TET1酶促核酸碱基羟基化：机制与中药小分子调控作用
发布时间：2021-04-18 05:58
目的:本课题旨在探讨TET1酶催化的核酸碱基的羟基化的化学机制,并研究9种中药小分子对其调控作用。方法:本课题以Fe2+和α-KG依赖的TET1酶为研究对象,分别以5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）、苯、甲苯、DMSO、d6-DMSO 为底物;H2O、H2018、1802、D20为反应体系,通过GC-MS,UPLC-MS检测方法探索TET1酶促核酸碱基羟基化的机制及羟基化产物·OH中的O、H的来源。并用GC-MS检测方法检测原花青素（Proanthocyanidin,PC）、蟛蜞菊内酯（Wedelolactone）、丹酚酸B（Salvianolic acid B）、槲皮苷（Quercetin-3-rhamnoside）、黄芩苷（Baicalin）、7,8-二羟基黄酮（7,8-dihydroxyflavone）、木犀草素（Luteolin）、氯化矢车菊素（CyanidinChloride）、花旗松素（Taxifolin）9种中药小分子化合物与5mC反应后在 N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺（N-Methyl-N-（trimethylsilyl）trifluoroa...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＴＥＴ１酶与ＤＮＡ结合物的三维图（数据引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］??
?５ｈｍＣ。在ＴＥＴ酶的作用下５ｈｍＣ能进一步氧化生５ｆＣ、５ｃａＣ。在此过程中５ｃａＣ自??发脱羧（脱去Ｃ０２分子）得到胞嘧啶Ｃ?（Ｃｙｔｏｓｉｎｅ），完成主动的氧化去甲基化（图２）。??由羟基化启动的核酸氧化去甲基，导致表观遗传学修饰，阻碍细胞的自我更新。??从而引起一些神经性疾病的发生。??香??图１?ＴＥＴ１酶与ＤＮＡ结合物的三维图（数据引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］???＿＾１?＾?ｇ?轻基化ｉ???图２?ＴＥＴ１催化５ｍＣ羟基化作用图??１．３．２?５ｈｍＣ与疾病的产生??５ｈｍＣ在表观遗传调控转录，调节大脑发育，成人大脑功能维护方面起着重??要作用［２３］。初期，在中枢神经系统组织发现５ｈｍＣ具有较高水平。随后，在小脑??浦肯野细胞的ＤＮＡ中发现５ｈｍＣ的水平和５ｍＣ相当且达到４０％Ｍ。相比之下??５ｈｍＣ的减少可能会与癌症有关。这表明５ｈｍＣ不可能保持在高度增殖的细胞中。??鼠从胚胎神经发育到成年大脑整个阶段，５ｈｍＣ不仅仅是ＤＮＡ甲基化的中间代??谢产物，而且是区别于５ｍＣ的持久动态表观遗传标记［８１］。５ｍＣ有差异的结合??ＭＢＤ１、ＭｅＣＰ２并引入Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３，而５ｈｍＣ则是渐进的局部结合??与ＭＢＤ３引入Ｈ３Ｋ４ｍｅ２Ｍ。研宄发现
槲皮苦（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ－３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）、黄苳苷（Ｂａｉｃａｌｉｎ）、７，８－二轻基黄酮??（７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）、木犀草素（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、氯化矢车菊素（Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、??花旗松素（Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ）９种中药小分子化合物进行研宄（图３），通过ＧＣ－ＭＳ检测??方法探讨小分子化合物对ＴＥＴ１酶促５ｍＣ羟基化体外反应的调控作用，并根据９种??中药小分子的调控作用进行够效关系对比。本课题选用ＧＣ－ＭＳ，?ＵＰＬＣ－ＭＳ检测??方法，该方法灵敏度高，色谱图直观可靠，结果比较客观，减少主观因素的干扰。??为本课题的顺利完成打下坚实基础。??７，８－二ｇ基黄Ｓ?ＯＨ?Ｏ?〇Ｈ?Ｏ?０Ｈ氯化矢车菊素??７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ?木庫草素Ｌｕｔｅｏｌｉｎ?花旗松素?Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ?Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ??ＯＨ?Ｏ?＇Ｃ?Ｙ?黄夸音?Ｂａｉｃａｌｉｎ?Ｊ＾Ｊｋ〇Ｈ??觸ｉｎ－３：ｎ：Ｈｖｉ?ｈＶｔｔ??Ｓｉ?＾—：。一??Ｈ３ｃｏ＾＾（Ａｏ?Ｈ〇ＸｆＪ?Ｓ?ｉｎ?丹酚酸?Ｂ??檢琪菊内酯?Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅ?ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ?ａｃｉｄ?Ｂ??图３：?９种中药小分子结构??１３??
