酿酒酵母细胞中β-香树脂醇代谢流调控的研究

发布时间：2021-05-08 06:20

　　该研究通过使用CRISPR/CAS9基因编辑技术,成功在实验室前期保存的产β-香树脂醇酿酒酵母细胞中敲除编码胞质苹果酸合成酶（citrate synthase,CIT2）和过氧化物酶体柠檬酸合酶（malate synthase,MLS1）的CIT2和MLS1基因,并将编码磷酸葡糖异构酶（phosphoglucose isomerase,PGI1）的PGI1基因启动子替换成编码酵母线粒体蛋白细胞色素c氧化酶亚基Ⅶa（cytochrome c oxidase subunitⅦa）的核基因Cox9的启动子,从而弱化PGI1基因的表达,调节乙酰辅酶A和胞内NADPH供给,进而调控β-香树脂醇的产量。发酵实验结果表明,删除CIT2基因对β-香树脂醇的产量没有影响;删除MLS1基因后,β-香树脂醇的产量是对照菌株的1.85倍,达到了3.3 mg·L^-1。弱化PGI1基因表达后,β-香树脂醇的产量是对照菌株的3.75倍,达6.7 mg·L^-1。该研究通过使用CRISPR/CAS9基因敲除技术成功的敲除CIT2和MLS1基因并弱化PGI1基因,提高了β-香树... 

【文章来源】：中国中药杂志. 2020,45(16)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 工具酶与试剂
    1.2 质粒、菌株与引物
    1.3 培养基
2 方法
    2.1 基因敲除组件的构建
    2.2 酵母转化
    2.3 发酵及产物的提取
    2.4 鲨烯、麦角固醇、羊毛甾醇及β-香树脂醇检测分析
3 结果与分析
    3.1 基因敲除阳性菌株的验证
    3.2 菌株代谢流变化
4 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]产β-香树脂醇酿酒酵母细胞构建及高密度发酵[J]. 孙梦楚,晁二昆,苏新堯,朱敏,苏勇,钱广涛,陈士林,王彩霞,薛建平.  中国中药杂志. 2019(07)
[2]创建酿酒酵母细胞工厂高效生产人参皂苷前体达玛烯二醇Ⅱ[J]. 王冬,刘怡,许骄阳,王金鹤,戴住波,张学礼,黄璐琦.  药学学报. 2018(08)
[3]紫杉醇生物合成途径及合成生物学研究进展[J]. 匡雪君,王彩霞,邹丽秋,李滢,孙超.  中国中药杂志. 2016(22)
[4]中药功效成分合成生物学研究进展[J]. 苏新堯,薛建平,王彩霞.  中国中药杂志. 2016(22)



本文编号：3174838