基于Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路cross-talk研究中药新风胶囊改善AA大鼠肺功能的机制
发布时间：2021-05-13 13:01
1目的在新安医学“从脾治痹”、“健脾化湿通络法”理论指导下,拟用佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）大鼠为模型,深入研究类风湿关节炎免疫炎症反应、氧化应激状态、肺功能的变化及益气健脾通络中药复方新风胶囊（Xinfeng Capsule,XFC）对类风湿关节炎肺病的调节机制,探讨新风胶囊治疗类风湿关节炎的免疫学机制。探讨Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路的cross talk在类风湿关节炎相关肺间质病变中的作用,为中医药治疗类风湿关节炎,提供理论依据。2研究背景RA肺功能下降与Notch信号通路调控的,如调节性T细胞（Treg）等,免疫效应细胞的分化和发育相关,直接参与的组织纤维化过程。同时,因机体免疫紊乱而诱发的氧自由基,如活性氧（ROS）等,介导的氧化应激损伤也参与这一过程。Notch/Treg信号通路激活,可使类风湿关节炎患者肺功能降低,ROS-PKC/NF-κB信号通路过激活,致氧化应激损伤也影响肺功能。而两者间存在的“串话”可能是导致RA及其肺功能降低的机制之一。新安医家通过长期临床实践总结,在治疗痹证方面,辨治时尤重脾胃,摸索总结出...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
第一部分 RA肺功能降低的国内外研究概况
1 RA肺功能降低的国内外研究现状
1.1 RA患者存在肺功能降低
1.2 Notch/Treg信号通路表达异常致使RA免疫炎症失调
1.2.1 Notch信号通路可调控Treg表达
1.2.2 Treg免疫耐受能力降低可能直接导致免疫炎症产生
1.2.3 Notch信号通路过激活致调控Treg失衡可能是导致RA肺功能降低的机制之一
1.3 ROS介导的PKC/NF-κB通路表达异常致使RA氧化应激失衡
1.3.1 ROS介导的氧化应激损伤可导致氧化应激失衡
1.3.2 ROS-PKC/NF-κB信号通路可调控氧化应激反应
1.3.3 ROS-PKC/NF-κB信号通路过激活致氧化应激失衡可能是导致RA肺功能降低的机制之一
1.4 Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路Cross-talk可能是RA肺功能降低的重要因素
2 RA肺功能降低的中医病机分析
2.1“从脾治痹”理论溯源
2.2“脾虚湿盛，气血亏虚，痰瘀互结”是痹证的重要证候特征
2.3“脾虚湿盛、痰瘀阻肺”是痹证相关肺病的重要病机特点
2.4“益气健脾、化湿通络、培土生金”是痹证相关肺病的重要治疗手段
3. 现代中医对RA肺功能降低的机制研究
3.1 临床实验研究
3.2 动物实验研究
参考文献
第二部分 RA肺功能降低的实验研究
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 药品及试剂
1.2.1 药品
1.2.2 主要试剂
1.2.3 主要仪器设备：
1.3 方法
1.3.1 动物模型复制及给药
1.3.2 大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的测算
1.3.3 肺功能检测
1.3.4 关节及肺脏病理观察
1.3.5 ELISA法检测大鼠血清NO、iNOS、HIF-1、NADPH等氧化应激指标的表达
1.3.6 ELISA法检测大鼠血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-35、MMP-9、Rantes等细胞因子的表达
1.3.7 流式细胞术检测大鼠外周血CD4~+CD25~+Notch1~+Treg, CD4~+CD25~+Notch3~+Treg.
