新型微米复合物提高茶叶活性成分EGCG稳定性及抗炎效果的研究
发布时间：2021-04-20 07:33
EGCG是茶叶中含量最高,最具生物活性的儿茶素化合物,具有抗氧化、抗炎等功效。但EGCG不稳定,容易发生氧化聚合,差相异构或水解反应,除此以外,EGCG在摄入人体后在胃肠道消化过程中破坏严重,导致其生物利用率低下,因此制约了 EGCG在功能食品和医药领域中的应用。本课题组前期研究表明米糠提取物能够有效负载茶叶中主要儿茶素类成分EGCG,同时可以提高EGCG的生物利用率。本论文在前期研究的基础上,通过自组装制备微米级EGCG-RBAI复合物（RBAI:米糠白蛋白提取物）,研究其在pH7.4PBS溶液和模拟胃肠道消化液中的稳定性;基于抗氧化能力优化EGCG-RBAI复合物配方,用于细胞实验;建立IL-1β诱导HT-29细胞炎症模型,通过分组处理（IL-1β诱导模型组、对照组、EGCG、RBAI、EGCG-RBAI三种预处理组）研究和比较其抑制细胞炎症发生的效果,采用qPCR法检测MAPK、NF-κB和STAT炎症相关信号通路及其下游基因的表达差异,采用酶联免疫试剂盒检测细胞因子IL-8及PGE2水平验证炎症发生,采用生化检测试剂盒检测抗氧化标记物SOD活力和MDA浓度探究细胞氧化应激响应变...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略词
第一章 文献综述
1.1 EGCG的理化性质
1.2 EGCG生物利用率
1.3 微胶囊包埋技术提高EGCG稳定性
1.4 EGCG的抗炎作用及机理
1.4.1 EGCG对机体氧化-还原状态的调节作用
1.4.2 EGCG对炎症因子水平的调节作用
1.4.3 EGCG对炎症相关通路的调控作用
1.5 炎症性肠病的发生及防治
1.6 本研究的目的、意义及主要内容
第二章 RBAI负载对EGCG稳定性的影响
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验设备
2.2.3 RBAI的制备
2.2.4 EGCG-RBAI复合物制备
2.2.5 考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度
2.2.6 稳定性实验
2.2.7 体外模拟胃肠道消化实验
2.2.8 HPLC法检测EGCG浓度
2.2.9 数据处理
2.3 结果与讨论
2.3.1 RBAI的蛋白质成分分析
2.3.2 RBAI负载对EGCG在pH 7.4 PBS中稳定性的影响
2.3.3 RBAI负载对EGCG在模拟胃肠道消化液中稳定性的影响
2.4 小结
第三章 HT-29细胞炎症模型建立及毒性检测
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 材料和试剂
3.2.2 仪器设备
3.2.3 HT-29细胞培养方法
3.2.4 MTT法检测细胞存活率
3.2.5 分组预处理实验和IL-1β诱导HT-29细胞炎症
3.2.6 实时荧光定量PCR （qPCR）分析基因表达
3.2.7 数据处理
3.3 结果与讨论
3.3.1 不同浓度EGCG对HT-29细胞存活率的影响
3.3.2 RBAI浓度对HT-29细胞存活率的影响
3.3.3 EGCG- RBAI复合物配方对HT-29细胞存活率的影响
3.3.4 EGCG预处理对炎症生物标记基因表达的影响
3.3.5 RBAI预处理对炎症生物标记基因表达的影响
3.4 小结
第四章 EGCG-RBAI复合物对炎症相关信号通路激活的抑制作用
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.2.1 材料和试剂
4.2.2 仪器设备
4.2.3 细胞实验用不同配方EGCG-RBAI复合物的制备
4.2.4 ORAC法检测抗氧化能力
4.2.5 细胞预处理实验
4.2.6 qPCR法定量检测基因表达
4.2.7 IL-8和PGE2浓度检测方法
4.2.8 数据处理
4.3 结果与讨论
4.3.1 细胞实验用EGCG-RBAI配方筛选
4.3.2 不同预处理对炎症相关主要信号通路基因表达的影响
4.3.3 不同预处理对通路下游炎症相关基因表达的影响
4.3.4 不同预处理对细胞上清液IL-8和PGE2水平的影响
4.3.5 不同预处理对炎症相关基因表达及炎症因子分泌的影响分析
4.4 小结
