诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用及机制
发布时间：2021-04-10 03:34
目的通过研究诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞损伤的保护作用,探讨蒙药诃子制草乌炮制减毒机制。方法以不同浓度的乌头碱、诃子鞣酸及乌头碱+诃子鞣酸分别作用于H9C2细胞,利用高内涵分析（HCA）技术检测并分析药物对H9C2细胞数量、细胞核面积、细胞核DNA含量、Ca2+荧光强度及线粒体功能的影响。结果 10、20μmol/L乌头碱作用于H9C2细胞24 h后,可导致细胞内Ca2+超载;20μmol/L乌头碱可致H9C2细胞线粒体功能障碍;5、10、20μmol/L诃子鞣酸单独作用于H9C2细胞均无明显毒性;当10、20μmol/L诃子鞣酸与20μmol/L乌头碱共同作用于H9C2细胞24 h后,线粒体功能恢复,细胞内Ca2+荧光强度降低;与对照组相比,无明显差异。结论乌头碱会引起H9C2细胞Ca2+超载和线粒体功能障碍,可能是草乌致心肌细胞毒性的主要原因。诃子中的诃子鞣酸可明显抑制由乌头碱引起的Ca2+超载,改善线粒体功能,起到解草乌毒的作用。
【文章来源】：北京中医药大学学报. 2020,43(08)北大核心CSCD
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
不同浓度多柔比星对H9C2细胞的作用 (× 200)
表2 不同浓度乌头碱作用于H9C2细胞24 h的细胞毒性 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 2 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 组别 Groups 浓度Concentration(μmol/L) 细胞数量Number of cells 细胞核面积Nuclear area (μm2) 细胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+荧光强度Ca2+ fluorescence intensity 线粒体膜电位Mitochondrial membrane potential 对照组Control group 54.38±8.96 193.10±7.72 8 623.24±755.50 7 698.28±842.10 4 173.35±423.50 乌头碱组 5 65.88±9.64 187.21±14.07 8 874.45±512.40 8 464.45±649.90 4 229.23±146.30 Aconitine group 10 63.50±9.67 178.15±12.77 9 707.50±600.70* 10 014.36±1 042.05** 4 332.51±160.20 20 55.13±11.86 192.30±10.97 8 959.22±313.10 10 371.65±704.00** 4 998.45±233.30** F 1.20 2.11 4.04 14.02 12.49 P 0.146 5 0.130 7 0.021 3 <0.000 1 <0.000 1 注:与对照组比较*P<0.05 **P<0.01。Note: *P<0.05 **P<0.01 compared with the control group.3.3 诃子鞣酸对H9C2细胞的作用
草乌为中医、蒙医常用药,生草乌含有大量剧毒双酯型生物碱,2015版《中国药典》规定必须先煎久煎,以降低毒性。在蒙医临床应用中,草乌常配伍大量诃子使用以达到解毒目的。现代研究表明,蒙药诃子有保护心肌、缓解乌头碱对心肌毒性的作用[18];诃子提取物可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关[10]。表4 不同浓度诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞毒性的作用 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 4 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Chebulagic acid +Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 组别Groups 浓度 Concentration (μmol/L) 细胞数量Number of cells 细胞核面积Nuclear area (μm2) 细胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+荧光强度Ca2+ fluorescence intensity 线粒体膜电位Mitochondrial membrane potential 诃子鞣酸Chebulagic acid 乌头碱Aconitine 对照组Control group 54.25±11.97 181.40±8.95 9 436.53±417.20 8 410.26±561.10 3 478.48±634.20 乌头碱组Aconitine group 20 45.13±11.86 180.30±8.90 9 440.24±553.00 10 571.08±544.00** 4 765.16±136.10** 诃子鞣酸组+乌头碱组 Chebulagic acid + aconitine group 5 20 57.88±14.22 187.70±8.82 9 692.36±418.60 10 104.43±412.20 4 334.34±249.90 10 20 60.00±15.25 184.20±8.98 9 269.49±971.40 9 674.27±473.10# 4 158.02±25.06# 20 20 58.38±12.37 192.20±9.86 9 330.35±793.30 8 500.38±328.60## 3 785.15±134.10## F 1.64 2.28 1.10 33.43 18.44 P 0.187 1 0.079 9 0.416 8 <0.000 1 <0.000 1 注:与对照组比较**P<0.01;与乌头碱组比较#P<0.05 ##P<0.01。Note: **P<0.01 compared with the control group; #P<0.05 ##P<0.01 compared with aconitine group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄草乌及其炮制品对心脏毒性的作用和机制研究[J]. 温玉莹,王丽苹,沈志滨,庄素琪,江涛,唐春萍. 中药材. 2019(06)
[2]自噬在乌头碱诱导H9C2心肌细胞凋亡中的作用及机制研究[J]. 胡婷婷,唐欣,文欢,谢晓芳,彭成,饶朝龙. 中药材. 2018(05)
[3]诃子制草乌HPLC特征图谱研究及指标性成分定量测定[J]. 刘帅,李飞,李卫飞,李妍,许金凯,杜红. 北京中医药大学学报. 2017(04)