1.3.8 免疫组化法检测AA大鼠肺组织CD4、FoxP3、PKC、NF-κB表达
1.3.9 荧光定量PCR法检测大鼠肺组织Notch1、delta1、HES1mRNA
1.3.10 Western blot法检测大鼠肺组织Notch4、Jagged1、Jagged2蛋白表达
1.3.11 荧光定量PCR法检测大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB mRNA
1.3.12 Western blot法检测大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB蛋白表达
1.4 统计学处理
2 研究结果
2.1 AA大鼠关节症状、肺功能及新风胶囊对其的影响
2.1.1 AA大鼠体质量、足趾肿胀度和AI变化及XFC对其影响
2.1.2 AA大鼠肺功能变化及XFC对其影响
2.1.3 AA大鼠关节病理形态学变化及XFC对其影响
2.1.4 AA大鼠肺组织病理形态学变化及XFC对其影响
2.2 AA大鼠外周血细胞因子、氧化应激指标变化及新风胶囊对其的影响
2.2.1 XFC对AA大鼠外周血细胞因子的影响
2.2.2 XFC对AA大鼠外周血NO、iNOS、HIF-1、NADPH影响
2.2.3 XFC对AA大鼠外周血CD4~+CD25~+Notch1~+Treg, CD4~+CD25~+ Notch3~+Treg的影响
2.3 AA大鼠肺组织Notch/Treg信号通路变化及新风胶囊对其的影响
2.3.1 AA大鼠肺组织CD4、FoxP3表达变化及XFC的影响
2.3.2 AA大鼠肺组织Notch相关基因表达变化及XFC的影响
2.3.3 AA大鼠肺组织Notch相关蛋白表达变化及XFC的影响
2.4 AA大鼠肺组织ROS-PKC/NF-κB通路变化及新风胶囊对其的影响
2.4.1 AA大鼠肺组织PKC、NF-kB表达变化及XFC的影响
2.4.2 AA大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κBmRNA的表达及XFC的影响
2.4.3 AA大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB蛋白的表达及XFC的影响
2.5 AA大鼠肺组织Notch/Treg信号通路和ROS-PKC/NF-κB通路与肺功能参数的关系
2.5.1 AA大鼠肺功能参数与肺组织Notch/Treg通路的关系
2.5.2 AA大鼠肺功能参数与肺组织ROS-PKC/NF-κB通路的关系
2.5.3 AA大鼠肺组织Notch和ROS通路的关系
讨论
1 实验模型和对照药物的选择
2 主要指标的选择意义
2.1 大鼠肺功能参数
2.2 大鼠Notch信号通路相关指标
2.3 大鼠外周血细胞因子
2.4 大鼠ROS-PKC/NF-κB信号通路相关指标
2.5 大鼠外周血氧化应激指标
3 新风胶囊调节AA大鼠肺功能的疗效和机制分析
3.1 新风胶囊调节AA大鼠体质量、关节和肺功能
3.2 新风胶囊调节AA大鼠细胞因子及氧化应激指标
3.3 新风胶囊调节AA大鼠Notch/Treg信号通路
3.4 新风胶囊调节AA大鼠ROS-PKC/NF-κB信号通路
3.5 新风胶囊调节AA大鼠Notch/Treg通路和ROS-PKC/NF-κB通路的Crosstalk
4 新风胶囊调节AA大鼠肺功能的机制探讨
4.1 整体调节免疫功能，改善肺组织病理损伤
4.2 增强抗氧化能力，清除氧自由基，减轻肺组织氧化损伤
4.3 平衡细胞因子网络，缓解炎症，减轻肺组织免疫炎症
4.4 基于Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路的串话改善肺功能
结论
1 新风胶囊能缓解关节炎症，改善肺功能参数
2 新风胶囊能改善肺组织病理学变化
3 新风胶囊能平衡氧化与抗氧化，减轻氧化应激损伤，从而改善肺功能
4 新风胶囊能平衡细胞因子网络，减轻免疫炎症损伤，从而改善肺功能
5 新风胶囊能调节Notch/Treg信号通路和ROS-PKC/NF-κB信号通路的crosstalk，调节效应免疫细胞，从而改善肺功能
参考文献
综述
参考文献
个人简介
攻读学位期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]604例类风湿关节炎患者的焦虑抑郁情绪及相关性研究[J]. 孙玥,刘健,方利,朱福兵,谈冰,章平衡. 风湿病与关节炎. 2016(09)
[2]新风胶囊对类风湿关节炎患者肺功能的影响[J]. 孙玥,刘健,万磊. 中国中西医结合杂志. 2016(07)
[3]新风胶囊通过调节Keapl-Nrf2/ARE信号通路改善佐剂型关节炎大鼠肺功能研究[J]. 孙玥,刘健,万磊,王芳,齐亚军,郑力. 中华中医药杂志. 2016(05)