本文编号：3144944
【文章来源】：广州中医药大学广东省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１?ＴＥＴ１酶与ＤＮＡ结合物的三维图（数据引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］??
?５ｈｍＣ。在ＴＥＴ酶的作用下５ｈｍＣ能进一步氧化生５ｆＣ、５ｃａＣ。在此过程中５ｃａＣ自??发脱羧（脱去Ｃ０２分子）得到胞嘧啶Ｃ?（Ｃｙｔｏｓｉｎｅ），完成主动的氧化去甲基化（图２）。??由羟基化启动的核酸氧化去甲基，导致表观遗传学修饰，阻碍细胞的自我更新。??从而引起一些神经性疾病的发生。??香??图１?ＴＥＴ１酶与ＤＮＡ结合物的三维图（数据引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］???＿＾１?＾?ｇ?轻基化ｉ???图２?ＴＥＴ１催化５ｍＣ羟基化作用图??１．３．２?５ｈｍＣ与疾病的产生??５ｈｍＣ在表观遗传调控转录，调节大脑发育，成人大脑功能维护方面起着重??要作用［２３］。初期，在中枢神经系统组织发现５ｈｍＣ具有较高水平。随后，在小脑??浦肯野细胞的ＤＮＡ中发现５ｈｍＣ的水平和５ｍＣ相当且达到４０％Ｍ。相比之下??５ｈｍＣ的减少可能会与癌症有关。这表明５ｈｍＣ不可能保持在高度增殖的细胞中。??鼠从胚胎神经发育到成年大脑整个阶段，５ｈｍＣ不仅仅是ＤＮＡ甲基化的中间代??谢产物，而且是区别于５ｍＣ的持久动态表观遗传标记［８１］。５ｍＣ有差异的结合??ＭＢＤ１、ＭｅＣＰ２并引入Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３，而５ｈｍＣ则是渐进的局部结合??与ＭＢＤ３引入Ｈ３Ｋ４ｍｅ２Ｍ。研宄发现
槲皮苦（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ－３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）、黄苳苷（Ｂａｉｃａｌｉｎ）、７，８－二轻基黄酮??（７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）、木犀草素（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、氯化矢车菊素（Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、??花旗松素（Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ）９种中药小分子化合物进行研宄（图３），通过ＧＣ－ＭＳ检测??方法探讨小分子化合物对ＴＥＴ１酶促５ｍＣ羟基化体外反应的调控作用，并根据９种??中药小分子的调控作用进行够效关系对比。本课题选用ＧＣ－ＭＳ，?ＵＰＬＣ－ＭＳ检测??方法，该方法灵敏度高，色谱图直观可靠，结果比较客观，减少主观因素的干扰。??为本课题的顺利完成打下坚实基础。??７，８－二ｇ基黄Ｓ?ＯＨ?Ｏ?〇Ｈ?Ｏ?０Ｈ氯化矢车菊素??７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ?木庫草素Ｌｕｔｅｏｌｉｎ?花旗松素?Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ?Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ??ＯＨ?Ｏ?＇Ｃ?Ｙ?黄夸音?Ｂａｉｃａｌｉｎ?Ｊ＾Ｊｋ〇Ｈ??觸ｉｎ－３：ｎ：Ｈｖｉ?ｈＶｔｔ??Ｓｉ?＾—：。一??Ｈ３ｃｏ＾＾（Ａｏ?Ｈ〇ＸｆＪ?Ｓ?ｉｎ?丹酚酸?Ｂ??檢琪菊内酯?Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅ?ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ?ａｃｉｄ?Ｂ??图３：?９种中药小分子结构??１３??
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