哈蟆油蛋白酶解物对骨质疏松大鼠的保护作用和机制研究
发布时间：2021-04-06 06:35
目的:探讨哈蟆油蛋白酶解物（Oviductus Ranae protein hydrolysate,ORPH）对骨质疏松模型大鼠保护作用,建立骨质疏松大鼠定量蛋白组学,并进行生物信息学分析,阐述ORPH抗骨质疏松的作用机制。方法:采用碱性蛋白酶酶解法制备ORPH,并利用紫外光谱、红外光谱、蛋白特征显色、SDS-PAGE电泳、氨基酸色谱等方法鉴定ORPH的相关理化性质。利用H2O2损伤MC3T3-E1细胞,MTT法筛选ORPH最佳给药浓度和时间。利用去势法复制骨质疏松大鼠模型,用X-光射线法测定大鼠骨密度（Bone mineral density,BMD）,用改良Trizol法制备总RNA,qPCR法检测骨代谢相关基因mRNA表达水平,Western-blotting法检测骨代谢相关蛋白表达水平,HE染色法观察股骨骨小梁结构变化,免疫组化法评价碱性磷酸酯酶（Alkaline phosphatase,ALP）、骨形态发生蛋白-2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）的蛋白表达水平。TMT标记法标记胰蛋白酶水解后肽段,...
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常人和骨质疏松患者股骨局部骨微结构比较
于“痹证、骨痹、骨痿及骨枯”范畴。因此，中医理论认为骨质疏松症是肾、脾、肝、气、血瘀病变引起的年老体弱、肾气不足、肾阳虚和肾阴虚、筋骨失养、经络不通、气血瘀阻，属本虚标实之疾[4]。1.2.2 骨质疏松现代临床研究的发病机制“中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会”发表颁布的最新《原发性骨质疏松症诊疗指南》（2017）该指南详细记录了骨质疏松的定义、临床表现、风险因素、诊断与鉴别以及预防与治疗等详细内容。指南中明确阐述了原发性骨质疏松症发病机制，见图 2。遗传因素和环境因素是引起老年性骨质疏症的主要因素，随着年龄的增大，尤其是女性体内雌激素代谢减少，卵巢功能减退，机体对钙的吸收内类减弱，从而引起成骨细胞凋亡，增殖分化能力减弱，而破骨细胞的分化增殖加强，引起了大量成骨细胞凋亡，导致骨量大量流失，骨密度减小，骨脆性增强。当体内骨吸收作用强于骨代谢作用时，此时骨代谢平衡失调，引起骨质疏松病变。
20min 249.8 2202.2 1126.2 118.730min 8.77 1995.8 587.8 92.240min 8.75 1834.9 311.4 84.250min 8.75 1647.1 201.7 76.41h 8.71 586.1 126.5 45.32h 8.68 246.9 46.8 10.63h 8.56 245.8 46.6 10.44h 8.56 245.6 46.6 10.45h 8.56 245.6 46.5 10.4RPH 的紫外最大吸收波长 500nm-200nm 区间进行全波长扫描，由图 1.1 图谱可知，ORPH 在 A 峰，其吸收波长约为 280-290nm，OD 值为 0.732，初步判断 ORPH 具有吸收波长。
【参考文献】：
期刊论文
[1]林蛙油蛋白对骨质疏松大鼠成骨分化的影响研究[J]. 李晓华,隋欣,兰兴成,杨擎,隋清淳,杨鹏,李银清,石晓征,李娜,曲晓波,俞之胤,Han Dong,Yu peng. 中药药理与临床. 2018(02)
[2]原发性骨质疏松症诊疗指南（2017）[J]. Chinese Society of Osteoporosis and Bone Mineral Research;. 中国全科医学. 2017(32)
[3]基于质谱的定量蛋白质组学技术发展现状[J]. 牟永莹,顾培明,马博,闫文秀,王道平,潘映红. 生物技术通报. 2017(09)
[4]哈蟆油通过激活PI3K/Akt/NF-κB途径保护氧化应激损伤的大鼠卵巢颗粒细胞[J]. 零小妹,张绪慧,杨晶晶,吴新荣,梁磊. 天然产物研究与开发. 2017(06)
[5]哈蟆油蛋白酶解物对小鼠微核、精子畸形及Ames试验的研究[J]. 潘黛安,张鹤,魏星华,边帅,王秋,齐滨,赵雨,赵大庆. 时珍国医国药. 2016(06)
[6]林蛙油化学成分及药理作用研究[J]. 王丹彤,王丹辉. 长春中医药大学学报. 2015(06)
[7]MicroRNA-33在过氧化氢诱导NIH/3T3细胞衰老模型中的表达及作用[J]. 徐舜,黄海姣,李南红,张兵,贾宇斌,杨宇坤,崔红晶,刘新光. 牡丹江医学院学报. 2015(05)
[8]补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的机制研究[J]. 周昕欣,王彩霞. 中国实验方剂学杂志. 2015(03)
[9]林蛙卵多糖的提取工艺及其抗氧化作用研究[J]. 陈大勇,杨靖,李硕,郑毅男,卫功庆. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(12)
[10]中医理论对骨质疏松症发病机制的认识[J]. 王少君,李艳,刘红,刘振海. 世界中医药. 2013(09)
博士论文
[1]哈蟆油化学成分的研究[D]. 徐阳.吉林大学 2016
[2]哈蟆油延缓衰老作用及机制研究[D]. 姚晖.南方医科大学 2010
硕士论文