[4]Improving Effects of Astragalus Polysaccharides on Cardiac Function via Keap1/Nrf2-ARE Signal Pathway in Adjuvant Arthritis Rats[J]. Yue Sun,Jian Liu,Lei Wan,Fang Wang,Xiao-jun Zhang,Ya-jun Qi. Chinese Herbal Medicines. 2016(02)
[5]基于“性味理论”探讨雷公藤配伍减生殖毒性的研究进展[J]. 许坡,孟楣,张静,唐利宇,江莹,王芳,张贺. 中国药房. 2016(10)
[6]黄芪甲苷抑制慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化和转化生长因子β1的表达[J]. 蒋洪强,张金国. 新医学. 2016(01)
[7]佐剂关节炎大鼠心脏病变与TLR4/NF-κB信号通路活化有关[J]. 汪元,刘健,黄传兵,万磊,曹云祥,王亚黎,孙玥. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(11)
[8]雷公藤甲素对佐剂关节炎肺功能降低大鼠Notch通路受体和配体基因表达的影响[J]. 万磊,刘健,黄传兵,谌曦,汪元,张皖东,刘磊,程园园,冯云霞. 南方医科大学学报. 2015(10)
[9]Efficacy and safety of Xinfeng capsule in patients with rheumatoid arthritis:a multi-center parallel-group double-blind randomized controlled trial[J]. Liu Jian,Wang Yuan,Huang Chuanbing,Xu Jianhua,Li Zhijun,Xu Liang,He Liyun,Sun Yue,Wang Yali,Xu Shengqian,Zhao Ping,Mao Tongjun,Tan Bin,Zhu Fubing,Zhang Pingheng,Fang Li. Journal of Traditional Chinese Medicine. 2015(05)
[10]活性氧介导氧化应激在心血管应激及运动中对心肌线粒体和自噬作用的新进展[J]. 原阳,潘珊珊. 体育科学. 2015(05)
硕士论文
[1]基于Keap1-Nrf2/ARE信号通路探讨中药新风胶囊改善类风湿关节炎心肺功能的机制研究[D]. 孙玥.安徽中医药大学 2014
[2]线粒体氧化应激信号通路参与缺糖缺氧诱导内皮细胞凋亡调控机制研究[D]. 刘璐璐.浙江大学 2010
本文编号：3184064
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
第一部分 RA肺功能降低的国内外研究概况
1 RA肺功能降低的国内外研究现状
1.1 RA患者存在肺功能降低
1.2 Notch/Treg信号通路表达异常致使RA免疫炎症失调
1.2.1 Notch信号通路可调控Treg表达
1.2.2 Treg免疫耐受能力降低可能直接导致免疫炎症产生
1.2.3 Notch信号通路过激活致调控Treg失衡可能是导致RA肺功能降低的机制之一
1.3 ROS介导的PKC/NF-κB通路表达异常致使RA氧化应激失衡
1.3.1 ROS介导的氧化应激损伤可导致氧化应激失衡
1.3.2 ROS-PKC/NF-κB信号通路可调控氧化应激反应
1.3.3 ROS-PKC/NF-κB信号通路过激活致氧化应激失衡可能是导致RA肺功能降低的机制之一
1.4 Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路Cross-talk可能是RA肺功能降低的重要因素
2 RA肺功能降低的中医病机分析
2.1“从脾治痹”理论溯源
2.2“脾虚湿盛，气血亏虚，痰瘀互结”是痹证的重要证候特征
2.3“脾虚湿盛、痰瘀阻肺”是痹证相关肺病的重要病机特点
2.4“益气健脾、化湿通络、培土生金”是痹证相关肺病的重要治疗手段
3. 现代中医对RA肺功能降低的机制研究
3.1 临床实验研究
3.2 动物实验研究
参考文献
第二部分 RA肺功能降低的实验研究
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 药品及试剂
1.2.1 药品
1.2.2 主要试剂
1.2.3 主要仪器设备：
1.3 方法
1.3.1 动物模型复制及给药
1.3.2 大鼠足跖肿胀度、关节炎指数的测算
1.3.3 肺功能检测
1.3.4 关节及肺脏病理观察
1.3.5 ELISA法检测大鼠血清NO、iNOS、HIF-1、NADPH等氧化应激指标的表达
1.3.6 ELISA法检测大鼠血清IL-6、IL-10、IL-17、IL-35、MMP-9、Rantes等细胞因子的表达
1.3.7 流式细胞术检测大鼠外周血CD4~+CD25~+Notch1~+Treg, CD4~+CD25~+Notch3~+Treg.
