基于IFN-γ/T-bet、IL-4/STAT6信号通路探讨再生障碍性贫血发病机制及补肾健脾祛障方的干预作用

发布时间：2021-04-23 22:04

　　目的:通过研究补肾健脾祛障颗粒对再生障碍性贫血（以下简称“再障”）模型小鼠 Th1/Th2 比值与 IFN-γ/T-bet、IL-4/STAT6 信号通路、T-bet、GATA-3 的关系以及IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10因子表达的等细胞情况,来探讨Th1/Th2平衡在再障发病机制中的作用以及补肾健脾祛障颗粒治疗再障的作用靶点和机制,为临床更好地治疗再障提供理论依据和支持,并在前期研究基础上观察补肾健脾祛障颗粒治疗本病的临床疗效。方法:（1）基础研究:清洁级BALB/c小鼠,90只,雌性,随机选取其中的15只为正常对照组,剩余75小鼠通过免疫介导方法复制免疫介导再障小鼠模型,造模成功后（根据预实验结果,造模后第7天检测结果符合造模成功判定标准,造模成功率100%）剔除死亡小鼠10只,剩余65只小鼠随机分为模型组、中药低剂量组（0.78 g/（kg.d））、中药中剂量组（1.56 g/（kg.d））、中药高剂量组（3.12 g/（kg.d））及CsA（山地明）组（0.5ml/只）,每组13只。于造模后第7天检测血象和骨髓病理示造模成功后开始用药,中药低剂量组、中药... 

【文章来源】：山东中医药大学山东省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
Abstract
引言
第一部分 理论探讨
    1 中医学对再生障碍性贫血的认识
        1.1 再生障碍性贫血的中医溯源
        1.2 再生障碍性贫血的病因病机
        1.3 再生障碍性贫血的治疗
    2 Th1/Th2平衡偏移与再障关系的研究
        2.1 Th1/Th2对再障发病的影响
        2.2 Th1/Th2与IFN-γ/T-bet、IL-4/STAT-6信号通路的关系
        2.3 Th1/Th2与T-bet、GATA-3的关系
        2.4 Th1/Th2与相关细胞因子的关系
    3 补肾健脾祛障颗粒相关研究
        3.1 应用依据
        3.2 组方分析
        3.3 主要药物的现代药理研究
第二部分 实验研究
    实验一 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障模型小鼠的作用研究
        材料
            1 实验动物
            2 实验药物及制备方法
            3 主要实验试剂
            4 主要仪器
        方法
            1 免疫介导再障小鼠模型建立
                1.1 造模方法
                1.2 造模成功的判定标准
                1.3 造模成功外周血及骨髓病理体现
            2 分组
            3 给药方法
            4 取材
            5 实验内容
            6 统计学处理
        结果
            1 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠一般状态的影响
                1.1 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠体重的影响
            2 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠外周血细胞的影响
                2.1 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠外周血白细胞的影响
                2.2 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠外周血红细胞的影响
                2.3 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠外周血血红蛋白的影响
                2.4 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠血小板的影响
            3 骨髓及肝脾病理切片观察
                3.1 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠骨髓病理状态的影响
                3.2 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠肝脏病理状态的影响
                3.3 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠脾脏病理状态的影响
    实验二 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障模型小鼠骨髓及外周血单个核细胞相关因子表达的影响
        1 测定小鼠骨髓单个核细胞T-bet、GATA-3实时定量PCR（Real-time PCR）
            1.1 主要试剂与仪器
            1.2 目的基因mRNA引物序列
            1.3 实验方法
        2. Western Blot
            2.1 主要试剂,仪器
            2.2 主要试剂配制
            2.3 制备蛋白样品
            2.4 BCA法测蛋白浓度
            2.5 凝胶制备与上样
            2.6 电泳
            2.7 凝胶转膜及其检测
        3 ELISA
            3.1 主要实验仪器及试剂
            3.2 步骤
        4 统计学处理
        结果
            1 PCR结果
                1.1 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞T-bet mRNA表达的影响
                1.2 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞GATA-3 mRNA表达的影响
                1.3 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞STAT-6 mRNA表达的影响
            2 Western Blot结果
                2.1 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞T-bet蛋白表达的影响
                2.2 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞GATA-3蛋白表达的影响
                2.3 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障小鼠骨髓单个核细胞STAT-6蛋白表达的影响
            3 ELISA结果
第三部分 临床研究
    1 资料与方法
        1.1 病例来源
        1.2 样本量的估算
        1.3 随机化分组
        1.4 诊断标准
        1.5 纳入标准
        1.6 排除标准
        1.7 剔除标准
        1.8 脱落病例处理
    2 治疗方法
        2.1 给药方法
        2.2 疗程
    3 观察指标
        3.1 主要指标
        3.2 安全性观察
        3.3 疗效判定标准
    4 统计学方法
    5 结果
    6 不良反应
讨论（一）
    1 免疫介导再障小鼠模型的建立
        1.1 免疫介导再障小鼠模型
        1.2 免疫介导再障模型机理初探
    2 “补肾健脾法”的确立
    3 对免疫介导再障模型小鼠一般状态的影响
    4 对免疫介导再障模型小鼠血常规的影响
    5 对免疫介导再障模型小鼠骨髓及肝脾病理的影响
    6 补肾健脾祛障颗粒对再障模型小鼠Th1/Th2作用机制研究
        6.1 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障模型小鼠IFN-γ/T-bet、IL-4/STAT6信号通路的影响
        6.2 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障模型小鼠Th1/Th2比值的影响
        6.3 补肾健脾祛障颗粒对免疫介导再障模型小鼠T-bet、GATA-3表达的影响
        6.4 对免疫介导再障模型小鼠相关细胞因子表达的影响
    7 补肾健脾祛障颗粒治疗再障意义简析
        7.1 补肾健脾祛障颗粒研究意义
        7.2 补肾健脾祛障颗粒低、中、高剂量疗效分析
        7.3 补肾健脾祛障颗粒配伍意义分析
讨论（二）
    1 再生障碍性贫血受试者基线资料的分析
    2 临床疗效分析
    3 血常规分析
    4 骨髓增生程度的改善
    5 安全性评价
结语（一）
结语（二）
参考文献
综述
    参考文献
附录
致谢
查新报告
发表论文


【参考文献】：
期刊论文
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[3]补肾活髓颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓血清中bFGF的影响[J]. 郑雪晨,杨琦,臧婷婷,王树庆.  新中医. 2014(11)
[4]贫血性疾病中医病名探讨[J]. 段赟,李雪松,夏小军,开金龙,龙青.  中医研究. 2014(03)
[5]补肾活髓通络颗粒对非重型再生障碍性贫血患者血清成骨生长肽表达的影响[J]. 于丽娜,王树庆.  中华中医药学刊. 2014(02)
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[9]鹿角胶中4个主要氨基酸的测定研究[J]. 石岩,范晓磊,肖新月,程显隆,魏锋,田守生,林瑞超.  药物分析杂志. 2012(05)
[10]慢性再生障碍性贫血从肝脾肾论治的理论探讨[J]. 吴晓勇.  贵阳中医学院学报. 2009(06)

硕士论文
[1]参胶益髓方联合西药治疗慢性再生障碍性贫血临床观察[D]. 曹小雄.湖北中医药大学 2016



本文编号：3156125