[1]老年男性骨质疏松症患者肾阳虚证与总Ⅰ型胶原延长肽和骨钙素的关系[D]. 张玉英.山东中医药大学 2014
[2]林蛙油抗氧化肽的制备及其抗氧化活性的研究[D]. 蓝晶晶.北京林业大学 2012
[3]绝经后妇女血清基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制因子-1与骨密度的关系[D]. 秦健.青岛大学 2008
[4]哈蟆油中镇咳活性成分的化学合成及活性研究[D]. 王哲.长春中医药大学 2007
本文编号：3120961
【文章来源】：长春中医药大学吉林省
【文章页数】：130 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常人和骨质疏松患者股骨局部骨微结构比较
于“痹证、骨痹、骨痿及骨枯”范畴。因此，中医理论认为骨质疏松症是肾、脾、肝、气、血瘀病变引起的年老体弱、肾气不足、肾阳虚和肾阴虚、筋骨失养、经络不通、气血瘀阻，属本虚标实之疾[4]。1.2.2 骨质疏松现代临床研究的发病机制“中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会”发表颁布的最新《原发性骨质疏松症诊疗指南》（2017）该指南详细记录了骨质疏松的定义、临床表现、风险因素、诊断与鉴别以及预防与治疗等详细内容。指南中明确阐述了原发性骨质疏松症发病机制，见图 2。遗传因素和环境因素是引起老年性骨质疏症的主要因素，随着年龄的增大，尤其是女性体内雌激素代谢减少，卵巢功能减退，机体对钙的吸收内类减弱，从而引起成骨细胞凋亡，增殖分化能力减弱，而破骨细胞的分化增殖加强，引起了大量成骨细胞凋亡，导致骨量大量流失，骨密度减小，骨脆性增强。当体内骨吸收作用强于骨代谢作用时，此时骨代谢平衡失调，引起骨质疏松病变。
20min 249.8 2202.2 1126.2 118.730min 8.77 1995.8 587.8 92.240min 8.75 1834.9 311.4 84.250min 8.75 1647.1 201.7 76.41h 8.71 586.1 126.5 45.32h 8.68 246.9 46.8 10.63h 8.56 245.8 46.6 10.44h 8.56 245.6 46.6 10.45h 8.56 245.6 46.5 10.4RPH 的紫外最大吸收波长 500nm-200nm 区间进行全波长扫描，由图 1.1 图谱可知，ORPH 在 A 峰，其吸收波长约为 280-290nm，OD 值为 0.732，初步判断 ORPH 具有吸收波长。
【参考文献】：
期刊论文
[1]林蛙油蛋白对骨质疏松大鼠成骨分化的影响研究[J]. 李晓华,隋欣,兰兴成,杨擎,隋清淳,杨鹏,李银清,石晓征,李娜,曲晓波,俞之胤,Han Dong,Yu peng. 中药药理与临床. 2018(02)
[2]原发性骨质疏松症诊疗指南（2017）[J]. Chinese Society of Osteoporosis and Bone Mineral Research;. 中国全科医学. 2017(32)
[3]基于质谱的定量蛋白质组学技术发展现状[J]. 牟永莹,顾培明,马博,闫文秀,王道平,潘映红. 生物技术通报. 2017(09)
[4]哈蟆油通过激活PI3K/Akt/NF-κB途径保护氧化应激损伤的大鼠卵巢颗粒细胞[J]. 零小妹,张绪慧,杨晶晶,吴新荣,梁磊. 天然产物研究与开发. 2017(06)
[5]哈蟆油蛋白酶解物对小鼠微核、精子畸形及Ames试验的研究[J]. 潘黛安,张鹤,魏星华,边帅,王秋,齐滨,赵雨,赵大庆. 时珍国医国药. 2016(06)
[6]林蛙油化学成分及药理作用研究[J]. 王丹彤,王丹辉. 长春中医药大学学报. 2015(06)
[7]MicroRNA-33在过氧化氢诱导NIH/3T3细胞衰老模型中的表达及作用[J]. 徐舜,黄海姣,李南红,张兵,贾宇斌,杨宇坤,崔红晶,刘新光. 牡丹江医学院学报. 2015(05)
[8]补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的机制研究[J]. 周昕欣,王彩霞. 中国实验方剂学杂志. 2015(03)
[9]林蛙卵多糖的提取工艺及其抗氧化作用研究[J]. 陈大勇,杨靖,李硕,郑毅男,卫功庆. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(12)
[10]中医理论对骨质疏松症发病机制的认识[J]. 王少君,李艳,刘红,刘振海. 世界中医药. 2013(09)
博士论文
[1]哈蟆油化学成分的研究[D]. 徐阳.吉林大学 2016
[2]哈蟆油延缓衰老作用及机制研究[D]. 姚晖.南方医科大学 2010
硕士论文
[1]老年男性骨质疏松症患者肾阳虚证与总Ⅰ型胶原延长肽和骨钙素的关系[D]. 张玉英.山东中医药大学 2014
[2]林蛙油抗氧化肽的制备及其抗氧化活性的研究[D]. 蓝晶晶.北京林业大学 2012
[3]绝经后妇女血清基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制因子-1与骨密度的关系[D]. 秦健.青岛大学 2008
[4]哈蟆油中镇咳活性成分的化学合成及活性研究[D]. 王哲.长春中医药大学 2007
本文编号：3120961
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