1.3.8 免疫组化法检测AA大鼠肺组织CD4、FoxP3、PKC、NF-κB表达
1.3.9 荧光定量PCR法检测大鼠肺组织Notch1、delta1、HES1mRNA
1.3.10 Western blot法检测大鼠肺组织Notch4、Jagged1、Jagged2蛋白表达
1.3.11 荧光定量PCR法检测大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB mRNA
1.3.12 Western blot法检测大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB蛋白表达
1.4 统计学处理
2 研究结果
2.1 AA大鼠关节症状、肺功能及新风胶囊对其的影响
2.1.1 AA大鼠体质量、足趾肿胀度和AI变化及XFC对其影响
2.1.2 AA大鼠肺功能变化及XFC对其影响
2.1.3 AA大鼠关节病理形态学变化及XFC对其影响
2.1.4 AA大鼠肺组织病理形态学变化及XFC对其影响
2.2 AA大鼠外周血细胞因子、氧化应激指标变化及新风胶囊对其的影响
2.2.1 XFC对AA大鼠外周血细胞因子的影响
2.2.2 XFC对AA大鼠外周血NO、iNOS、HIF-1、NADPH影响
2.2.3 XFC对AA大鼠外周血CD4~+CD25~+Notch1~+Treg, CD4~+CD25~+ Notch3~+Treg的影响
2.3 AA大鼠肺组织Notch/Treg信号通路变化及新风胶囊对其的影响
2.3.1 AA大鼠肺组织CD4、FoxP3表达变化及XFC的影响
2.3.2 AA大鼠肺组织Notch相关基因表达变化及XFC的影响
2.3.3 AA大鼠肺组织Notch相关蛋白表达变化及XFC的影响
2.4 AA大鼠肺组织ROS-PKC/NF-κB通路变化及新风胶囊对其的影响
2.4.1 AA大鼠肺组织PKC、NF-kB表达变化及XFC的影响
2.4.2 AA大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κBmRNA的表达及XFC的影响
2.4.3 AA大鼠肺组织Rac-1、PKC、NF-κB蛋白的表达及XFC的影响
2.5 AA大鼠肺组织Notch/Treg信号通路和ROS-PKC/NF-κB通路与肺功能参数的关系
2.5.1 AA大鼠肺功能参数与肺组织Notch/Treg通路的关系
2.5.2 AA大鼠肺功能参数与肺组织ROS-PKC/NF-κB通路的关系
2.5.3 AA大鼠肺组织Notch和ROS通路的关系
讨论
1 实验模型和对照药物的选择
2 主要指标的选择意义
2.1 大鼠肺功能参数
2.2 大鼠Notch信号通路相关指标
2.3 大鼠外周血细胞因子
2.4 大鼠ROS-PKC/NF-κB信号通路相关指标
2.5 大鼠外周血氧化应激指标
3 新风胶囊调节AA大鼠肺功能的疗效和机制分析
3.1 新风胶囊调节AA大鼠体质量、关节和肺功能
3.2 新风胶囊调节AA大鼠细胞因子及氧化应激指标
3.3 新风胶囊调节AA大鼠Notch/Treg信号通路
3.4 新风胶囊调节AA大鼠ROS-PKC/NF-κB信号通路
3.5 新风胶囊调节AA大鼠Notch/Treg通路和ROS-PKC/NF-κB通路的Crosstalk
4 新风胶囊调节AA大鼠肺功能的机制探讨
4.1 整体调节免疫功能，改善肺组织病理损伤
4.2 增强抗氧化能力，清除氧自由基，减轻肺组织氧化损伤
4.3 平衡细胞因子网络，缓解炎症，减轻肺组织免疫炎症
4.4 基于Notch/Treg和ROS-PKC/NF-κB信号通路的串话改善肺功能
结论
1 新风胶囊能缓解关节炎症，改善肺功能参数
2 新风胶囊能改善肺组织病理学变化
3 新风胶囊能平衡氧化与抗氧化，减轻氧化应激损伤，从而改善肺功能