第五章 EGCG-RBAI复合物对细胞氧化应激响应的调节作用
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验细胞系
5.2.2 实验材料
5.2.3 实验设备
5.2.4 细胞预处理实验
5.2.5 qPCR法定量检测Nrf2基因表达
5.2.6 SOD活力检测
5.2.7 MDA含量检测
5.2.8 数据处理
5.3 结果与讨论
5.3.1 不同预处理对细胞氧化应激响应的调节作用
5.3.2 不同预处理对细胞氧化应激响应的影响分析
5.3.3 IL-1β诱导HT-29细胞炎症发生机制探讨
5.4 小结
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]表没食子儿茶素没食子酸酯对3T3-L1脂肪细胞氧化应激和炎症水平的影响[J]. 买地娜依·库得来提,唐文静,何雯楠,汪佳璐,宋还雷,沈秀华. 上海交通大学学报(医学版). 2018(11)
[2]Semaphorin3A在慢性炎症性疾病中的作用[J]. 向荣,许昱. 中华临床免疫和变态反应杂志. 2018(03)
[3]Nrf2抗氧化的分子调控机制[J]. 李慧,杨林. 生物信息学. 2018(01)
[4]绿茶儿茶素类生物标记物的检测及应用[J]. 孙丽丽,曾祥泉,Nilesh W Gaikwad,王欢,须海荣,叶俭慧. 茶叶科学. 2017(05)
[5]淀粉-多酚复合物理化及功能特性的研究进展[J]. 赵蓓蓓,贾祥泽,孙思薇,郑宝东,郭泽镔. 食品科学. 2018(13)
[6]蒲公英糖蛋白体外抗炎作用及对NF-κB信号通路的调控[J]. 夏炎,管晓辉,崔艳艳,高超,陈玲,董然,沈明浩. 食品科学. 2017(19)
[7]COX-2在炎症消退中的研究进展[J]. 谢翔,应炜阳,金胜威. 生命的化学. 2016(04)
[8]EGCG衍生物合成及药理活性研究进展[J]. 柳敏,饶国武,华允芬. 茶叶科学. 2016(02)
[9]活性氧调控炎症诱发肿瘤机制的研究进展[J]. 于卫华,周庆彪,刘颖,师腾瑞,王帅,张晓迪,海春旭. 癌变·畸变·突变. 2016(02)
[10]茶多酚对酒精性肝损伤大鼠的抗炎抗氧化保护作用[J]. 冯亮,汪燕,潘小玲. 中国药业. 2015(22)
博士论文
[1]多酚脂质体的物化稳定性及生理活性研究[D]. 邹立强.南昌大学 2015
硕士论文
[1]EGCG抑制结肠癌HT-29细胞生长及预防血管生成的作用机制[D]. 辛玉.山东大学 2013
[2]叶酸介导EGCG-BSA纳米制剂的制备及体外功能研究[D]. 袁帅.东北林业大学 2009
[3]EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨[D]. 李彩蓉.华中科技大学 2006
本文编号：3149262
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略词
第一章 文献综述
1.1 EGCG的理化性质
1.2 EGCG生物利用率
1.3 微胶囊包埋技术提高EGCG稳定性
1.4 EGCG的抗炎作用及机理
1.4.1 EGCG对机体氧化-还原状态的调节作用
1.4.2 EGCG对炎症因子水平的调节作用
1.4.3 EGCG对炎症相关通路的调控作用
1.5 炎症性肠病的发生及防治
1.6 本研究的目的、意义及主要内容
第二章 RBAI负载对EGCG稳定性的影响
2.1 引言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 实验设备
2.2.3 RBAI的制备
2.2.4 EGCG-RBAI复合物制备
2.2.5 考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度
2.2.6 稳定性实验
2.2.7 体外模拟胃肠道消化实验
2.2.8 HPLC法检测EGCG浓度
2.2.9 数据处理
2.3 结果与讨论
2.3.1 RBAI的蛋白质成分分析
2.3.2 RBAI负载对EGCG在pH 7.4 PBS中稳定性的影响
2.3.3 RBAI负载对EGCG在模拟胃肠道消化液中稳定性的影响
2.4 小结
第三章 HT-29细胞炎症模型建立及毒性检测
3.1 引言
3.2 材料和方法
3.2.1 材料和试剂
3.2.2 仪器设备
