紫草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡机制的研究

发布时间：2021-04-20 15:42

　　目的:黑色素瘤是一种最致命的皮肤癌,发病率较低但呈上升趋势、恶性程度高且预后较差。目前治疗黑色素瘤最有效的手段是手术切除后辅助化疗,但对于临床上治疗黑色素瘤的常规化疗药物,由于有毒副作用大、患者出现严重不良反应和产生原发性或获得性耐药等缺点,导致治疗效果不佳。而一些天然药物在肿瘤治疗中方面具有副作用少、药效温和、不良反应小等优点,且有些已经被开发成抗肿瘤药物应用于临床。紫草素作为一种从紫草的根部提取的活性成分,在多种肿瘤细胞中展现出良好的抗肿瘤作用,但对于其治疗黑色素瘤的确切机制尚不明确。本研究以人黑色素瘤A375细胞为研究对象,初步探讨了紫草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的机制,为紫草素作为一种治疗黑色素瘤的潜在药物提供理论和实验基础。方法:使用不同浓度的紫草素刺激A375细胞后,通过CCK8实验和倒置显微镜观察以确定紫草素对A375细胞增殖的影响。刺激后的细胞经不同的方法处理后,利用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡和细胞内活性氧水平的变化,并用Hoechst 32258染色检测紫草素对A375细胞凋亡的影响。通过WB检测与周期、凋亡、自噬、内质网应激和p38信号通路相关蛋白的表达... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词对照表
第一章 绪论
    1.1 黑色素瘤概述
        1.1.1 黑色素瘤简介
        1.1.2 黑色素瘤的发生
        1.1.3 黑色素瘤的诊断与分期
        1.1.4 黑色素瘤的治疗
    1.2 天然药物之紫草素
    1.3 细胞周期
        1.3.1 细胞周期简介
        1.3.2 细胞周期的调控
        1.3.3 细胞周期与肿瘤
        1.3.4 细胞周期的检测
    1.4 细胞凋亡
        1.4.1 细胞凋亡概述
        1.4.2 细胞凋亡的途径
        1.4.3 细胞凋亡与肿瘤
        1.4.4 细胞凋亡的检测
    1.5 细胞自噬
        1.5.1 细胞自噬概述
        1.5.2 细胞自噬的调控
        1.5.3 细胞自噬与肿瘤
        1.5.4 细胞自噬与细胞凋亡
        1.5.5 细胞自噬的检测
    1.6 活性氧
        1.6.1 活性氧简介
        1.6.2 活性氧与凋亡和自噬的关系
        1.6.3 活性氧与肿瘤
        1.6.4 活性氧的检测
    1.7 研究思路
        1.7.1 目的及意义
        1.7.2 研究技术路线
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料及试剂
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验用药与试剂
    2.2 实验器材
    2.3 试剂溶液配制
    2.4 试验方法
        2.4.1 细胞培养
        2.4.2 细胞活力的检测
        2.4.3 显微镜观察细胞形态学变化
        2.4.4 细胞周期的检测
        2.4.5 细胞凋亡的检测
        2.4.6 细胞内ROS的检测
        2.4.7 细胞内相关蛋白表达的检测
        2.4.8 数据处理与分析
第三章 实验结果
    3.1 紫草素显著抑制人黑色素瘤A375 细胞增殖
        3.1.1 紫草素对人黑色素瘤A375 细胞活力的影响
        3.1.2 紫草素对人黑色素瘤A375 细胞形态的影响
    3.2 紫草素诱导A375 细胞G2/M期阻滞
        3.2.1 流式细胞仪检测紫草素对A375 细胞周期的影响
        3.2.2 WB检测紫草素对A375 细胞周期蛋白的影响
    3.3 紫草素通过ROS介导的内质网应激诱导A375 细胞凋亡
        3.3.1 荧光显微镜观察紫草素对A375 细胞的影响
        3.3.2 流式细胞仪检测紫草素对A375 细胞凋亡的影响
        3.3.3 WB检测紫草素对A375 细胞凋亡蛋白的影响
        3.3.4 紫草素对A375 细胞内ROS水平的影响
        3.3.5 ROS 参与紫草素诱导的 A375 细胞凋亡
        3.3.6 内质网应激参与紫草素诱导的A375 细胞凋亡
        3.3.7 ROS影响紫草素诱导的内质网应激
    3.4 紫草素通过ROS/p38 通路激活A375 细胞自噬
        3.4.1 紫草素激活A375 细胞自噬
        3.4.2 抑制A375 细胞自噬对紫草素诱导的增殖抑制及凋亡的影响
        3.4.3 紫草素经p38 通路激活A375 细胞自噬
        3.4.4 ROS影响紫草素激活的p38 通路
第四章 讨论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]恶性黑色素瘤的研究进展[J]. 李治,张林梦,斯越秀,钱国英,王谦.  药物生物技术. 2018(01)
[2]紫草抗肿瘤活性成分及作用机制研究现状[J]. 杨武斌,罗晓玲,胡娟,米本中,樵星芳.  解放军药学学报. 2017(04)
[3]皮肤恶性黑色素瘤诊断及外科治疗策略[J]. 董小龙,马勇光,杨欣.  中国美容医学. 2016(06)
[4]黑色素瘤概述[J]. 王苗苗.  生物学教学. 2015(01)



本文编号：3149958