4 新风胶囊能平衡细胞因子网络，减轻免疫炎症损伤，从而改善肺功能
5 新风胶囊能调节Notch/Treg信号通路和ROS-PKC/NF-κB信号通路的crosstalk，调节效应免疫细胞，从而改善肺功能
参考文献
综述
参考文献
个人简介
攻读学位期间发表论文情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]604例类风湿关节炎患者的焦虑抑郁情绪及相关性研究[J]. 孙玥,刘健,方利,朱福兵,谈冰,章平衡. 风湿病与关节炎. 2016(09)
[2]新风胶囊对类风湿关节炎患者肺功能的影响[J]. 孙玥,刘健,万磊. 中国中西医结合杂志. 2016(07)
[3]新风胶囊通过调节Keapl-Nrf2/ARE信号通路改善佐剂型关节炎大鼠肺功能研究[J]. 孙玥,刘健,万磊,王芳,齐亚军,郑力. 中华中医药杂志. 2016(05)
[4]Improving Effects of Astragalus Polysaccharides on Cardiac Function via Keap1/Nrf2-ARE Signal Pathway in Adjuvant Arthritis Rats[J]. Yue Sun,Jian Liu,Lei Wan,Fang Wang,Xiao-jun Zhang,Ya-jun Qi. Chinese Herbal Medicines. 2016(02)
[5]基于“性味理论”探讨雷公藤配伍减生殖毒性的研究进展[J]. 许坡,孟楣,张静,唐利宇,江莹,王芳,张贺. 中国药房. 2016(10)
[6]黄芪甲苷抑制慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化和转化生长因子β1的表达[J]. 蒋洪强,张金国. 新医学. 2016(01)
[7]佐剂关节炎大鼠心脏病变与TLR4/NF-κB信号通路活化有关[J]. 汪元,刘健,黄传兵,万磊,曹云祥,王亚黎,孙玥. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(11)
[8]雷公藤甲素对佐剂关节炎肺功能降低大鼠Notch通路受体和配体基因表达的影响[J]. 万磊,刘健,黄传兵,谌曦,汪元,张皖东,刘磊,程园园,冯云霞. 南方医科大学学报. 2015(10)
[9]Efficacy and safety of Xinfeng capsule in patients with rheumatoid arthritis:a multi-center parallel-group double-blind randomized controlled trial[J]. Liu Jian,Wang Yuan,Huang Chuanbing,Xu Jianhua,Li Zhijun,Xu Liang,He Liyun,Sun Yue,Wang Yali,Xu Shengqian,Zhao Ping,Mao Tongjun,Tan Bin,Zhu Fubing,Zhang Pingheng,Fang Li. Journal of Traditional Chinese Medicine. 2015(05)
[10]活性氧介导氧化应激在心血管应激及运动中对心肌线粒体和自噬作用的新进展[J]. 原阳,潘珊珊. 体育科学. 2015(05)
硕士论文
[1]基于Keap1-Nrf2/ARE信号通路探讨中药新风胶囊改善类风湿关节炎心肺功能的机制研究[D]. 孙玥.安徽中医药大学 2014
[2]线粒体氧化应激信号通路参与缺糖缺氧诱导内皮细胞凋亡调控机制研究[D]. 刘璐璐.浙江大学 2010
本文编号：3184064
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