3.2.3 HT-29细胞培养方法
3.2.4 MTT法检测细胞存活率
3.2.5 分组预处理实验和IL-1β诱导HT-29细胞炎症
3.2.6 实时荧光定量PCR （qPCR）分析基因表达
3.2.7 数据处理
3.3 结果与讨论
3.3.1 不同浓度EGCG对HT-29细胞存活率的影响
3.3.2 RBAI浓度对HT-29细胞存活率的影响
3.3.3 EGCG- RBAI复合物配方对HT-29细胞存活率的影响
3.3.4 EGCG预处理对炎症生物标记基因表达的影响
3.3.5 RBAI预处理对炎症生物标记基因表达的影响
3.4 小结
第四章 EGCG-RBAI复合物对炎症相关信号通路激活的抑制作用
4.1 引言
4.2 材料和方法
4.2.1 材料和试剂
4.2.2 仪器设备
4.2.3 细胞实验用不同配方EGCG-RBAI复合物的制备
4.2.4 ORAC法检测抗氧化能力
4.2.5 细胞预处理实验
4.2.6 qPCR法定量检测基因表达
4.2.7 IL-8和PGE2浓度检测方法
4.2.8 数据处理
4.3 结果与讨论
4.3.1 细胞实验用EGCG-RBAI配方筛选
4.3.2 不同预处理对炎症相关主要信号通路基因表达的影响
4.3.3 不同预处理对通路下游炎症相关基因表达的影响
4.3.4 不同预处理对细胞上清液IL-8和PGE2水平的影响
4.3.5 不同预处理对炎症相关基因表达及炎症因子分泌的影响分析
4.4 小结
第五章 EGCG-RBAI复合物对细胞氧化应激响应的调节作用
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验细胞系
5.2.2 实验材料
5.2.3 实验设备
5.2.4 细胞预处理实验
5.2.5 qPCR法定量检测Nrf2基因表达
5.2.6 SOD活力检测
5.2.7 MDA含量检测
5.2.8 数据处理
5.3 结果与讨论
5.3.1 不同预处理对细胞氧化应激响应的调节作用
5.3.2 不同预处理对细胞氧化应激响应的影响分析
5.3.3 IL-1β诱导HT-29细胞炎症发生机制探讨
5.4 小结
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]表没食子儿茶素没食子酸酯对3T3-L1脂肪细胞氧化应激和炎症水平的影响[J]. 买地娜依·库得来提,唐文静,何雯楠,汪佳璐,宋还雷,沈秀华. 上海交通大学学报(医学版). 2018(11)
[2]Semaphorin3A在慢性炎症性疾病中的作用[J]. 向荣,许昱. 中华临床免疫和变态反应杂志. 2018(03)
[3]Nrf2抗氧化的分子调控机制[J]. 李慧,杨林. 生物信息学. 2018(01)
[4]绿茶儿茶素类生物标记物的检测及应用[J]. 孙丽丽,曾祥泉,Nilesh W Gaikwad,王欢,须海荣,叶俭慧. 茶叶科学. 2017(05)
[5]淀粉-多酚复合物理化及功能特性的研究进展[J]. 赵蓓蓓,贾祥泽,孙思薇,郑宝东,郭泽镔. 食品科学. 2018(13)
[6]蒲公英糖蛋白体外抗炎作用及对NF-κB信号通路的调控[J]. 夏炎,管晓辉,崔艳艳,高超,陈玲,董然,沈明浩. 食品科学. 2017(19)
[7]COX-2在炎症消退中的研究进展[J]. 谢翔,应炜阳,金胜威. 生命的化学. 2016(04)
[8]EGCG衍生物合成及药理活性研究进展[J]. 柳敏,饶国武,华允芬. 茶叶科学. 2016(02)
[9]活性氧调控炎症诱发肿瘤机制的研究进展[J]. 于卫华,周庆彪,刘颖,师腾瑞,王帅,张晓迪,海春旭. 癌变·畸变·突变. 2016(02)
[10]茶多酚对酒精性肝损伤大鼠的抗炎抗氧化保护作用[J]. 冯亮,汪燕,潘小玲. 中国药业. 2015(22)
博士论文
[1]多酚脂质体的物化稳定性及生理活性研究[D]. 邹立强.南昌大学 2015
硕士论文
[1]EGCG抑制结肠癌HT-29细胞生长及预防血管生成的作用机制[D]. 辛玉.山东大学 2013
[2]叶酸介导EGCG-BSA纳米制剂的制备及体外功能研究[D]. 袁帅.东北林业大学 2009
[3]EGCG对糖尿病肾病的保护作用及其机制探讨[D]. 李彩蓉.华中科技大学 2006
本文编号：3149262
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3149262.html
