红景天苷通过DJ-1/Akt通路保护多巴胺能神经元的实验研究

发布时间：2021-04-15 06:31

　　目的:探讨Sal是否能通过DJ-1/Akt抗氧化通路在体内外发挥神经保护作用。实验一:建立MPP⁺诱导的PD-MN9D细胞损伤模型,筛选出MPP⁺处理MN9D细胞凋亡的最佳作用浓度和Sal对MPP⁺诱导的PD细胞模型的最佳保护浓度。实验二、实验三:分别用siAkt和siDJ-1转染PD-MN9D细胞,探讨Akt和DJ-1在Sal对细胞模型的保护作用中的机制。实验四:建立MPTP诱导的C57BL/6小鼠PD模型,探讨Sal对小鼠模型行为学和神经组织学的影响。方法:实验一:CCK-8试剂盒检测细胞活力,分别筛选出MPP⁺和Sal的最佳作用浓度;设立（1）空白对照组,（2）Sal组,（3）MPP⁺组,（4）Sal+MPP⁺组;Hoechst染色、流式细胞术检测不同处理组细胞形态学变化和凋亡水平;蛋白免疫印迹实验检测不同处理组细胞内DJ-1,Akt,p-Akt,GSK3β,p-GSK3β,cleaved-caspase3的蛋白表达水平。实验二、实验三:分别用siA... 

【文章来源】：陕西中医药大学陕西省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

Sal预处理保护MN9D细胞，减低MPP+诱导的细胞活力降低A：Sal化学结构式

图 1.1 Sal 预处理保护 MN9D 细胞，减低 MPP+诱导的细胞活力降低Sal 化学结构式。B:0-500μM MPP+处理细胞 24h，细胞活力随 MPP+浓度升高降低。C：Sal 预处理可减轻 MPP+对 MN9D细胞活力的损伤。使用 CCK-8法检细胞活力。**代表与对照组对比，P＜0.01；##代表与 MPP+组对比，P＜01。MPP+常用于制作 PD 细胞模型。本实验采用 MPP+诱导 MN9D 细胞制作 P胞模型。通过 CCK-8试剂盒检测细胞活力。结果如图 B，不同浓度 MPP+（0、0 、 200 、 300 、 400 、 500μM ）处理细胞 24h ，细胞活力以剂量依赖式降，300μM MPP+作为处理 MN9D 细胞 24h 的最佳浓度，用于后续细胞实验。图 C，用不同浓度 Sal 预处理细胞 24h 后，加入终浓度为 300μM MPP+处理胞 24h，筛选出 60μM 的 Sal 能够降低 MPP+诱导的细胞活力下降，差异有统计意义（P＜0.01）。2 Hoechst 染色检测细胞形态学变化：

红景天苷通过 DJ-1/Akt 通路保护多巴胺能神经元的实验研究表与对照组对比，P＜0.01；#代表与MPP+组对比，P＜0.05。用 Hoechst33258 染色试剂盒进行细胞形态学评估。经染色后，Control 组和al 组细胞的细胞核呈正常、均匀的蓝色，规则椭圆或圆形形态，两组无明显差；MPP+组用 300μM MPP+单独处理 24h 后，出现较多的凋亡细胞，其特征是胞形态变小，细胞核碎裂，染色质凝聚等；60μM Sal 预处理 24h 后，凋亡细胞目减少。结果表明，Sal 预处理减轻 MPP+诱导的细胞毒性（P＜0.05）。.3 流式细胞术（Annexin V-EGFP）检测细胞凋亡水平：


本文编号：3138832