哮喘鼠气道重塑ERK信号转导的干预[J]. 杨季国,马慧娟,徐缨,沈聪玲,李鹏飞,徐王燕,申琳雅. 中华中医药杂志. 2014(11)
[4]支气管哮喘气道重塑的研究认识[J]. 兰永怀,周铜,杨绎原,李舻,文新强,唐映利. 中国临床研究. 2014(06)
[5]补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad3表达的影响[J]. 杨晗,王飞,王全林,钟振东,李斌,杨昆. 中国实验方剂学杂志. 2013(24)
[6]哮喘气道重塑大鼠气道上皮细胞及线粒体超微结构变化[J]. 李淼,尚云晓. 中国组织化学与细胞化学杂志. 2013(01)
[7]祛风宣痹方对哮喘豚鼠p38 MAPK信号通路的影响[J]. 史锁芳,刘丽,黄辉,沈伟. 中华中医药杂志. 2012(09)
[8]气道平滑肌细胞作为免疫调节细胞与支气管哮喘炎症的关系[J]. 张贞贞,莫碧文. 中华哮喘杂志(电子版). 2012(01)
[9]阿奇霉素对大鼠气道平滑肌细胞瘦素和白介素-8、肿瘤坏死因子-α表达的影响[J]. 张文辉,嵇桂娟,朱述阳,段存玲,闫明华. 实用医学杂志. 2011(23)
[10]参环毛蚓细胞原代培养灭菌方法的研究[J]. 林小桦,李薇,侯雪芹,李巧容,韦健红,李维. 广州中医药大学学报. 2011(03)
硕士论文
[1]组胺对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERKmRNA、CyclinD1mRNA表达的影响[D]. 柴景伟.山西医科大学 2011
[2]ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用[D]. 黄磊.安徽医科大学 2009
本文编号：3120836
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