[4]乌头碱中毒及双黄连干预对心肌雷诺定受体表达的影响[J]. 李进军,钱招昕,夏小哲,方丽敏,肖桂林. 中南大学学报(医学版). 2016(03)
[5]草乌及其炮制品的急性毒性实验研究[J]. 刘帅,刘晓艳,李妍,杨畅,刘秋雨,李飞,杜红. 中国药物警戒. 2015(09)
[6]乌头碱药理作用及毒性研究进展[J]. 杨武斌,王平. 时珍国医国药. 2014(02)
[7]诃子对乌头碱致大鼠心肌细胞损伤模型的保护作用[J]. 潘燕,张述禹,李峰,侯金凤,周秀娟. 中国民族医药杂志. 2011(01)
[8]诃子提取物对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用[J]. 张东,邬国栋,张述禹,王玉华,杨玉梅. 中国药业. 2010(22)
本文编号：3128878
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不同浓度多柔比星对H9C2细胞的作用 (× 200)
表2 不同浓度乌头碱作用于H9C2细胞24 h的细胞毒性 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 2 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 组别 Groups 浓度Concentration(μmol/L) 细胞数量Number of cells 细胞核面积Nuclear area (μm2) 细胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+荧光强度Ca2+ fluorescence intensity 线粒体膜电位Mitochondrial membrane potential 对照组Control group 54.38±8.96 193.10±7.72 8 623.24±755.50 7 698.28±842.10 4 173.35±423.50 乌头碱组 5 65.88±9.64 187.21±14.07 8 874.45±512.40 8 464.45±649.90 4 229.23±146.30 Aconitine group 10 63.50±9.67 178.15±12.77 9 707.50±600.70* 10 014.36±1 042.05** 4 332.51±160.20 20 55.13±11.86 192.30±10.97 8 959.22±313.10 10 371.65±704.00** 4 998.45±233.30** F 1.20 2.11 4.04 14.02 12.49 P 0.146 5 0.130 7 0.021 3 <0.000 1 <0.000 1 注:与对照组比较*P<0.05 **P<0.01。Note: *P<0.05 **P<0.01 compared with the control group.3.3 诃子鞣酸对H9C2细胞的作用
草乌为中医、蒙医常用药,生草乌含有大量剧毒双酯型生物碱,2015版《中国药典》规定必须先煎久煎,以降低毒性。在蒙医临床应用中,草乌常配伍大量诃子使用以达到解毒目的。现代研究表明,蒙药诃子有保护心肌、缓解乌头碱对心肌毒性的作用[18];诃子提取物可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关[10]。表4 不同浓度诃子鞣酸对乌头碱致H9C2细胞毒性的作用 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 4 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Chebulagic acid +Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 组别Groups 浓度 Concentration (μmol/L) 细胞数量Number of cells 细胞核面积Nuclear area (μm2) 细胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+荧光强度Ca2+ fluorescence intensity 线粒体膜电位Mitochondrial membrane potential 诃子鞣酸Chebulagic acid 乌头碱Aconitine 对照组Control group 54.25±11.97 181.40±8.95 9 436.53±417.20 8 410.26±561.10 3 478.48±634.20 乌头碱组Aconitine group 20 45.13±11.86 180.30±8.90 9 440.24±553.00 10 571.08±544.00** 4 765.16±136.10** 诃子鞣酸组+乌头碱组 Chebulagic acid + aconitine group 5 20 57.88±14.22 187.70±8.82 9 692.36±418.60 10 104.43±412.20 4 334.34±249.90 10 20 60.00±15.25 184.20±8.98 9 269.49±971.40 9 674.27±473.10# 4 158.02±25.06# 20 20 58.38±12.37 192.20±9.86 9 330.35±793.30 8 500.38±328.60## 3 785.15±134.10## F 1.64 2.28 1.10 33.43 18.44 P 0.187 1 0.079 9 0.416 8 <0.000 1 <0.000 1 注:与对照组比较**P<0.01;与乌头碱组比较#P<0.05 ##P<0.01。Note: **P<0.01 compared with the control group; #P<0.05 ##P<0.01 compared with aconitine group.
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄草乌及其炮制品对心脏毒性的作用和机制研究[J]. 温玉莹,王丽苹,沈志滨,庄素琪,江涛,唐春萍. 中药材. 2019(06)
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[5]草乌及其炮制品的急性毒性实验研究[J]. 刘帅,刘晓艳,李妍,杨畅,刘秋雨,李飞,杜红. 中国药物警戒. 2015(09)
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[7]诃子对乌头碱致大鼠心肌细胞损伤模型的保护作用[J]. 潘燕,张述禹,李峰,侯金凤,周秀娟. 中国民族医药杂志. 2011(01)
[8]诃子提取物对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用[J]. 张东,邬国栋,张述禹,王玉华,杨玉梅. 中国药业. 2010(22)
本文编号：3128878
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