通络糖泰对高糖培养的SD大鼠施旺细胞分化的影响及高糖缺氧条件下SD大鼠背根神经节神经元培养方法研究

发布时间：2021-05-08 09:25

　　目的:通过观察通络糖泰方对高糖培养的SD大鼠施旺细胞（Schwann Cells,SCs）成髓化的影响,从而证实通络糖泰可促进髓鞘调控因子的表达,改善糖尿病周围神经病变的发生发展;同时研究高糖缺氧对背根神经节神经元（dorsal root ganglion neuron,DRGn）培养的最适条件,为糖尿病周围神经病变（Diabetic peripheral neuropathy DPN）的基础研究提供一定的科学理论依据。方法:1.选新生3-5d的SD大鼠,取坐骨神经,原代培养SCs,取第三代生长良好的SCs作为研究对象。用50mM高糖培养72h,建立DPN SCs模型。加入通络糖泰含药血清干预,在前期研究的基础上,通过Western Blot法检测髓鞘调控因子P0在高糖条件下的SCs 24h、48h、72h三个时间点的表达。2.选新生3d的SD大鼠,取背根神经节,原代培养背根神经节神经元,取生长良好的神经元作为研究对象。通过光镜下观察细胞形态、ROS表达法及CCK-8法检测0、6h、24h时间点不同浓度高糖、缺氧对DRGn的诱导损伤,以期建立DPN背根神经节神经元模型。结果:1.S-1... 

【文章来源】：成都中医药大学四川省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词
前言
一 通络糖泰方对高糖培养SD大鼠施旺细胞髓鞘调控因子P0蛋白的影响
    1 实验材料
        1.1 实验动物研究
        1.2 实验用药
        1.3 主要实验试剂及仪器
    2 实验方法
        2.1 SCs原代培养、纯化、传代及鉴定
        2.2 通络糖泰含药血清制备
        2.3 实验分组
        2.4 Westernblot法测定6组3个复孔培养SCs24h、48h、72h的P0蛋白的表达
        2.5 统计学方法
    3 结果
        3.1 S-100免疫荧光鉴定
        3.2 Westernblot检测髓鞘调控因子P0的表达
    4 讨论
        4.1 SCs原代培养、纯化及鉴定方案选择的依据
        4.2 选用高糖培养SCs的依据
        4.3 中医学对DPN的认识
        4.4 通络糖泰方立方依据
        4.5 中药血清药理学
        4.6 通络糖泰对SD大鼠SCs髓鞘调控因子P0表达的影响
二 高糖缺氧条件下SD大鼠DRGn培养方法研究
    1 实验材料
        1.1 实验动物研究
        1.2 主要实验试剂与仪器
    2 实验方法
        2.1 DRGn的原代培养、纯化及鉴定
        2.2 高糖和(或)缺氧终浓度确定
        2.3 ROS检测方法
        2.4 CCK-8法检测方法
        2.5 统计分析
    3 结果
        3.1 DRGn形态学观察
        3.2 DRGn免疫荧光鉴定
        3.3 高糖缺氧损伤后的细胞形态学观察
        3.4 检测细胞内活性氧(ROS)水平摸索高糖缺氧损伤对DRGn的最适条件
        3.5 CCK-8法摸索高糖缺氧损伤对DRGn活性的最适条件
    5 讨论
        5.1 背根神经节神经元(DRGn)的原代培养、纯化及鉴定
        5.2 建立高糖缺氧模型的依据及结果
        5.3 ROS法检测依据
        5.4 CCK-8法检测依据
结论
问题与展望
参考文献
综述
    参考文献
致谢
附件1


【参考文献】：
期刊论文
[1]筋脉通含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元氧化应激及UCP3、IGF-1表达的影响[J]. 王超,梁晓春,杨丹,吴亚楠.  世界中西医结合杂志. 2017(06)
[2]黄芪多糖保护胰岛β细胞改善大鼠2型糖尿病[J]. 唐思梦,杨泽民,陈伟强,袁前发,陈思羽,李红枝.  第二军医大学学报. 2017(04)
[3]“当归四逆汤”治疗寒凝血瘀型糖尿病周围神经病变优效性的临床观察[J]. 王平,崔鹏,洪杨洋.  中华中医药学刊. 2017(03)
[4]赤芍提取物对早期糖尿病肾病大鼠血糖、血脂及肾功能的影响[J]. 陈焱.  中华中医药学刊. 2017(01)
[5]红花注射液联合依帕司他治疗2型糖尿病周围神经病变疗效观察[J]. 刘爱林,袁志军,赵涛,张皎月.  陕西中医. 2016(10)
[6]通络糖泰方对糖尿病周围神经病变大鼠JNK信号转导通路的影响[J]. 张翕宇,胡芸,谢春光,杜联.  中国实验方剂学杂志. 2016(24)
[7]通络糖泰方对糖尿病周围神经病变大鼠JNK信号转导通路及炎性细胞因子的影响[J]. 张翕宇,谢春光,杜联.  中医药导报. 2016(17)
[8]温阳活血通痹方对糖尿病性周围神经病变阳虚寒凝血瘀证神经传导速度及血浆Hcy的影响[J]. 李光善,黄达,李鸣镝,林兰.  中医杂志. 2016(17)
[9]小檗碱对高糖培养的背根神经节中疼痛相关因子的影响[J]. 李琰,彭振红,陈磊.  山西医药杂志. 2016(15)
[10]中药筋脉通对糖尿病大鼠背根神经节神经元超微结构影响的研究[J]. 杨丹,梁晓春,屈岭,吴群励,吴亚楠,石玥,戴威.  环球中医药. 2016(06)

硕士论文
[1]缺氧诱导因子-1α在2型糖尿病及其周围神经病变中的变化及意义的研究[D]. 唐枫燕.苏州大学 2013



本文编号：3175087